低聚糖类样品的纯化制备

2020/09/25   下载量： 0 次

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参考标准 低聚糖，制备纯化

在本应用案例中，样品为极性很强的某合成低聚糖类分子，在普通C18反相柱上保留很弱，此外，其紫外吸收非常弱，不适合利用UV检测器对其进行检测。针对样品的具体性质，三泰科技的应用工程师利用SepaFlash HILIC ARG柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean machine并与外接ELSD检测器联用，成功对样品进行了纯化制备，获得了满足制备需求的目标产物，为极性很强的低聚糖类样品的纯化制备提供了一种可行的方案。

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在本应用案例中，样品为极性很强的某合成低聚糖类分子，在普通C18反相柱上保留很弱，此外，其紫外吸收非常弱，不适合利用UV检测器对其进行检测。针对样品的具体性质，三泰科技的应用工程师利用SepaFlash HILIC ARG柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean machine并与外接ELSD检测器联用，成功对样品进行了纯化制备，获得了满足制备需求的目标产物，为极性很强的低聚糖类样品的纯化制备提供了一种可行的方案。

实验部分

本案例中待纯化的样品来自从事低聚糖应用研究的某大学实验室，为合成低聚糖类化合物，样品中含有聚合程度不同的其他副产物，极性很大，易溶于水，其分子结构式示意图参见图1。

图片1.jpg

图1. 低聚糖类样品分子结构式示意图。

由于样品分子极性很大，易溶于水而在有机溶剂中溶解度很低，因此正相分离模式首先被排除。在反相分离模式中，C18反相分离柱是常用的一种通用分离柱，适合各类极性或非极性样品的分离，因此我们首先考虑利用一根C18反相分离柱尝试对样品进行分离纯化。取少量样品溶于水中，利用注射器上样至Flash分离柱上，样品的Flash分离纯化实验参数如表1所示。

表1. Flash制备纯化实验参数设置

仪器

SepaBean machine T

色谱柱

12 g SepaFlash C18反相分离柱

(球形硅胶, 20 - 45 μm, 100 Å, 订货号：SW-5222-012-SP)

12 g SepaFlash HILIC ARG分离柱

(球形硅胶, 20 - 45 μm, 100 Å, 订货号：SW-5622-012-SP)

检测波长

254 nm, 280 nm, ELSD

流动相

溶剂A：水

溶剂B：乙腈

流速

30 mL/min

进样量

30 mg

洗脱梯度

时间 (CV)

溶剂B (%)

时间 (CV)

溶剂B (%)

0

10

0

95

15.0

90

8.0

80

/

/

15.0

80

23.0

53

25.0

53

32.0

25

37.0

25

结果与讨论

样品在普通C18反相柱上的Flash制备图谱如图2所示。分析图2可知，由于样品极性较大，样品在普通C18反相柱上基本没有保留，随着流动相直接从分离柱上被洗脱下来，未能获得有效的纯化。此外，从Flash制备图谱也可以看出，样品在紫外波段没有吸收信号，必须利用外接的ELSD检测器才能检测到样品的信号。

图片2.jpg

图2. 样品在C18反相柱上的Flash制备图谱。

    基于普通C18反相柱对样品没有保留的实验结果，接下来我们考虑采用亲水相互作用色谱（hydrophilic interaction chromatography, HILIC）模式对样品进行分离纯化。HILIC分离模式采用强亲水性的极性固定相，如三泰科技推出的SepaFlash HILIC ARG分离柱，其填料表面键合有极性很强的Arg基团（参见图3），可以对亲水性化合物样品产生足够的保留作用。在HILIC分离模式下，流动相中水相比例在洗脱过程中逐步提高，因此适合于极性较大的样品的分离纯化。我们利用一根SepaFlash HILIC ARG分离柱对样品进行了分离纯化，Flash制备图谱如图4所示。分析图4可知，样品在HILIC ARG分离柱上获得了有效的保留，目标产物与副产物等杂质分离度良好。对收集组分进行TLC点板确认，采用浓硫酸/甲醇（V:V=1:5）作为显色剂，利用热风枪对TLC板烘烤15 min后，样品点的显色结果如图5所示，确认目标产物已经从副产物等杂质中有效地分离，可以应用于下一步研究开发中。

图片3.jpg

图3. SepaFlash HILIC ARG分离柱填料表面键合相示意图。

图片4.jpg

图4. 样品在HILIC ARG分离柱上的Flash制备图谱。

图片5.jpg

图5. 粗品及收集组分的TLC点板实验结果。

因此，对于极性很大且无紫外吸收的低聚糖类样品的纯化制备，SepaFlash HILIC ARG柱配合配置有ELSD检测器的快速液相制备色谱系统SepaBean machine，为此类样品的快速制备纯化提供了一种可行的方案。

关于SepaFlash HILIC ARG分离柱系列产品

三泰科技推出的SepaFlash HILIC ARG分离柱系列产品具有多种规格（参见表2）。

表2. SepaFlash HILIC ARG分离柱参数

（填料:High-efficiency spherical ARG, 20 – 45 μm, 100 Å）

Item Number

Column Size

Sample Size

Max.Pressure

(psi/bar)

SW-5622-004-SP

5.4 g

5.4 mg – 108 mg

400/27.5

SW-5622-012-SP

20 g

20 mg – 0.40 g

400/27.5

SW-5622-025-SP

33 g

33g – 0.66 g

400/27.5

SW-5622-040-SP

48 g

48 mg – 0.96 g

400/27.5

SW-5622-080-SP

105 g

105 mg – 2.1 g

350/24.0

SW-5622-120-SP

155 g

155 mg – 3.1 g

300/20.7

SW-5622-220-SP

300 g

300 mg – 6.0 g

300/20.7

SW-5622-330-SP

420 g

420 mg – 8.4 g

250/17.2

如需进一步了解SepaBean machine的详细规格信息，或配套使用的Flash纯化柱订购信息，请访问ChemBeanGo在线商店：https://store.chembeango.com/。


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文献贡献者

常州三泰科技有限公司
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