hCMEC-D3；永生化人脑微血管内皮细胞生物体

细胞名：hCMEC-D3；永生化人脑微血管内皮细胞生物体

细胞别名：hCMEC-D3细胞；永生化人脑微血管内皮细胞 永生化人脑微血管内皮细胞；hCMEC-D3细胞

生物安全水平：1

培养基&血清：见培养条件

生物体：人类（人）

来源：器官：大脑

细胞接收后的操作流程与注意事项：

1、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决

2、贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度（最高不能超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养

3、生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养

细胞常规培养传代流程hCMEC-D3；永生化人脑微血管内皮细胞生物体（请严格遵照无菌操作）

1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）

2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散

3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养

4、注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

特别注意：（如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）

1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）

2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养

3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室

培养环境：95%空气；5%二氧化碳（CO2）

温度：37.0℃

保存：冻存血清：90%完全培养基；10%二甲基亚砜（DMSO）

储存温度：液氮

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