糖果null检测 | Copure® PWAX | GB 5009.35-2023糖果和水果罐头中11种合成着色剂的测定-深圳逗点生物技术有限公司

方案摘要

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应用领域	食品/农产品
检测样本	糖果
检测项目
参考标准	GB 5009.35-2023

合成着色剂是指人工化学合成方法所制成的有机色素，因其色彩鲜艳、着色力强、稳定性好、生产成本低等特点广泛应用于食品工业，但有些生产企业为了改良食品感观色泽，超限量、超范围使用合成着色剂，可能会对人体肝脏产生一定影响。

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配置单

智能水浴氮吹
型号： BN24

¥5.98万
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Biocomma 多管涡旋混匀仪SDC-3000-D-15
型号：SDC-3000-D-15

¥2.88万
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方案详情

糖果和水果罐头中11种合成着色剂的测定

（Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱）

《GB 5009.35-2023食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》

合成着色剂是指人工化学合成方法所制成的有机色素，因其色彩鲜艳、着色力强、稳定性好、生产成本低等特点广泛应用于食品工业，但有些生产企业为了改良食品感观色泽，超限量、超范围使用合成着色剂，可能会对人体肝脏产生一定影响

逗点生物结合自身产品优势，按照国标建立了固相萃取-高效液相色谱法测定硬糖和水果罐头中11种合成着色剂含量的方法，样品经乙醇胺水提取后，经PWAX混合型弱阴离子交换柱净化，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证，11种合成着色剂在0.2 μg/mL到20 μg/mL范围内线性良好，R^2>0.995，加标回收率在80%-100 %范围内，符合测试需求。

1、样本前处理

1.1样品提取

准确称取试样2 g（精确至0.001 g），置于50 mL离心管中，先加人适量水(2 mL~5 mL)50 ℃水浴超声融化样品，再加入25 mL乙醇氨水溶液，涡旋1 min，50℃超声提取20 min，8000 转/分钟离心5 min，取上清液置于50 mL离心管中，残渣中再加入5 mL~10 mL乙醇氨水溶液重复提取至上清液无明显颜色，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，即得提取液。准确吸取提取液10 mL，50℃氮气浓缩至2 mL左右，分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，调节pH至6.0左右，作为待净化液。

注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇700 mL，加入4 mL氨水，用水稀释并定容至1 L，混匀。

1.2试样的净化浓缩

先依次用6 mL甲醇和6 mL水活化PWAX固相萃取柱（150 mg/6 mL），保持柱体湿润，将待净化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，弃去流出液。再依次用6 mL 2%甲酸水和6 mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。最后用6 mL 2%氨化甲醇洗脱，分两次加入，收集洗脱液，于50 ℃氮吹至近干。准确加入2 mL pH=9的乙酸铵溶液溶解，过0.22 μm 亲水PTFE滤膜，弃去2~5滴初滤液，取续滤液作为待测液。

1.3空白实验

1.3.1过程空白：取一支洁净的50 mL离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。

1.3.2空白本底实验

称取试样2 g（精确至0.001 g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。

2、标准系列工作液

分别精密移取11种着色剂混标中间液（100μg/mL）0.02 mL、0.05mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻线，摇匀，得标准系列工作液。浓度分别为0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL和20.0 μg/mL。

3、仪器条件

仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪

色谱柱：Commasil® C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)

流动相：A：20 mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇

洗脱方式：梯度洗脱，见表1

流速：1 mL/min

柱温：30 ℃

进样量：10 μL

检测器：紫外检测器

检测波长：415 nm、520 nm、610 nm

表1 梯度洗脱程序

时间/min	A/%	B/%
0.00	90	10
12.0	65	35
19.0	55	45
22.5	50	50
23.0	45	55
24.0	35	65
34.0	35	65
35.0	90	10
42.0	90	10

4、实验结果

4.1 加标回收

表2 糖果中加标浓度0.5 g/kg竞品比对结果

化合物	平均回收率（%）n=2
化合物	Copure®	A品牌
柠檬黄	96.6	97.5
喹啉黄	93.3	93.2
新红	98.1	97.8
苋菜红	97.6	97.9
胭脂红	97.0	98.2
日落黄	90.2	91.3
诱惑红	98.1	98.0
酸性红	96.0	98.9
赤藓红	96.0	96.8
靛蓝	93.6	94.6
亮蓝	96.5	97.8

图1 加标浓度为0.5 g/kg时糖果中11种合成着色剂液相色谱图

表1 水果罐头中加标浓度0.1 g/kg竞品比对结果

化合物	平均回收率（%）n=2
化合物	Copure®	A品牌
柠檬黄	97.7	98.4
喹啉黄	91.5	92.3
新红	97.5	98.2
苋菜红	96.2	97.4
胭脂红	95.3	95.7
日落黄	98.1	99.4
诱惑红	98.8	98.9
酸性红	97.8	96.7
赤藓红	84.4	84.5
靛蓝	89.1	89.2
亮蓝	96.5	96.2

图1 加标浓度为0.1 g/kg时水果罐头中11种合成着色剂液相色谱图

5、注意事项

1.标准储备液：固体标物加水溶解，4°C下避光保存6个月。靛蓝标准溶液临用现配。

2.糖果样品提取时需要加2-5mL水将其融化，提取次数可根据提取液颜色变化而定。

3.过柱前测下样液的pH值，调节至6.0，因为PWAX属于混合型弱阴离子交换反相吸附柱，上样时需要酸性条件。

4.收集洗脱液玻璃氮吹管，可使氮吹时间减半。

5.50°C氮气浓缩至近干，准确加入2 mLpH为9.0的乙酸铵缓冲溶液复溶，酸性条件下赤藓红回收率低。

6. 上机之前过滤所用的滤膜不得使用尼龙滤膜，因为尼龙的化学成分是聚酰胺，会吸附合成着色剂，要用亲水PTFE。

货号	描述	包装
COPWAX6150	Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱，150 mg/6 mL	30支/盒
SDC-3000-D	biocomma® 多管涡旋混匀仪	1台/箱
BN24	24孔智能水浴氮吹仪	1台/箱
SF130-22-PTFE-HL	PTFE针式过滤器直径13mm，孔径0.22 μm，有机系	100个/盒
SC2-1	2 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425	100个/盒
V2-AL	2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425	100个/盒

六、订购信息

文献贡献者

深圳逗点生物技术有限公司

金牌会员丨第6年

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