方案摘要
方案下载应用领域 | 环保 |
检测样本 | 饮用水 |
检测项目 | |
参考标准 | GB/T 8538-2022 |
大肠菌群是一群能发酵乳糖并产酸产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。总大肠菌群主要来自人和温血动物粪便,还可能来自植物和土壤,是评价饮用水卫生质量重要微生物指标之一,可以指示肠道传染病传播的可能性,具有广泛的卫生学意义。矿泉水中大肠菌群的检测需要配置不同平板培养基。
fluidot蠕动泵分液器在矿泉水大肠菌群(滤膜法)培养基分装的应用
方案摘要:大肠菌群是一群能发酵乳糖并产酸产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。总大肠菌群主要来自人和温血动物粪便,还可能来自植物和土壤,是评价饮用水卫生质量重要微生物指标之一,可以指示肠道传染病传播的可能性,具有广泛的卫生学意义。矿泉水中大肠菌群的检测需要配置不同平板培养基。
方案详情:
1、 实验原理
采用孔径为0.45μm亲水性微孔滤膜,将水中所含的细菌截留在滤膜上,然后将滤膜贴在选择性计数培养基,经36℃±1℃培养24 h±2h后,大肠菌群细菌在滤膜上长出具有特征性的菌落,直接计数可疑菌落数,经试验确证后,报告每100 mL水样中所含的大肠菌群数。
二、‌实验准备
1、设配和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
① 无菌滤器。
② 无菌亲水性微孔滤膜:直径47mm,孔径为 0.45μm。
③ 过滤设备。
④ 无菌无齿镊子。
⑤ 恒温培养箱:36℃±1℃。
⑥ 显微镜:100x~1000X。
⑦ 冰箱:2 ℃~8 ℃。
⑧ 无菌平皿:直径90mm。
⑨ pH计或pH比色管或精密pH试纸。
⑩蠕动泵分液器:fluidot 600D
⑪ 电动移液器:pipetty 10 mL MSIC90-001-10mL
2、培养基和试剂
① 无菌生理盐水。
② 无菌磷酸盐缓冲液。
③ 远藤琼脂(品红亚硫酸钠)培养基。
④ 营养琼脂培养基。
⑤ 革兰氏染色液。
⑥ 乳糖蛋白胨培养液。
三、检验程序
1、大肠菌群滤膜检验程序如下:
四、实验步骤
1、水样过滤
用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分,贴放在已灭菌的滤头上,固定好滤器,将100ml,水样或稀释后的水样(用无菌生理盐水或无菌磷酸盐缓冲液稀释)通过孔径0.45 μm的滤膜过滤。通过
2、培养
将过滤后的滤膜贴在远藤琼脂培养基平板上,滤膜截留细菌面向上,平铺并避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡,然后将平板倒置,36 ℃±1℃培养24 h±2h。
3、结果观察与计数
观察滤膜上面的菌落特征,并计数可疑菌落。大肠菌群典型菌落在远藤琼脂培养基上具有以下特征之一:
① 紫红色,具有金属光泽;
② 深红色,不带或略带金属光泽;
③ 淡红色,中心颜色较深。
4、确证实验
① 按比例挑取10个不同形态的可疑菌落(不足10个则全挑),分别接种到营养琼脂培养基平板上36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h。
② 从营养琼脂培养基平板上挑取单菌落进行革兰氏染色镜检观察,同时接种乳糖蛋白胨培养液,经36℃±1℃培养24 h±2 h。可疑菌落为革兰氏阴性无芽孢杆菌,使接种的乳糖蛋白胨培养液变黄并产气,则判定为大肠菌群阳性。
五、 结果与报告
大肠菌群菌落数按式(127)计算,报告每100ml水样中的大肠菌群菌数,以CFU/100ml 表示,当d值为1,且T值为0时,可报告100 ml水样中未检出大肠菌群。
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