饲料营养成分>氨基酸检测 | 饲料中氨基酸的测定-柱后衍生法（把液相变成氨基酸分析仪来用）-华派优品（青岛）仪器有限公司

方案摘要

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应用领域	农/林/牧/渔
检测样本	饲料
检测项目	营养成分>氨基酸
参考标准	GB/T 18246-2019

目前氨基酸检测方法主要有分光光度法、毛细管电泳法、近红外法、氨基酸分析仪法和液相色谱法等，其中氨基酸分析仪法和液相色谱法灵敏度高且应用范围广泛，但前者仪器成本较高，并不是最佳选择；后者又分为手动衍生和柱后衍生。手动衍生操作复杂，稳定性差。为此，华派科仪特开发出一种简洁高效经济的氨基酸测定方法-柱后衍生法。

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配置单

华派科仪huapaikeyi柱后衍生装置HP-HS20
型号：HP-HS20

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色谱柱维护系统
型号：CX06/10/20/30

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方案详情

一．背景

氨基酸是一类含有碱性氨基和酸性羧基的物质，是羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后形成的化合物。

饲料中氨基酸主要有以下作用：1.促进动物生长2.提高饲料的营养价值3.改善肉质品质4.促进钙的吸收5.抵抗应激症6.提高抗病能力7.防止动物腹泻8.作恶日调味剂等。

目前氨基酸检测方法主要有分光光度法、毛细管电泳法、近红外法、氨基酸分析仪法和液相色谱法等，其中氨基酸分析仪法和液相色谱法灵敏度高且应用范围广泛，但前者仪器成本较高，并不是最佳选择；后者又分为手动衍生和柱后衍生。手动衍生操作复杂，稳定性差。为此，华派科仪特开发出一种简洁高效经济的氨基酸测定方法-柱后衍生法。

二 . 原理简介

饲料中的氨基酸经过提取后，采用氨基酸专用色谱柱进行分离，在柱后衍生中完成衍生化反应，紫外检测器检测，外标法定量。

三 . 方案详情

1.实验步骤

称取饲料50-100mg（含蛋白质约7.5-25mg，精确至0.1mg）于20mL水解管中，准确加入10mL6mol/L的盐酸溶液。充氮气1min后旋紧管盖。110℃水解22-24h。冷却至室温，混匀，过滤。取适量的滤液于60℃蒸干，3-5mL柠檬酸钠缓冲溶液复溶，过膜，待测定。

2.仪器方法

2.1液相方法

泵：四元低压梯度泵

色谱柱：氨基酸专用色谱柱

紫外检测器双波长：570nm和440nm

梯度及柱温条件：请向华派科仪索取

进样体积：10uL

2.2衍生方法

流速：0.3mL/min

衍生梯度方案：请向华派科仪索取

2.3衍生原理简介

一级氨基酸和茚三酮反应生成蓝紫色衍生产物，称为罗曼紫，紫外吸收为570nm；二级氨基酸与茚三酮反应生成黄色衍生产物，紫外吸收为440nm

3.方法对比

方法	毛细管电泳法	分光光度法	液相色谱法（柱后衍生-紫外法）		氨基酸分析仪
			柱前衍生	柱后衍生
前处理	需要手动衍生			不需要手动衍生
仪器	毛细管电泳仪配紫外检测器	分光光度计	液相	液相+衍生	氨基酸分析仪（成本高）
结果	准确度低	准确度低	较准确	准确	准确

4.结果展示

图一：一级氨基酸光谱图

图二：甘氨酸色谱图

图三：蛋白质水解产生的20种氨基酸谱图

四．方案配置

1.配置一：仪器

产品名称	货号	型号
液相色谱（配紫外检测器）	/	/
柱后衍生系统	/	HP-HS20
多管涡旋振荡器（四选一）	/	HP-M06、HP-M10、HP-M20、HP-M30
色谱柱维护系统（选配）	H#301031	HP-CX10
	H#302031	HP-CX20
	H#303031	HP-CX30
智能化全自动配标仪（选配）	/	HP-YS20

2. 配置二：耗材

产品名称	型号
氨基酸标准品	18种1umol/mL
流动相	4×500mL
氨基酸专用色谱柱	4.6mm×（25-30）cm
色谱柱再生液	500mL
氨基酸衍生试剂包	500mL
清洗液	500mL