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利剑出鞘—斩断奥运赛场上“兴奋剂”的黑手

Soleil

2024.08.06 点击0次

TA的文章

导读:巴黎奥运会出现三例兴奋剂检测阳性,涉美雄酮、宝丹酮、呋塞米及类固醇司坦唑醇。2024年兴奋剂目录列391种禁用物质与方法。检测手段涵盖尿检、血检,技术包括酶联免疫、高效液相色谱等,以准确甄别痕量物质。

在奥运会这样大大小小的体育盛事中,兴奋剂检测始终是备受关注的焦点。截止到目前,巴黎奥运会出现的三例兴奋剂检测阳性事件,分别是对美雄酮和宝丹酮(属促蛋白合成类固醇)、呋塞米(属利尿剂和掩蔽剂)、类固醇司坦唑醇检测呈现阳性。

本届巴黎奥运会兴奋剂检测由世界反兴奋剂机构(WADA)负责组织和监督检测工作,负责检测的实验室均需获得世界反兴奋剂机构的认可。反兴奋剂本身其实是一项专业性极强、有着复杂体系的工作。那么兴奋剂检测包括什么?兴奋剂违规的行为有哪些?反兴奋剂工作人员是如何完成整个流程的?其兴奋剂检测技术手段又有哪些?

兴奋剂检测(Doping Control)的范围广泛,包括赛前、赛后及日常检测,以确保运动员未使用任何违禁物质或违禁方法。食源性兴奋剂检测是奥运赛事中最关注的部分,其主要指来自于食品的兴奋剂,包括两大类,一类是天然存在的,即内源性兴奋剂;一类是人为添加而残留在食品中的,即外源性兴奋剂。

禁用方法及禁用物质:按照联合国教科文组织《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》和国务院《反兴奋剂条例》的有关规定,在2023年12月29日国家体育总局发布了2024年兴奋剂目录。(目录清单见链接:https://www.sport.gov.cn/kjs/n5084/c27260605/part/27262172.pdf

1. 禁用方法:

篡改血液/血液成分:包括血液回输或增加红细胞;人为提高氧气摄入输送或释放的方法等;

化学/物理方法:包括置换/变更样本;12小时内静脉输液和/或静脉注射剂量不得超过100mL等;

基因/细胞兴奋剂:包括使用核酸或核酸类似物(基因编辑、基因沉默和基因转移技术);使用常规或经基因修饰的细胞。

2. 禁用物质:蛋白同化制剂品种、肽类激素品种、麻醉药品品种、刺激剂(含精神药品)品种、药品类易制毒化学品品种、医疗用毒性药品品种以及其他品种共391种兴奋剂。在公布的兴奋剂目录中还有其他多种特殊品类的补充说明,比如有常见的:

合成类固醇等:具有促进蛋白质合成的作用,可以使肌肉增大和力量增强,同时严重干扰体内激素平衡;

玉米赤霉醇类:可促进蛋白质合成,有助于运动员提高肌肉力量;

β激动剂类:可减少脂肪囤积,增加肌肉含量,短期效应会使得心率变快、血压升高、发热。运动员可借助此类药物获得热量和抗代谢效应,提高肌肉练力量;

刺激剂:刺激中枢神经;

生长激素:促进红细胞生成;

利尿、遮掩剂:稀释、降体重等。

并且在目录最后,提到该目录中尚未涉及的、且未经任何政府健康管理部门批准用于人体治疗的药物(例如尚在临床前或正在临床试验阶段或已经终止临床试验的药物、策划药物、仅批准作兽药的物质),在所有情况下禁用。

检测手段:自国际奥委会在1964年奥运会上首次试行兴奋剂检测以来,国际上一直采用的是尿检。直到1989年,国际滑雪联合会才在世界化学锦标赛上首次进行血检。血检只是作为尿检的一种辅助手段,用来检测一些尿检中难于检测的违禁物质和违禁方法,主要针对异体输血等。尿样通过A、B瓶检查获取,两只瓶子上只有一串6位数的编码用于识别运动员身份,整个检测过程中,无人得知瓶子主人的真正身份。兴奋剂检测中心保存b瓶,a瓶送到兴奋剂检测实验室检查,兴奋剂检测实验室收到尿样后应尽快完成检测分析,样品分析严格采用经国际奥委会医学委员会批准的技术方法。

