利用Archimed定量PCR进行绝对定量（标准曲线法）

2019/10/15   下载量： 0 次

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应用领域 生物产业
检测样本 其他
检测项目
参考标准 标准曲线

本应用介绍如何使用Archimed荧光定量PCR系统进行绝对定量实验，包含软件操作等详细信息，以及应用案例。

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    绝对定量是适合需要测定靶点实际拷贝数时采用的实时荧光定量 PCR 分析方法。要进行绝对定量，需对已知数量浓度 或拷贝数 的目标模板（标准品 溶液进行几次连续 梯度稀释，采用实时荧光定量 PCR 扩增，利用获得的数据生成标准曲线，标准曲线以各靶点的数量 及相应的 Ct 值绘制。然后将未知样本的 Ct 值与此标准曲线进行比较，确定其浓度或

拷贝数。

    绝对定量实验常用来 :

    ✓ 确定 一定量的 未知 样本中基因的拷贝数。

    ✓ 检测 病人 每毫升 血液中病毒颗粒的浓度或数量 。

    ✓ 检测转基因食品中转基因核酸含量 。

重要提示：

    应用标准曲线方法进行绝对定量，需具备已知浓度或数量的模板标准品，这表示在生成曲线前，应准确定量模板。定量的准确度与标准曲线的质量直接相关。用于生成标准曲线的模板及定量该模板采用的方法是实验的基础。连续 梯度 稀释时的加样准确度极为重要，目标模板和连续稀释的实际样本的反转录RT和PCR扩增效率相当至关重要。

    利用Archimed荧光定量 PCR 进行绝对定量分析的一般流程：

孔板设置：


标准曲线信息设置：

得到结果：




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文献贡献者

鲲鹏基因（北京）科技有限责任公司
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