概述
众所周知,单克降抗体异构体可能来自于抗体分子
复杂的生物合成途径,如细胞系及培养工艺,也可能来
自于纯化、制剂等制造过程以及贮存过程的任何阶段。
其中由于抗体分子所带电荷差异造成的异质性称为电荷
异构体,一般分为酸性异构体和碱性异构体,产生原因
主要与翻译后修饰有关。由于这些异构体可能会影响抗
体的稳定性、药效、免疫原性或药代动力学。因此在生
物类似物开发过程中应尽可能控制异构体含量与原研药
保持一致。
Trastuzumab deruxtecan(DS-8201;ENHERTU®)
是由第一三共和阿斯利康合作开发的新型HER2靶向
ADC。Deruxtecan是毒性药物DX-8951 的衍生物 (Dxd)
和连接子马来酰亚胺-GGFG 肽的通过偶联物。
本应用尝试使用Biozen 的WCX色谱柱对曲妥珠单
抗以及ADC药物 DS-8201 进行电荷异质体的分析。
关键词
曲妥珠;DS-8201;WCX;Biozen WCX;电荷异质体
化合物信息
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
Thermo U3000高效液相色谱仪
3.1.2试剂材料
磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠为分析纯,
乙腈为色谱纯,屈臣氏蒸馏水
3.1.3样品
Trastuzumab- deruxtecan,平均DAR值为4。用
纯水稀释为浓度为1.0 mg/mL;
曲妥珠单抗购自MCE。用纯水稀释为浓度为1.0
mg/mL。
3.2色谱条件
色谱柱:Biozen WCX(6um, 250*4.6mm);
P/N: 00G-4777-E0;
流动相A相:20mM磷酸钠缓冲液pH 7.4;
流动相B相:20mM磷酸钠缓冲液+250mM氯化
钠 pH 7.4;
流动相C相:乙腈
流 速:0.6 mL/min;
柱 温:30 ℃;
波 长:214nm;
进样量:20 μL
梯度程序见表2:
3.3结果与讨论
对于曲妥珠单抗,电荷异质体来源于蛋白的翻
译后修饰,如末端的改变,糖基化,脱酰胺,异构
化,氧化,聚合等都可能会引起抗体表面的电荷该
改变。一般认为等电点差异大于1的蛋白在组织内分
布和代谢动力学方面会产生比较大的差异。而酸性
异质体会改变抗体在体内的代谢和清除速率,对药
效不利。图1为曲妥珠单抗的离子交换色谱图,其中
的酸性杂可以很好的和主峰分离。相比之下,ADC的
应用编号:AP10660Confidential - Company Proprietary
离子交换谱图就复杂的多。DS-8201作为一种半胱氨
酸偶联的ADC相较于赖氨酸偶联其电荷异质性已经
大大降低。尽管如此,其结果还是比较复杂,参见
图2。
结论
本应用使用了Biozen WCX色谱柱对DS-8201和
曲妥珠单抗的电荷异质体进行分析。这款色谱柱使
用6um的单分散微球填料,从而色谱峰形非常的尖锐,
曲妥珠单抗主峰的50%半峰宽仅为0.149min。微球表
面将线性聚合羧酸的键合相和颗粒本身进行交联,
在采用盐梯度洗脱的情况下,酸性变异体和可以主
峰良好的分离。对于DS-8201来说,由于本身存在的
异质性情况复杂,对于分离结果还有待结合多种手
段进一步进行分析确认。
来源于:艾杰尔飞诺美
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