fluidot蠕动泵分液器在矿泉水大肠菌群（滤膜法）培养基分装的应用

fluidot蠕动泵分液器在矿泉水大肠菌群（滤膜法）培养基分装的应用

方案摘要：大肠菌群是一群能发酵乳糖并产酸产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。总大肠菌群主要来自人和温血动物粪便，还可能来自植物和土壤，是评价饮用水卫生质量重要微生物指标之一，可以指示肠道传染病传播的可能性，具有广泛的卫生学意义。矿泉水中大肠菌群的检测需要配置不同平板培养基。

方案详情：

1、 实验原理

采用孔径为0.45μm亲水性微孔滤膜，将水中所含的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜贴在选择性计数培养基，经36℃±1℃培养24 h±2h后，大肠菌群细菌在滤膜上长出具有特征性的菌落，直接计数可疑菌落数，经试验确证后,报告每100 mL水样中所含的大肠菌群数。

二、‌实验准备

1、设配和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:

① 无菌滤器。

② 无菌亲水性微孔滤膜:直径47mm,孔径为 0.45μm。

③ 过滤设备。

④ 无菌无齿镊子。

⑤ 恒温培养箱:36℃±1℃。

⑥ 显微镜:100x~1000X。

⑦ 冰箱:2 ℃~8 ℃。

⑧ 无菌平皿:直径90mm。

⑨ pH计或pH比色管或精密pH试纸。

⑩蠕动泵分液器：fluidot  600D

⑪ 电动移液器：pipetty  10 mL  MSIC90-001-10mL

2、培养基和试剂

① 无菌生理盐水。

② 无菌磷酸盐缓冲液。

③ 远藤琼脂(品红亚硫酸钠)培养基。

④ 营养琼脂培养基。

⑤ 革兰氏染色液。

⑥ 乳糖蛋白胨培养液。

三、检验程序

1、大肠菌群滤膜检验程序如下：

四、实验步骤

1、水样过滤

用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分,贴放在已灭菌的滤头上,固定好滤器,将100ml,水样或稀释后的水样(用无菌生理盐水或无菌磷酸盐缓冲液稀释)通过孔径0.45 μm的滤膜过滤。通过

2、培养

将过滤后的滤膜贴在远藤琼脂培养基平板上，滤膜截留细菌面向上，平铺并避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡，然后将平板倒置,36 ℃±1℃培养24 h±2h。

3、结果观察与计数

观察滤膜上面的菌落特征,并计数可疑菌落。大肠菌群典型菌落在远藤琼脂培养基上具有以下特征之一：

① 紫红色，具有金属光泽;

② 深红色，不带或略带金属光泽;

③ 淡红色，中心颜色较深。

4、确证实验

① 按比例挑取10个不同形态的可疑菌落(不足10个则全挑)，分别接种到营养琼脂培养基平板上36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。

② 从营养琼脂培养基平板上挑取单菌落进行革兰氏染色镜检观察，同时接种乳糖蛋白胨培养液,经36℃±1℃培养24 h±2 h。可疑菌落为革兰氏阴性无芽孢杆菌,使接种的乳糖蛋白胨培养液变黄并产气，则判定为大肠菌群阳性。

五、 结果与报告

大肠菌群菌落数按式(127)计算,报告每100ml水样中的大肠菌群菌数,以CFU/100ml 表示，当d值为1，且T值为0时,可报告100 ml水样中未检出大肠菌群。