利用Archimed定量PCR进行核酸熔解曲线分析

2019/10/12   下载量： 1 次

方案摘要

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应用领域 生物产业
检测样本 其他
检测项目
参考标准 熔解曲线峰值是否为单峰，证明核酸扩增产物特异性

使用Archimed时间分辨荧光定量PCR系统对核酸PCR进行扩增，并对扩增产物进行熔解曲线分析其特异性。 应用手册内容涵盖整体操作流程，如软件操作，数据分析，以及注意事项等。

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熔解曲线是指随温度升高 DNA 的双螺旋 结构降解程度的曲线。总的 DNA 双螺旋结构降解一半的温度称为 熔解温度Tm DNA双链解链50%的温度），不同长度及碱基组成的DNA Tm值不同。DNA中GC含量越高，Tm 值越高，成正比关系。 熔解曲线分析可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。扩增反应完成后，通过逐渐增加温度同时监测每一步的 荧光信号来产生熔解曲线，熔解温度上有一 特征峰用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，因为它们在不同的温度熔解线，随着反应中双链DNA变性，荧光染料 又恢复到游离状态导致荧光信号降低，用荧光信号改变与温度作图 获得熔解曲线图谱。在定量PCR实验中，由于染料法的特异性较差，因此进行染料法实验时经常 需要 通过 熔解 曲线 来 考察扩增产物是否是目标产物。

    核酸熔解曲线常用来:

    ✓ 区分特异性与非特异性产物（引物二聚体）

    ✓ 确定目标基因的 Tm 值

利用Archimed荧光定量PCR进行核酸熔解曲线实验的一般步骤：

1.png

1. 创建实验： 点击启动界面右下方“创建”按钮，或者通过菜单栏选择“创建”，可以创建全新的实验流程；选择实验类型：根据实际使用的实验类型进行选择，这里选择熔解曲线


2. 设置反应条件： 实验属性设置完成后，点击页面左侧的运行条件或者右下角的下一步，进入运行条件设置界面

3. 设置孔板： 运行条件设置完成后，点击页面左侧孔板设置或者右下角的下一步，进入孔板设置界面。根据实际反应管放置的相应孔位选择反应孔，对样本及检测项目进行相应属性设置，并勾选分配至对应孔位中，待测样品孔位将显示相应设置属性

4. 运行实验： 运行条件或孔板设置完成后，点击页面左侧实验运行或右下角的下一步，进入仪器运行界面


5. 软件分析结果展示：

2.png







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文献贡献者

鲲鹏基因（北京）科技有限责任公司
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