方案摘要
方案下载| 应用领域 | 生物产业 |
| 检测样本 | |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | 蛋白定量祥光方法 |
使用 Implen NanoPhotometer®，通过直接读取 A280 来测量总细胞提取物中的蛋白质浓度。这些提取物是通过使用三种不同的常用裂解液：RIPA、M-PER 和T-PER 对培养细胞进行裂解而获得的。采用整体消光系数的方法，使用 A280 测量总蛋白浓度，并与比色法(BCA)的结果进行比较。
由于很多试剂在紫外区具有吸收，因此不能使用UV法测量。UV法测定需要已知样品的消光系数，而通常纯化后的单一蛋白质才具有确定的消光系数。因此，我们需要解决的问题是：选择兼容UV法的裂解液进行总蛋白提取;需要确定总蛋白混合物的消光系数，并使用该消光系数进行UV法蛋白定量。
我们使用Implen NanoPhotometer®，通过直接读取A280来测量总细胞提取物中的蛋白质浓度。这些提取物是通过使用三种不同的常用裂解液：RIPA、M-PER和T-PER对培养细胞进行裂解而获得的。采用整体消光系数的方法，使用A280测量总蛋白浓度，并与比色法(BCA)的结果进行比较。
直接A280方法的一个实际优势是，如果所有样品均采用相同的提取方案制备，则可以使用高度一致且可重复的方法更有效地处理大量裂解产物样品。该方法快速、简单、成本低，不需要添加任何试剂，只需要极小的样品体积(1µl)，即可使用Nanophotometer®进行测量。
根据原理，用于测量蛋白质浓度的比色法分析都需要建立一个反应(例如Bradford、Lowry、BCA)。裂解液中的复杂成分对生色团形成过程的干扰，而导致的结果偏差是应被考虑的，而使用不涉及任何干预操作的直接紫外A280方法不仅消除了潜在的样品处理及成分干扰，而且还节省了建立标准曲线所需的时间以及试剂的成本。
使用直接A280法，蛋白质浓度结果将取决于计算所用的参考标准，决定哪一个参考是最合适的取决于每个研究者，而Avgε方法的优点是使用根据已知大量蛋白质的整体消光系数进行浓度计算。与比色法(BCA)的比较表明，直接A280测量可以通过转换因子与BCA分析结果相关联。在需要测量大量细胞裂解液样品中蛋白质浓度的情况下，A280直接法提供了一个很好的选择。
文献贡献者
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