概述
本实验以0.1%甲酸水和甲醇为流动相,使用Kinetex HILIC(2.1×100mm 2.6μm)色谱柱对1-氨基-4-甲基哌嗪进行测试,回收率106.8%,可达到要求。
关键词
Kinetex HILIC;1-氨基-4-甲基哌嗪
化合物信息
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX API 5500+),配 有电喷雾离子源(ESI);
3.1.2试剂材料
实验用水为屈臣氏水;甲醇、甲酸均为色谱纯 试剂。
3.1.3样品
1. 1-氨基-4-甲基哌嗪:液态,由客户提供。精 确吸取1mg至棕色样品瓶中,加入1mL甲醇配制 成母液(1mg/mL);
2. 利福平:固态,有客户提供。精确称取2mg 至棕色样品瓶中,加入1mL甲醇配制成母液 (2mg/mL);
3. 1-氨基-4-甲基哌嗪中间液:精密吸取母液1 微升用甲醇配制成1mL中间液(1 µg/mL);
4. 混合上机溶液:精密吸取1-氨基-4-甲基哌嗪 中间液60µL及利福平母液500µL,用甲醇配制成 1mL上机液(其中1-氨基-4-甲基哌嗪 60ng/mL,利福平1mg/mL)。
3.2仪器检测条件
3.2.1色谱条件
色谱柱:Kinetex HILIC 2.1×100mm 2.6µm;
P/N:00D-4461-AN
流动相:
A:0.1%甲酸水;
B:甲醇
流 速:0.40 mL/min;
柱 温:30 ℃;
进样量:2 μL;
切换阀:0.1→B;5→A;12→B
梯度程序见表2:
3.2.2质谱条件
离子源类型:电喷雾离子源(ESI)
扫描方式:多反应监测正离子模式(MRM+)
喷雾针电压:5500 V
离子源温度:550 ℃
加热器(GS1):55 psi
辅助加热气(GS2):55 psi
气帘气(CUR):20 psi
碰撞气(CAD):8 psi
为获得较好的稳定和灵敏度,各化合物监测离 子对的去簇电压(DP)和碰撞电压(CE),目 标化合物定量离子对参数经过系统优化,优化 信息参见表3。
3.3结果
3.4实验谱图
讨论
本实验筛选了 Gemini NX C18、Kinetex C18、 Kinetex F5、Kinetex EVO C18、Luna C18(2)、Venusil C18 等反向色谱柱,1-氨基-4-甲基哌嗪均在死时间 出峰;后尝试 Hilic 模式,筛选了 Luna HILIC、Luna NH2 和 Kinetex HILIC,只有 Kinetex HILIC 柱对 1-氨 基-4-甲基哌嗪有保留,并且甲酸水的条件下,峰型 更尖锐,更好看。所以以 0.1%甲酸水、甲醇为流动 相,Hilic 模式下,利用 Kinetex HILIC 柱对 1-氨基- 4-甲基哌嗪进行有效保留与分离,回收率达到 106.8%。
结论
本实验以0.1%甲酸水和甲醇为流动相,使用Kinetex HILIC(2.1×100mm 2.6μm)色谱柱对1-氨基-4-甲基哌 嗪进行测试,回收率106.8%,可达到要求。
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