示差折光检测器属于中等灵敏度浓度型检测器,其响应值取决于柱后流出液折射率的变化,采用含有样品的流出液与不含样品的流出液的同一物理量的示差测量。由于每种物质都有各自的折射率,因此示差折光检测器对所有物质都有响应,是一种通用型检测器,具有广泛的适用范围。
在应用开始前,使用流动相冲洗样品池和参比池。然后关闭参比池,让溶剂仅从样品池中流过。流动相在两个池中的示差折光相同,并且可以调整零点玻璃的位置,使检测器可以达到光平衡,让每个二极管获得同样的光线量。
示差检测器结构及原理
光线自W灯经过透镜、狭缝之后,先后透过流通池的参比方(也叫参比池)、样品方(也叫样品池),再经过反射到达终点——光电二极管,把光信号转化成电信号。检测器所输出的信号值(基线),与A和B的能量差值有关,分析前要确保光斑处于在A和B的中间位置。
如果参比方和样品方的成分是一样,即光的折射角一致,光斑就会抵达光电二极管的中间位置,A和B信号差值为零,此时(归零后)检测器输出的信号为零;如果样品方的成分发生了变化,参比方和样品方的成分变成不一致,两者对光的折射角有差异,光斑即会落在光电二极管的偏A侧或B侧,检测器会输出一个明显的+信号或-信号,即基线会变成正值或负值。
示差检测器使用注意事项
1.正确放置溶剂瓶和废液瓶
要把溶剂瓶和废液瓶放在比示差折光检测器和容剂泵还要高的位置,这样可以使样品池有一定压力,有利于优化检测器的性能。
2.示差折光检测器不能用做梯度洗脱
由于介质的改变和压力的波动都会影响基线的稳定性,所以使用示差折光检测器时不能进行梯度洗脱。
3.保证检测器的温度恒定
光学系统和流动相的温度对基线的稳定性影响很大。示差折光检测器可在比室温高5℃到55℃的范围内控温。建议将温度设为比室温高5℃,并确保柱温箱的温度与检测器保持一致。温度不宜过高,因为介质的折光指数随温度升高而降低,温度过高会使灵敏度降低。
4.不可让流通池承受过大的压力
示差折光检测器流通池的反压约为5bar,如果还要在系统里连接其他检测器或馏分收集器,必须将它们连接在示差折光检测器之前。即示差折光检测器在流路系统里必须放在最后,如果还要在系统里增加一个检测器,必须放在示差检测器的前面,以防压力增大时损坏流通池。
同时建议在运输或搬迁示差检测器到其他场所时,流通池里最好装有异丙醇,这是为避免在周围环境温度降低时使流通池破裂。
5.某些溶剂随长时间存放而改变会造成基线的漂移
例如乙腈/水的混合物中乙腈的含量会降低,四氢呋喃会变成过氧化物,在吸湿性有机溶剂中的水量会增加,而保存在参比流通池中的溶剂如四氢呋喃会产生气体。
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