盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂,20世纪80年代初,美国一家公司开始将其添加到饲料中,增加瘦肉率,但如果作为饲料添加剂,使用剂量是人用药剂量的10倍以上,才能达到提高瘦肉率的效果。它用量大、使用的时间长、代谢慢,所以在屠宰前到上市,在猪体内的残留量都很大。这个残留量通过食物进入人体,就使人体渐渐地中毒,积蓄中毒。如果一次摄入量过大,就会产生异常生理反应的中毒现象,因此而被禁用。国内养猪户不顾农业部的规定,为了使猪肉不长肥膘,在饲料中掺入瘦肉精。猪食用后在代谢过程中促进蛋白质合成,加速脂肪的转化和分解,提高了猪肉的瘦肉率,因此称为瘦肉精。
自瘦肉精事件发生以来,月旭公司一直密切关注此事,迅速推出了动物组织中盐酸克伦特罗(瘦肉精)检测的全套解决方案。
具体测定方法如下:
1. 适用范围
适用于动物肌肉和肝脏中盐酸克伦特罗药物的检测。
2. 提取
将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中,10000 rpm均质2 min。6000 rpm下离心2 min,将上清液转至另一离心管中。用15 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并提取液。
向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液,涡动1 min,然后再6000 rpm下离心1 min,收集下层水相。重复萃取一次,合并下层水相,用2.5 mol/L NaOH溶液调节pH至5.2,待净化。
3. 净化
活化/平衡:依次向Welchrom® P-SCX(60mg/3mL)中加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L盐酸溶液,流出液弃去;
上样:将上述提取液加入柱中,流出液弃去;
淋洗:依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗,淋洗液弃去,并将小柱抽干;
洗脱:用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脱,收集洗脱液,40℃下氮气吹干;
4. 检测
50% 甲醇溶解残渣,涡动振荡1 min,过0.22μm滤膜,装入进样小瓶,进样10μL分析。
色谱条件:
色谱柱: Ultimate XB-C18 液相色谱柱(4.6 mm x 150 mm, 3 μm)
流动相: 0.01 M磷酸缓冲液:甲醇=65:35
流速: 0.7 mL/min
进样量: 20 μL
柱温: 30 °C
检测波长: 244 nm
运行时间:11 min
5. 结果
回收率和重现性实验
将猪肝空白样品经过液液萃取初步处理后,分别添加一定量的标准溶液,添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验,共3个批次(样品典型回收率色谱图见附图)。
猪肌肉中添加0.5 μg/ kg 盐酸克伦特罗的样品图谱
猪肝脏中添加0.5 μg/ kg 盐酸克伦特罗的样品图谱
本方法中使用到得耗材:
1. 固相萃取小柱 Welchrom P-SCX 60mg/3mL (P/N:WSP020306)
2. 色谱柱:Ultimate XB-18,50*2.1mm,3μm(P/N:Ult3B18205)
3. 13mm,孔径0.22μm尼龙针孔滤膜(P/N: WEL-SFNY213022)
关于月旭公司请访问www.welchmat.com
来源于:月旭材料科技(上海)有限公司
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