检测技术:兴奋剂的检测难度在于检测品种广、项目多、时效性强。尤其是对于食源性兴奋剂,其在食物中含量很低属于ppb级甚至ppt级,比药物中的兴奋剂更难甄别。要准确检测这些痕量物质,需要低检测限的高端精密分析设备和先进的检验方法。通常的食源性兴奋剂检测的常用方法酶联免疫法、高效液相色谱(HPLC)法、LC-MS法、GC-MS法等。奥运赛事对食源性兴奋剂检测的要求更加严格,《大型赛事食源性兴奋剂防控工作指南》推荐使用LC-MS、LC-MS/MS法,测定不同食品基质中的低浓度药物和兴奋剂及代谢物的残留,主要是因其灵敏度、选择性和特异性较好,同时部分样品前处理及净化工作较为简便,多被应用于尿液、血浆、肝脏以及动物肌肉等样品中β2-受体激动剂的检测。

(*以下列出的仪器厂商及检测仪器设备等为仪器信息网收录行业应用方案以及发布在仪器信息网资讯栏目的部分产品,不具全面性,如有遗漏,欢迎大家留言补充。联系邮箱:wugq@instrument.com.cn)

方法

兴奋剂类型

检测技术/仪器

仪器厂商

色谱+质谱














外源性类固醇

稳定同位素技术

德国元素AnthrovisION

曲马多 (tramadol) 及其代谢物 O-去甲基曲马多

干血斑 (点) 技术+LC-MS/MS

(DBS-MS 500 HCT系统)

瑞士 CAMAG公司

蜕皮甾酮、各类禁用物质及方法类兴奋剂检测


Agilent 7000D 三重四极杆气质联用系统

安捷伦(Agilent)


Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统

动物源性食品中克伦特罗等48种兴奋剂

QSight220三重四极杆液质联用系统

珀金埃尔默

类固醇

LC-FAIMS-MS/MS

赛默飞



尿检中微量代谢物

DFS高分辨质谱

检测分辨内源性和外源性激素

DELTA同位素质谱仪

各类禁用物质及方法类兴奋剂检测

超高效液相色谱-四极杆串联质谱联用系统

沃特世


动物性食品中糖皮质类激素兴奋剂

Oasis® HLB 固相提取技术和ACQUITY UPLC® 超高效液相色谱/TQD 串联四极杆质谱系统

多种高极性兴奋剂(包括米屈肼和如辛弗林、去甲苯福林、依替福林、奥洛福林及奥克巴胺等肾上腺素能药物)

二维液相三重四极杆质谱联用法

岛津




麻醉类:海洛因、吗啡、美沙酮等;

刺激类:咖啡因、可卡因、麻黄碱

GCMS-QP2020

麻醉类:海洛因、吗啡、美沙酮、、氯胺酮等;

刺激类:安非他明、肾上腺素等;

类固醇:β-激动剂、睾丸激素等;

利尿剂:甘露醇、Dexa-trim等;

其他:β-阻断剂、局部麻醉药等

LCMS-8045

LCMS-8050

LCMS-8060

肽类激素:人类生长激素(HGH)、促红细胞生长素(EPO)等

LCMS-IT-TOF

其他






促红细胞生成素(EPOs)

蛋白印迹杂交(Western Blotting)

美国Precision Biosystems公司的Blotcycler

肽类兴奋剂检测

多功能水平电泳仪Multiphor II

北京德泉

尿检

自动比重、酸碱度计

鲁道夫(RUDOLPH)

血检

自动血液分析仪

希森美康(SYSMEX)

\

(辅助设备)


干血点检测专用摇床(THERMOMIER   F1.5)

艾本德(EPPENDORF)


真空干燥离心机

总之,兴奋剂检测不仅是科技与体育的结合,更是维护体育公平与正义的最后一道防线。虽然兴奋剂的使用手段在不断翻新,但反兴奋剂工作依然面临着巨大的挑战。需要各方共同努力,加强反兴奋剂宣传教育,完善反兴奋剂法规制度,提升检测技术水平,才能有效遏制兴奋剂的使用,维护体育竞赛的公平公正,保障运动员的健康权益。




