小鼠碘[125I]胰岛素放射免疫分析药盒说明书
【名称】
通用名称:小鼠碘[125I]胰岛素放射免疫分析药盒
英文名称:MOUSE Iodine[125I]Insulin Radioimmunoassay Kit
汉语拼音:XIAO SHU Dian [125I]Yidaosu Fangshemianyifenxi Yaohe
【成分】
规格
成分
100管
50管
制品状态
Ins.标准品(S1~S5)
5瓶
5瓶
冻干品
125I-Ins.(红色)
1瓶
1瓶
冻干品
Ins.缓冲液
1瓶/40ml
1瓶/40ml
液 体
豚抗-Ins.抗体(蓝色)
1瓶
1瓶
冻干品
驴抗豚免疫分离剂
1瓶/50ml
1瓶/25ml
液 体
Ins.质控血清
2瓶
2瓶
冻干品
【性状】液体组分(免疫分离剂除外)应澄清,无沉淀或絮状物;冻干组分应成疏松状,复溶后应无沉淀或絮状物。
【放射性核素半衰期】本品所用核素为碘[125I],其物理半衰期(T?)为60天。
【临床意义】
胰岛素(Insulin,简称Ins.),是由胰岛β细胞合成其前体,经加工后分泌的蛋白质激素,它由51个氨基酸组成α、β两条肽链,通过两个二硫键连结在一起,分子量为5734D。不同种属动物的胰岛素与人胰岛素结构略有不同,猪胰岛素结构与人的最相似,只是在β链上的最后一个氨基酸不同,因此两者在免疫分析中有明显的交叉反应。
胰岛素是促进合成的激素,主要作用是促进葡萄糖的氧化和糖原生产,抑制糖原异生,从而维持血糖恒定。胰岛素缺乏时,血糖浓度升高,可超过肾糖阈,发生依赖胰岛素糖尿病。
本药盒用于小鼠血清或血浆中胰岛素含量的测定,主要用于对胰岛β细胞的分泌功能和糖尿病的研究,确定糖尿病的类型;对胰岛素瘤的诊断,探讨冠心病机理,研究某些药物对糖代谢的影响以及内分泌紊乱疾病等都有一定的意义和价值。
【测定原理】
利用均相竞争抑制原理,采用平衡竞争法对血清或血浆进行直接测定。标准或样品中的Ins.和标记抗原共同与限量的特异性抗体进行竞争性免疫反应。当样品中Ins.浓度较高时,与抗体结合的标记抗原就少,反之,亦然。用免疫分离剂分离出抗原-抗体复合物,并测定结合物中的放射性。因标记抗原的结合量与样品中Ins.呈一定的函数关系。因此,通过数学处理就能计算出样品中的Ins.浓度。
【适用仪器】适用于各类ν-放射免疫分析仪。
【样本要求】
取静脉血分离血清,待测;血浆则需加入抗凝剂,混匀,分离血浆后,待测;如不立即测量,可将样品密封后,置于2~8℃或-20℃储存备测,2~8℃保存不应超过1周,-20℃保存不超过2个月。冰冻样品在保存过程中应避免反复冻融。冰冻样品测定前,讲样品置于室温或常温水中融化,并充分摇匀。
【用法用量】
1 试剂配制、使用方法和保存
(1)Ins.标准品:冻干品,向每瓶标准品中准确地加入1ml缓冲液溶解。溶解15分钟后摇匀方可适用。溶解后各标准浓度值分别为5,15,45,135,405μIU/ml。标准复溶后2~8℃保存可稳定42天,冻干品-20℃保存有效期内稳定。
(2)125I-Ins.:冻干品,100管规格用10ml缓冲液溶解,50管规格用5ml缓冲液溶解。2~8℃保存,有效期内稳定。如一次加样超过100管,两瓶混合后使用。100管标记物放射性不大于111 KBq(3μCi)。
(3)豚抗-Ins.抗体:冻干品,用缓冲液溶解,每瓶抗体加6ml(如不填写100T加10ml,50T加5ml缓冲液溶解)。抗体溶解后2~8℃保存可稳定42天,冻干品-20℃保存有效期内稳定。
(4)驴抗豚免疫分离剂:液体,加样前必须摇匀!2~8℃保存,有效期内稳定。开封后42天内稳定。
(5)Ins.缓冲液:液体,2~8℃保存,有效期内稳定。开封后42天内稳定。
(6)Ins.质控血清:冻干品,使用前向每瓶质控血清中准确加入0.5ml蒸馏水溶解。复溶后2~8℃保存可稳定42天,冻干品-20℃保存有效期内稳定。有效期及附值,详见质控血清适用说明书。
2 测定步骤
取圆底聚苯乙烯试管若干,用记号笔或特殊铅笔编号NSB、S0~S5和待测样品管等,然后用微量加样器按下表加样。加样前所有试剂(尤其分离剂!)包括待测样品要摇匀,并且最好平衡到室温。
加样程序表 单位:μl
管别
试剂
总T
NSB
S0
S1~S5
待测样品
Ins.缓冲液
—
200
100
—
—
Ins.标准品(S1~S5)
—
—
—
100
—
质控或待测样品
—
—
—
—
100
豚抗-Ins.抗体
—
—
100
100
100
125I-Ins.
