一 背景
胆汁酸(bile acid, BA)为胆固醇的系列衍生物,体内约有 50%胆固醇是以胆汁酸形式
排泄,是体内清除胆固醇的重要途径。粪便中的胆汁酸经过复杂的肠道菌群解离作用已证实
主要为一级胆汁酸和次级胆汁酸。目前已有相关研究表明,粪便中胆汁酸的含量与肝脏疾病
进展程度相关,建立操作简便、可准确定量的样品前处理方法对临床相关研究具有重要意义。
本实验采用 Cleanert MAS-MAW 进行样品净化处理,考察胆汁酸在粪便样品中的加标
回收率,建立 SPE 方法对粪便样品进行净化处理。
二 目标物信息
表 1 目标物信息
三 材料及仪器
Cleanert MAS-MAW;PTFE 滤头;Cleanert M96 生物样品前处理仪;Cleanert V96 氮
吹浓缩仪;96 孔接收板;Venusil MP C18(2.1*150mm,3μm,100Å);API 4000+.
四 样品处理方法
4.1 样品预处理
称取 10mg 粪便样品至样品瓶中,并加入 3mL 甲醇,涡旋 2min,超声 15min,8000rpm
离心 5min,将上清液转移至干净样品瓶中,向样品残渣中再加入 3mL 甲醇,重复提取一次,
将上清液合并,并用 PTFE 过滤头进行过滤,将滤液于 45℃下氮吹干,使用 1mL 1%甲酸甲
醇/水(1:1,v/v)溶液重新溶解,待净化。
4.2 SPE 过程
活化:2ml 乙腈,2ml 3%甲酸水溶液
上样:将待净化液全部上样
淋洗:4mL 50%甲醇水,淋洗液弃去
洗脱:先用 2mL 甲醇进行洗脱,再用 2ml 三乙胺-水-甲醇混合液(2%-10%-88%)洗脱,
将洗脱液合并,在 40℃下氮吹干,残渣用 100μL 甲醇/水(7:3,v/v)溶解。
注:粪便样品中部分胆汁酸的含量较高,可将溶液进一步稀释再进行检测。
五 仪器检测条件
5.1 HPLC 条件
色谱柱:Durashell C18-AM(2.1*100mm,3μm,100Å)
流速:200μL/min
柱温:30℃;进样量:5μL
表 2 梯度条件
5.2 质谱条件
扫描模式:电喷雾电离负模式
采集模式:多反应监测(MRM)
表 3 参数信息
六 结果
表 4 样品加标回收率
图 1 8 组分出峰顺序图(简称见表 1)
七 结论
本实验采用 Cleanert MAS-MAW 96 孔板对粪便样品中的胆汁酸进行高通量前处理。实
验结果表明 Cleanert MAS-MAW 能够有效除去粪便中的干扰物,对 8 种胆汁酸进行定量萃
取,绝对回收率范围为 83%~114%,可以满足日常对批量生物样品分析的需求。
八 订货信息表
来源于:艾杰尔飞诺美
热门评论
最新资讯
厂商动态
新闻专题