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在奥运会这样大大小小的体育盛事中,兴奋剂检测始终是备受关注的焦点。截止到目前,巴黎奥运会出现的三例兴奋剂检测阳性事件,分别是对美雄酮和宝丹酮(属促蛋白合成类固醇)、呋塞米(属利尿剂和掩蔽剂)、类固醇司坦唑醇检测呈现阳性。

本届巴黎奥运会兴奋剂检测由世界反兴奋剂机构(WADA)负责组织和监督检测工作,负责检测的实验室均需获得世界反兴奋剂机构的认可。反兴奋剂本身其实是一项专业性极强、有着复杂体系的工作。那么兴奋剂检测包括什么?兴奋剂违规的行为有哪些?反兴奋剂工作人员是如何完成整个流程的?其兴奋剂检测技术手段又有哪些?

兴奋剂检测(Doping Control)的范围广泛,包括赛前、赛后及日常检测,以确保运动员未使用任何违禁物质或违禁方法。食源性兴奋剂检测是奥运赛事中最关注的部分,其主要指来自于食品的兴奋剂,包括两大类,一类是天然存在的,即内源性兴奋剂;一类是人为添加而残留在食品中的,即外源性兴奋剂。

禁用方法及禁用物质:按照联合国教科文组织《反对在体育运动中使用兴奋剂国际公约》和国务院《反兴奋剂条例》的有关规定,在2023年12月29日国家体育总局发布了2024年兴奋剂目录。(目录清单见链接:https://www.sport.gov.cn/kjs/n5084/c27260605/part/27262172.pdf

1. 禁用方法:

篡改血液/血液成分:包括血液回输或增加红细胞;人为提高氧气摄入输送或释放的方法等;

化学/物理方法:包括置换/变更样本;12小时内静脉输液和/或静脉注射剂量不得超过100mL等;

基因/细胞兴奋剂:包括使用核酸或核酸类似物(基因编辑、基因沉默和基因转移技术);使用常规或经基因修饰的细胞。

2. 禁用物质:蛋白同化制剂品种、肽类激素品种、麻醉药品品种、刺激剂(含精神药品)品种、药品类易制毒化学品品种、医疗用毒性药品品种以及其他品种共391种兴奋剂。在公布的兴奋剂目录中还有其他多种特殊品类的补充说明,比如有常见的:

合成类固醇等:具有促进蛋白质合成的作用,可以使肌肉增大和力量增强,同时严重干扰体内激素平衡;

玉米赤霉醇类:可促进蛋白质合成,有助于运动员提高肌肉力量;

β激动剂类:可减少脂肪囤积,增加肌肉含量,短期效应会使得心率变快、血压升高、发热。运动员可借助此类药物获得热量和抗代谢效应,提高肌肉练力量;

刺激剂:刺激中枢神经;

生长激素:促进红细胞生成;

利尿、遮掩剂:稀释、降体重等。

并且在目录最后,提到该目录中尚未涉及的、且未经任何政府健康管理部门批准用于人体治疗的药物(例如尚在临床前或正在临床试验阶段或已经终止临床试验的药物、策划药物、仅批准作兽药的物质),在所有情况下禁用。

检测手段:自国际奥委会在1964年奥运会上首次试行兴奋剂检测以来,国际上一直采用的是尿检。直到1989年,国际滑雪联合会才在世界化学锦标赛上首次进行血检。血检只是作为尿检的一种辅助手段,用来检测一些尿检中难于检测的违禁物质和违禁方法,主要针对异体输血等。尿样通过A、B瓶检查获取,两只瓶子上只有一串6位数的编码用于识别运动员身份,整个检测过程中,无人得知瓶子主人的真正身份。兴奋剂检测中心保存b瓶,a瓶送到兴奋剂检测实验室检查,兴奋剂检测实验室收到尿样后应尽快完成检测分析,样品分析严格采用经国际奥委会医学委员会批准的技术方法。

