噻嗪类强极性碱性化合物的分离纯化

2020/09/16   下载量： 0 次

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应用领域 制药/生物制药
检测样本 化药制剂
检测项目 含量测定>色谱法
参考标准 噻嗪类

在本应用案例中，样品分子结构中含有噻嗪类母体结构，普通正相硅胶柱或反相C18 柱均不适合对其进行分离纯化，三泰科技的应用工程师利用SepaFlash HILIC ARG柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine成功对其进行了分离，获得了满足纯度要求的目标产物，为此类样品的分离纯化提供了便捷高效的解决方案。

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实验部分

本文中待纯化的样品来自某制药公司，为含有噻嗪类母体结构的碱性化合物，极性较大，但在甲醇、水等常用溶剂中溶解度低，粗品纯度约为81%（HPLC分析结果），其分子结构式示意图参见图1。

图片1.jpg 

图1. 噻嗪类样品分子结构式示意图。

由于样品分子极性较大，在常用正相溶剂中溶解度很低，因此正相分离模式首先被排除。接下来考虑采用反相C18分离柱对其进行分离纯化。为提高样品在水中的溶解度，在样品中加入少量三氟乙酸（TFA）使样品成盐后溶于水中。取适量样品溶液利用注射器上样至Flash分离柱上，样品的Flash分离纯化实验参数如表1所示。

表1. Flash制备纯化实验参数设置

仪器

SepaBean® machine T

色谱柱

12 g SepaFlash® C18反相分离柱

(球形硅胶, 20 - 45 μm, 100 Å, 订货号：SW-5222-012-SP)

120 g SepaFlash® HILIC ARG分离柱

(球形硅胶, 20 - 45 μm, 100 Å, 订货号：SW-5622-120-SP)

检测波长

220 nm, 254 nm

流动相

溶剂A：水 (添加0.1%TFA)

溶剂B：乙腈 (添加0.1%TFA)

流速

 15 mL/min

50 mL/min

进样量

100 mg

500 mg

洗脱梯度

时间 (min)

溶剂B (%)

时间 (min)

溶剂B (%)

0

10

0

70

10.0

90

35.0

0

结果与讨论

样品在普通C18反相柱上的Flash制备图谱如图2所示。分析图2可知，由于样品极性较大，样品在普通C18反相柱上基本没有保留，随着流动相直接从分离柱上被洗脱下来，未能获得有效的纯化。

图片2.jpg 

图2. 样品在C18反相柱上的Flash制备图谱。

众所周知，亲水相互作用色谱（hydrophilic interaction chromatography, HILIC）采用强亲水性的极性固定相，在洗脱过程中流动相中水相比例逐步提高，适合于极性较大的样品的分离纯化。因此，后续考虑采用亲水作用模式对样品进行分离纯化。三泰科技推出的SepaFlash® HILIC ARG分离柱，其填料表面键合有极性很强的Arg基团（参见图3），可以对亲水性化合物样品产生足够的保留作用。样品在HILIC ARG分离柱上的Flash制备图谱如图4所示。分析图4可知，样品在HILIC分离模式下，在分离柱固定相上获得了较好的保留，且粗品中的其他杂质也得到了有效的分离。将收集组分经冻干处理后，经HPLC分析，所得纯化产物的纯度约为95.3%（参见图5），可用于下一步的研究开发。

图片3.jpg 图3. SepaFlash HILIC ARG分离柱填料表面键合相示意图。

图片4.jpg 图4. 样品在HILIC ARG分离柱上的Flash制备图谱。

图片5.jpg 图5. 目标产物的HPLC分析图谱。

因此，对于噻嗪类强极性化合物的制备纯化，SepaFlash® HILIC ARG分离柱配合SepaBean® machine快速液相制备色谱系统，为此类样品的快速分离纯化提供了快捷高效的解决方案。


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文献贡献者

常州三泰科技有限公司
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