方案摘要
方案下载| 应用领域 | 石油/化工 |
| 检测样本 | 其他 |
| 检测项目 | 组成分析 |
| 参考标准 | 纯化谱图 |
在样品纯化过程中你是否遇到过五花八门的难点，这个问题对于做制备纯化的小孙来说有太多值得吐槽的地方，如样品极性太小正相模式不保留、样品极性太大硅胶固定相洗脱不下来、样品溶解度太差纯化过程析出或拖尾严重及洗脱不下来等情况。在分离纯化的过程中，难免会碰到溶解性比较差的物质，这类物质有时会对分离纯化造成一些负面的影响，如由于拖尾而影响分离度，甚至是直接析出导致管路堵塞，或者少量试剂不能完全溶解至澄清，而样品纯化之前一定要有解决溶解度的办法，否则带着问题上样纯化效果一定不会很理想。解决样品溶解度的问题没有固定答案，具体样品需要具体分析，本文主要和大家分享小孙在纯化过程中如何处理溶解度较差的样品。
在样品纯化过程中你是否遇到过五花八门的难点，这个问题对于做制备纯化的小孙来说有太多值得吐槽的地方，如样品极性太小正相模式不保留、样品极性太大硅胶固定相洗脱不下来、样品溶解度太差纯化过程析出或拖尾严重及洗脱不下来等情况。在分离纯化的过程中，难免会碰到溶解性比较差的物质，这类物质有时会对分离纯化造成一些负面的影响，如由于拖尾而影响分离度，甚至是直接析出导致管路堵塞，或者少量试剂不能完全溶解至澄清，而样品纯化之前一定要有解决溶解度的办法，否则带着问题上样纯化效果一定不会很理想。解决样品溶解度的问题没有固定答案，具体样品需要具体分析，本文主要和大家分享小孙在纯化过程中如何处理溶解度较差的样品。主要常用以下几种方法：
1、加助溶试剂
解决溶解度问题最根本的是要找到样品最合适的溶解试剂，但是有时能溶解样品的试剂不适应于样品的分离模式。
如某样品极性很小，乙腈易溶解，但因极性太小在反相柱中不易洗脱，正相模式下正己烷-乙酸乙酯体系不能完全溶解样品导致拖尾致使样品没有分离度。最终解决办法添加第三路管路10%乙腈，虽然乙腈和正己烷不互溶，但是添加的10%乙腈解决了部分样品的溶解度问题，最终纯化结构是能提纯到一半纯品，一半交叉，回收交叉部分按此方法可继续纯化。
2、用极性相近的试剂置换
反相纯化时除了非水反相，其他体系如甲醇-水/乙腈-水等都会使用到水，但是很多样品用有机试剂溶解后遇水会析出，这种情况下即使可以正常实验也会使峰形拖尾或导致分离度降低，甚至有的样品会直接析出结块导致仪器超压不能运行等情况。
三泰科技的应用实验人员也遇到过上述情况，样品析出情况严重，如何解决这个问题，经过试验发现可以用一种有机试剂代替水相运行即甲酰胺，甲酰胺相对极性7.3，可以与水、甲醇等互溶，可以上样时临时代替水润柱，上样后就不会有析出的情况，甲酰胺在反相体系中没有洗脱能力，极性和水较相近可以代替水运行实验，考虑到成本问题成功运行后可以再用水置换过来。
3、等度洗脱
当样品在一方流动相中有溶解度时，可以考虑在最合适的分离度的情况下等度洗脱，不需要从低比例慢慢加，减少析出的情况，案例如下：
待分离物质是一种卟啉类化合物的分离过程，该化合物溶解性稍差。通过TLC点板（图1）精确筛选流动相比例的过程中发现，当二氯甲烷的比例低于50%极易拖尾，且各组分之间没有明显的分离度，可能是由于此时二氯甲烷比例偏低，导致溶剂体系的溶解性降低，故拖尾严重；当二氯甲烷高于50%时，各组分之间有一定的分离度，且无明显拖尾现象，但Rf偏大。
图1.从左至右二氯甲烷比例依次增大，左三为50%
综合上述信息，我们决定采用等度淋洗，控制流动相恒定在正己烷：二氯甲烷=1：1。因为此时Rf仍偏大，故在分离过程中，还需要使上样量/硅胶量保持在1/100左右，而且适当降低流速，这些措施都能有效提高各组分之间的分离度。具体分离条件见下表1。
表1. 样品的制备参数设置
仪器 | SepaFlash® machine U200 | |
色谱柱 | 120g SepaFlash® 标准正相硅胶柱 | |
检测波长 | 254nm，280nm | |
上样量 | 1.2g | |
流动相 | 溶剂A：正己烷（含0.3%三乙胺） 溶剂B：二氯甲烷 | |
流速 | 20 mL/min | |
洗脱梯度 | CV | 溶剂B/% |
0 | 50 | |
45 | 50 | |
分离结果 | 各组分均得到比较好的分离 | |
按照上述分离条件，最终得到六个不同的组分（图2）第六个峰位于42 CV附近，通过TLC初步鉴定（图3），均为纯的化合物。
图2. 分离的色谱图
图3.分离前后对比点板（前四个产物）
上述3种方法是三泰科技技术人员遇到的样品纯化解决方案个例，相信大家在纯化时也会遇到这种情况，欢迎大家与我们分享解决方案。
文献贡献者
SepaFlash® Phenyl 色谱柱在苯二氮卓类药物化合物的分离纯化
应用于糖类化合物的分离纯化
应用于含硼有机光电材料领域分离纯化
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