检测技术:兴奋剂的检测难度在于检测品种广、项目多、时效性强。尤其是对于食源性兴奋剂,其在食物中含量很低属于ppb级甚至ppt级,比药物中的兴奋剂更难甄别。要准确检测这些痕量物质,需要低检测限的高端精密分析设备和先进的检验方法。通常的食源性兴奋剂检测的常用方法酶联免疫法、高效液相色谱(HPLC)法、LC-MS法、GC-MS法等。奥运赛事对食源性兴奋剂检测的要求更加严格,《大型赛事食源性兴奋剂防控工作指南》推荐使用LC-MS、LC-MS/MS法,测定不同食品基质中的低浓度药物和兴奋剂及代谢物的残留,主要是因其灵敏度、选择性和特异性较好,同时部分样品前处理及净化工作较为简便,多被应用于尿液、血浆、肝脏以及动物肌肉等样品中β2-受体激动剂的检测。

(*以下列出的仪器厂商及检测仪器设备等为仪器信息网收录行业应用方案以及发布在仪器信息网资讯栏目的部分产品,不具全面性,如有遗漏,欢迎大家留言补充。联系邮箱:wugq@instrument.com.cn)

方法

兴奋剂类型

检测技术/仪器

仪器厂商

色谱+质谱














外源性类固醇

稳定同位素技术

德国元素AnthrovisION

曲马多 (tramadol) 及其代谢物 O-去甲基曲马多

干血斑 (点) 技术+LC-MS/MS

(DBS-MS 500 HCT系统)

瑞士 CAMAG公司

蜕皮甾酮、各类禁用物质及方法类兴奋剂检测


Agilent 7000D 三重四极杆气质联用系统

安捷伦(Agilent)


Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统

动物源性食品中克伦特罗等48种兴奋剂

QSight220三重四极杆液质联用系统

珀金埃尔默

类固醇

LC-FAIMS-MS/MS

赛默飞



尿检中微量代谢物

DFS高分辨质谱

检测分辨内源性和外源性激素

DELTA同位素质谱仪

各类禁用物质及方法类兴奋剂检测

超高效液相色谱-四极杆串联质谱联用系统

沃特世


动物性食品中糖皮质类激素兴奋剂

Oasis® HLB 固相提取技术和ACQUITY UPLC® 超高效液相色谱/TQD 串联四极杆质谱系统

多种高极性兴奋剂(包括米屈肼和如辛弗林、去甲苯福林、依替福林、奥洛福林及奥克巴胺等肾上腺素能药物)

二维液相三重四极杆质谱联用法

岛津




麻醉类:海洛因、吗啡、美沙酮等;

刺激类:咖啡因、可卡因、麻黄碱

GCMS-QP2020

麻醉类:海洛因、吗啡、美沙酮、、氯胺酮等;

刺激类:安非他明、肾上腺素等;

类固醇:β-激动剂、睾丸激素等;

利尿剂:甘露醇、Dexa-trim等;

其他:β-阻断剂、局部麻醉药等

LCMS-8045

LCMS-8050

LCMS-8060

肽类激素:人类生长激素(HGH)、促红细胞生长素(EPO)等

LCMS-IT-TOF

其他






促红细胞生成素(EPOs)

蛋白印迹杂交(Western Blotting)

美国Precision Biosystems公司的Blotcycler

肽类兴奋剂检测

多功能水平电泳仪Multiphor II

北京德泉

尿检

自动比重、酸碱度计

鲁道夫(RUDOLPH)

血检

自动血液分析仪

希森美康(SYSMEX)

\

(辅助设备)


干血点检测专用摇床(THERMOMIER   F1.5)

艾本德(EPPENDORF)


真空干燥离心机

总之,兴奋剂检测不仅是科技与体育的结合,更是维护体育公平与正义的最后一道防线。虽然兴奋剂的使用手段在不断翻新,但反兴奋剂工作依然面临着巨大的挑战。需要各方共同努力,加强反兴奋剂宣传教育,完善反兴奋剂法规制度,提升检测技术水平,才能有效遏制兴奋剂的使用,维护体育竞赛的公平公正,保障运动员的健康权益。