100
100
100
100
100
混匀,37℃温育2小时。
驴抗豚免疫分离剂
—
500
500
500
500
充分摇匀,室温放置15分钟,3500转/分钟离心15分钟,吸弃上清,测各沉淀管的放射性计数(cpm)。
3 数据处理
(1) 联机处理:由电脑自动处理得出结果。注意放射免疫方法和免疫放射方法由于原理不同,处理软件也不一样,用户一定要使用适合的处理软件进行数据处理。在此建议用户使用logit-log或四参数数据处理模式。
(2) 手工作图或计算器处理:
1). 百分结合率计算:设S0管计数为B0,各标准管或样品管计数为B,非特异管计数为NSB,则百分结合率计算公式为:B/ B0=(B-NSB)/( B0-NSB)×100%
2). logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式为:logit=ln(B/ B0)/(1-B/ B0)
3). 手工作图:以标准浓度取log值为横坐标,对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标,对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线(理想化时是一条直线)。根据待测样品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。注意:如果使用普通坐标纸,查出的数值应取反对数才是最后的浓度值。
4). 计算器处理:使用有线性拟合功能的计算器,可以比较方便地计算出样品浓度值,具体操作方法请查阅计算器的使用说明书。
标准曲线举例(仅供参考,不得用于实际计算)。 浓度单位:μIU/ml
项目
NSB
0
5
15
45
135
405
浓度值(ng/ml)
0
0.25
0.5
1
3
6
百分结合率(%)
B/T
B/B0
2
80
87
73
51
28.2
12.8
logit-log
主要曲线参数
A=3.33 B=-2.01 R=-0.9999
ED75=12.93 ED50=45.62 ED25=161.01
【参考正常值】
空腹血清胰岛素参考正常值:14.0±8.7μIU/ml,范围5~25μIU/ml。
餐后血清C-P峰值约为空腹时的5倍,峰值一般出现在餐后30~60分钟(与进食食品种类有一定关系),3小时后接近空腹值。
单位换算:本批Ins.标准抗原,1mg=25IU
由于地区及使用仪器不同,所测的正常值会存在一定的差异,所以本说明书提供的正常值仅作参考,各实验室最好能建立符合本实验室要求的正常值范围。
【产品性能指标】
1. 测定范围:5~405μIU/ml。
2. 灵敏度:2μIU/ml。
3. 精密度:批内变异系数(CV)<10%;批间变异系数(CV)<15%。
4. 使用期限:见产品外包装。
【禁忌】本品仅供体外科研实验用!
【注意事项】
1. 收到试剂盒后,尽快存放在2~8℃。
2. 使用前请详细阅读此说明书。
3. 不同药盒或不同月份的同种药盒的组分不得混用。
4. 吸弃上清液时,注意不得损失沉淀物,否则将明显影响测定结果。
5. 当样品中Ins.浓度高于405μIU/ml时,可将样品用缓冲液稀释5-10倍后复测,测定浓度乘以稀释倍数即为样品的浓度。
6. 药盒请在有效期内使用。
7. 临床标本均应视为有潜在传染性,请按传染病实验室规程操作。
8. 使用本药盒应注意放射防护,放射性废弃物须按放射防护条例规定处理。
9. 使用本品的操作人员应经过专业技术培训。
【孕妇及哺乳期妇女用药】由于本品仅供体外诊断用,儿童不需接触本品,所以对其健康无损害。
【贮藏】2~8℃保存。
【有效期】1个月。
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