利用Archimed定量PCR进行基因表达相对定量（△△CT）分析

2019/10/15   下载量： 2 次

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应用领域 生物产业
检测样本 其他
检测项目
参考标准 相对表达分析

本应用介绍如何使用Archimed荧光定量PCR系统进行基因表达相对定量分析，包括软件的详细操作流程，以及应用案例。

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    基因表达的ΔΔCt法相对定量分析相对定量适用于大多数基因表达研究，可分析校准正常 样本和一个或多个实验样本中目的基因表达水平的上调或下调。采用该方法无需精确测定拷贝数，而是关注 目的基因的相对表达量 的变化。ΔΔCt法是一种非常普遍的相对定量分析方法， 该方法能够用于 比较包括校准品 如未处理或野生型样本)和标准品如看家基因表达 ) 在内的实验样本的结果。采用该方法，可根据检测样本和校准样本中的标准品正常) 基因的Ct比较同样两个样本中的目的基因的Ct其得出的ΔΔCt值可用于测定表达的倍数差异。

        相对定量实验常用来:

        ✓ 比较基因在不同组织中的表达水平。

        ✓ 比较处理过的样品和未处理过的样品中基因的表达水平。

        ✓ 比较不同遗传背景下感兴趣基因的表达水平。

        ✓ 分析特定处理下基因随时间的 表达变化 。

重要提示：

ΔΔCt方法要求 看家基因 和靶基因的 扩增 效率 接近 。 那么，可接受的二者间扩增效率的偏差范围是多大呢？ 确定该范围的方法是 生成 相同 样本 中的看家 基因和目的靶基因的标准曲线 获得每个稀释度的 看家基因 和靶基因的平均 ΔCt 。 此处， 数值本身并不重要重要的是各个稀释度的 差 值的一致性。 一般以目标基因和看家基因扩增效率都接近 100%且相互间效率偏差在5%以内为可用标准，或者以目标基因和看家基因起始模板各稀释度的量与各稀释度的ΔCt作图，获取斜率，斜率 <0.1一般被视为可接受的范围。

    利用Archimed荧光定量PCR进行ΔΔCt法相对定量分析的一般流程：

 孔板设置：

结果分析：










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鲲鹏基因（北京）科学仪器有限公司
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