fluidot移液器在大肠菌群测定中的应用（6管发酵法）

fluidot移液器在大肠菌群测定中的应用（6管发酵法）

方案摘要：大肠菌群是一群能发酵乳糖并产酸产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。将不同量的水样接种到含乳糖的培养基中,36 ℃±1 ℃培养 24 h±2h后,根据阳性反应管数可推算出原水样中大肠菌群的最可能数(most probable number,MPN)。对矿泉水水源水或直接饮用的矿泉水的检测,依据水样中大肠菌群的污染程度选择适合的多管发酵方法。本方法使用6管发酵法可达到快速检测矿泉水中大肠菌群的数量。

方案详情：

1、 实验原理

‌多管发酵法 是一种用于检测水中总大肠菌群的方法，其基本原理基于大肠菌群能够发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性、无芽孢、呈杆状等特性。通过移液器移取水样本进行检验，以求得水样中的总大肠菌群数。

二、‌实验准备

1、设配和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:

① 试管:20 mmX150 mm、15 mmX140 mm、35 mmX200 mm或其他适宜规格。

② 小倒管:6 mmX30 mm、13 mmx100 mm 或其他适宜规格。

③ 无菌吸管:1 mL(具 0.01 ml刻度)、10 mL(具 0.1 ml 刻度)或移液器及吸头。

④ 恒温培养箱:36 ℃±1℃。

⑤ 冰箱:2 ℃~8 ℃。

⑥ pH 计或 pH 比色管或精密pH试纸。

⑦ 电动移液器：pipetty  10 mL  MSIC90-001-10mL

⑧ 电动助吸器：fluidot  1-50 mL  EP101

⑨ 手动移液器：fluidot    10 mL  MSP10K

⑩蠕动泵分液器  fluidot 600D

2、培养基和试剂

① 乳糖胆盐发酵培养液。

② 亮绿乳糖胆盐培养液。

③ 无菌生理盐水。

④ 无菌磷酸盐缓冲液。

三、检验程序

1、大肠菌群多管发酵法的检验程序如下：

4、 实验步骤

1、初发酵实验

① 首先用蠕动泵分液器把50ml双料乳糖胆盐发酵培养液分装好，再用电动助吸器吸取50ml水样接种到50ml双料乳糖胆盐发酵培养液中，共接种1份;

② 移液器吸取10ml水样接种到10 ml双料乳糖胆盐发酵培养液中,共接种5份;

③ 置 36 ℃±1 ℃培养箱中培养 24 h±2h，观察每支管的产气情况,如有气体产生，则认为初发酵试验阳性。

2、确证实验

① 初发酵试验阳性管中培养液充分摇匀后,取一接种环培养液,接种到10 ml亮绿乳糖胆盐培养液中，置36 ℃±1 ℃培养箱中培养48 h±2 h。

② 观察亮绿乳糖胆盐培养液中小倒管内的产气情况,如有气体产生,就可确定为大肠菌群阳性,记下产气的阳性试管数,查表29可得出水样中大肠菌群的MPN值；如无气体产生则为大肠菌群阴性。

3、MPN值的计算

当经过确证试验后，1管50 mL,水样和5管10 mL,水样结果中,阳性反应的管数对应的 MPN值及其95%的可信限范围见表29。

五、 结果与报告

根据确证试验证实的乳糖胆盐发酵管反应阳性管数,检索方法对应的MPN 表,报告每100 mL,样品中大肠菌群的MPN值，以MPN/100 mL表示。当所有接种水样的乳糖胆盐发酵管均为阴性反应,可报告100mL水样中未检出大肠菌群。