方案摘要
方案下载| 应用领域 | 食品/农产品 |
| 检测样本 | 乳粉 |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | GB 5009.284 -2021 |
GB 5009.284 -2021《食品安全国家标准 食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定》于2022.03.07正式实施，同时此方法在食品安全监督抽检实施细则（2022年版）中同时进行了更新。 本方法采用Copure® HLB SPE Cartridge柱，测试了婴儿营养米粉中的香兰素和乙基香兰素，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的SPE-HPLC-MS/MS方法，可供参考。
Copure® HLB 食品中香兰素、乙基香兰素的测定
GB 5009.284 -2021《食品安全国家标准 食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定》于2022.03.07正式实施，同时此方法在食品安全监督抽检实施细则（2022年版）中同时进行了更新。
本方法采用Copure® HLB SPE Cartridge柱，测试了婴儿营养米粉中的香兰素和乙基香兰素，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的SPE-HPLC-MS/MS方法，可供参考。
1、 样本前处理
1. 样品提取
称取1.00 g 试样，加入10μL内标混合中间液（D3-香兰素及D5-乙基香兰素均为10mg/L），加入10mL水和480μL盐酸溶液，涡旋振荡l min，加入20mL乙睛，涡旋振荡1 min，超声提取30min后，加入5g氯化钠，涡旋振荡2 min。8000r/min离心5 min，取上清液至玻璃试管，待净化。
2. 萃取、净化与浓缩（Copure® HLB，30mg/6mL）
将得到的上清液于40℃氨吹至近干，加入1mL甲醇溶解残渣，用水定容至10mL，使该样液以小于1mL/min的流速通过固相萃取柱（使用前用 3 mL甲醇、3 mL水活化）。样液全部流出后，用5mL水淋洗，负压抽干，10 mL甲醇-水溶液（4+1）洗脱，负压抽干，收集洗脱液，40℃氨吹至近干，准确加入1 mL甲醇-水（4+1）溶液溶解残渣，过0.22um微孔滤膜后，待测。
3. 标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液（香兰素及乙基香兰素均为10mg/L）、内标混合中间液（D3-香兰素及D5-乙基香兰素均为10mg/L）适量，用甲醇-水（4+1）溶液稀释成 20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL的系列标准工作液，内标的浓度均为0.1mg/L，临用现配，上机测定。
2、 仪器条件
仪器设备：液相色谱串联质谱仪 (Aglient 1290-6470 LC-MS QQQ)
色谱柱 | 安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18，规格：2.1×100mm，1.8μm | ||
离子源 | AJS-ESI | 流速（mL/min） | 0.3 |
柱温（℃） | 40 | 进样体积（L） | 5 |
流动相梯度：
时间（min） | A泵：0.5%甲酸溶液 | B泵： 乙腈 （%） |
0.00 | 65 | 35 |
5.00 | 55 | 45 |
5.01 | 10 | 90 |
8.00 | 10 | 90 |
8.01 | 65 | 35 |
12.00 | 65 | 35 |
质谱条件：
检测方式：多反应离子监测 (MRM)
干燥气温度（℃） | 250 | |
干燥气流量（L/min） | 7 | |
雾化器压力（psi） | 30 | |
鞘气温度（℃） | 325 | |
鞘气流量（L/min） | 11 | |
毛细管电压（V） | 正模式 | 负模式 |
3500 | 3000 | |
喷嘴电压（V） | 正模式 | 负模式 |
0 | 500 | |
质谱参数
组分名称 | 母离子 | 子离子 | 驻留时间 | 传输电压 | 碰撞能量 | 加速电压 | 模式 |
香兰素 | 153.0 | 65.2* | 80 | 111 | 29 | 3 | 正模式 |
93.2 | 80 | 111 | 13 | 3 | 正模式 | ||
乙基香兰素 | 167.1 | 110.9* | 80 | 111 | 5 | 3 | 正模式 |
92.9 | 80 | 111 | 45 | 3 | 正模式 | ||
D3-香兰素 | 156.2 | 65.0 | 80 | 106 | 55 | 3 | 正模式 |
D5-乙基香兰素 | 172.0 | 93.1 | 80 | 106 | 21 | 3 | 正模式 |
注：*为定量离子。
3、 实验结果
表 1 营养米粉中香兰素的加标回收实验结果
检测项目 | 加标水平（mg/kg） | 平均回收率（%） | RSD（%） |
香兰素 | 0.05 | 92.2 | 1.91 |
0.5 | 90.9 | 0.42 | |
2.0 | 91.8 | 0.28 |
表 2 营养米粉中乙基香兰素的加标回收实验结果
检测项目 | 加标水平（mg/kg） | 平均回收率（%） | RSD（%） |
乙基香兰素 | 0.05 | 84.8 | 1.13 |
0.5 | 94.9 | 0.28 | |
2.0 | 94.15 | 1.06 |
4、 订购信息
货号 | 描述 | 包装 |
COHLB360 | Copure® HLB固相萃取柱，30mg/6mL | 50支/盒 |
SDC-3000-D | biocomma® 多管涡旋混匀仪 | 1台/箱 |
SF130-22-NL | 尼龙针式过滤器，直径13 mm，孔径0.22 μm，有机系 | 100个/盒 |
SC2-1 | 2 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425 | 100个/盒 |
V2-AL | 2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425 | 100个/盒 |
文献贡献者
Copure® PWAX | GB 5009.35-2023糖果和水果罐头中11种合成着色剂的测定
Copure® | 鸭肉中利福平、阿奇霉素残留的测定（液相色谱-串联质谱法）
玉米粉中玉米赤霉烯酮含量的测定 （Copure® 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱）
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