对甲苯磺酸作为一种有机强酸,常被用于与有机碱类药物成盐,增加其水溶性。然而,由于合成工艺中醇类溶剂的广泛应用,使其极易与残留醇类生成对甲苯磺酸酯。其中,对甲苯磺酸甲酯(PTSM)和对甲苯磺酸乙酯(PTSE)已被证明具有基因毒性。
按照欧洲医药评价署(EMEA)的要求,必须对药物和药品中任何可能存在、未在早期合成步骤中予以清除的所有基因毒性杂质进行检测,确保其含量低于1.5μg/d的毒理学关注阈(TTC),这对于检测方法的灵敏度是一个极大的挑战,是当前原料药质量研究和过程控制中的难点之一。目前,针对磺酸酯类杂质的检测,较为成熟的方法有欧洲药典中收载的GC-MS衍生法,但该法存在以下局限:1.采用的衍生化策略增加了操作难度和工作量;2.衍生的产物-碘代烷烃见光易分解,稳定性差,不便样品的大批量测定;3.受检测方法原理的限制,API或基质中存在的甲酯和乙酯可以参与衍生反应,导致严重的假阳性结果。
由于上述原因,我们推出了基于LC-MS/MS系统的检测方法,用于对甲苯磺酸甲酯-乙酯的检测。该方法具有无需衍生、灵敏度高、分析时间短等优点,可以用于原料药及制剂产品中对甲苯磺酸酯类杂质的常规检测放行。
2.1 试剂
乙腈:HPLC级;氨水:HPLC级;超纯水。
2.2 仪器
超高效液相色谱及串联质谱联用仪
2.3 色谱条件
3.1 色谱柱的选择
由于本方法所需的流动相pH值较高,我们筛选了不同厂家的高pH值耐受性色谱柱。如图1所示, 岛津有机杂化硅胶填料的色谱柱(Shim-pack Scepter-HD-C18)在高pH值下的耐受性和柱效均更优。
图1 不同厂家耐碱色谱柱柱性能对比图
3.2 重复性
取对照溶液重复6次进样,结果(见图2)表明本方法重现性和精密度良好。
图2 对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯对照溶液图
3.3 灵敏度
如图3所示,通过推算,可以得知该方法的检测限和定量限约为0.1ng/mL和0.2ng/mL,灵敏度极高。
图3 1ng/mL对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯色谱图
3.4 线性
如图4所示,1~100ng/ml浓度的对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯线性拟合结果R2= 1.00,结果优异。
图4 对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯标准曲线
3.5 准确度
在原料药溶液中,分别加入5ng/mL、25ng/mL、100ng/mL的对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯进行加标回收率实验,各加标浓度的回收率在88-94%之间。
综上所述,本方法的准确度和精密度良好、工作曲线相关性优异、灵敏度高、抗干扰能力强、操作简便且适用范围广,可以作为原料药/制剂中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯含量测定的优选解决方案,尤其适用于限度低和基质条件复杂的情况。
作者:谢璟雯,上海熙华医药科技有限公司,上海应用技术大学学士,2020年6月加入熙华医药,从事分析方法开发及验证工作。
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