方案摘要
方案下载| 应用领域 | 生物产业 |
| 检测样本 | 其他 |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | 多肽，分离纯化 |
常见的组成多肽的氨基酸有20种，根据其极性和酸碱性可以分为以下几组：非极性（疏水）、极性（不带电荷）、酸性以及碱性（参见图1）。在一条多肽序列中，如果组成该多肽的氨基酸大多为极性氨基酸（图1中粉红色标出部分），如半胱氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等，那么该多肽可能具有较强的极性，易溶于水。在对该类强极性多肽样品的反相色谱制备纯化过程中，若采用普通的C18分离柱，将会发生疏水坍塌现象（具体请参见三泰科技之前发布的应用案例——《疏水坍塌与AQ反相色谱柱的应用》）。而改良后的C18AQ柱可以很好的适用于强极性或强亲水性样品的分离纯化，在本案例中，利用某强极性多肽作为样品，在C18AQ柱上进行了分离纯化，获得了可用于下一步研究的目标产物。
实验部分
本文中所用样品为客户实验室提供的分子量1kD的合成多肽，其氨基酸序列中含有多个极性氨基酸残基，因此样品具有很强的极性，粗品纯度约为80%。取60mg白色粉末状粗品固体，溶于5 mL纯水中，超声使样品完全溶解为澄清透明溶液。利用注射器将样品溶液上样至Flash分离柱上，样品的Flash分离纯化实验参数如表1所示。
表1. Flash制备纯化实验参数设置
仪器 | SepaBeanTM machine 2 | |||
色谱柱 | 12 g SepaFlash® C18反相分离柱 (球形硅胶, 20 - 45 μm, 100 Å, 订货号：SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash® C18AQ反相分离柱 (球形硅胶, 20 - 45 μm, 100 Å, 订货号：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
检测波长 | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
流动相 | 溶剂A：水； 溶剂B：乙腈 | |||
流速 | 15 mL/min | 20 mL/min | ||
进样量 | 30 mg | |||
洗脱梯度 | 时间 (CV) | 溶剂B (%) | 时间 (min) | 溶剂B (%) |
0 | 0 | 0 | 4 | |
1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
/ | / | 20.0 | 38 | |
22.0 | 87 | |||
29.0 | 87 | |||
结果与讨论
为了比较普通C18分离柱与C18AQ柱对极性多肽样品的分离纯化效果，我们首先利用普通C18分离柱对样品进行了Flash制备纯化实验，分离图谱如图2所示。分析图2可知，由于高比例水相造成的固定相疏水坍塌，多肽样品在普通C18柱上基本没有保留，直接被流动相洗脱下来，因此没有得到有效的分离纯化。
图2. 样品在普通C18分离柱上的Flash纯化色谱图。
接下来我们利用C18AQ柱对样品进行了Flash制备纯化，分离图谱如图3所示。分析图3可知，多肽样品在C18AQ柱上获得了有效地保留，粗品中的杂质也得到了有效地分离。将收集组分进行冻干处理后，经HPLC分析，所得纯化产物的纯度约为98.2%，可以用于下一步的研究开发。
图3. 样品在C18AQ分离柱上的Flash纯化色谱图。
因此，对于强极性或亲水性很强的样品的分离纯化，SepaFlash® C18AQ反相分离柱配合SepaBean® machine快速液相制备色谱系统，为此类样品的快速分离纯化提供了快捷高效的解决方案。
关于SepaFlash® C18AQ反相分离柱系列产品
三泰科技推出的SepaFlash® C18AQ反相分离柱系列产品具有多种规格（参见表2）。
表2. SepaFlash® C18AQ反相分离柱参数
（填料:High-efficiency spherical C8(AQ), 20 – 45 μm, 100 Å）
Item Number | Column Size | Flow Rate (mL/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
文献贡献者
SepaFlash® Phenyl 色谱柱在苯二氮卓类药物化合物的分离纯化
应用于糖类化合物的分离纯化
应用于含硼有机光电材料领域分离纯化
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