方案摘要
方案下载应用领域 | 制药 |
检测样本 | 原料药 |
检测项目 | 限度检查>有关物质 |
参考标准 | 2015年版《中国药典》头孢氨苄有关物质项下方法 |
在C18系列色谱柱中,使用资生堂CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm(A6AD04229)色谱柱分析头孢氨苄有关物质结果最优,能够实现杂质对照溶液及高温破解所得分离度溶液的分离。在供试品溶液分析中,由于浓度较高,△-2-头孢氨苄被包于主峰中,客户反馈属正常现象,单独考察低浓度头孢氨苄与其异构体△-2-头孢氨苄的混合溶液分离情况,能够达到1.17的分离度结果。 在头孢氨苄及其异构体△-2-头孢氨苄的分离中,相比C18柱,资生堂CAPCELL PAK PFP S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm(TQAD01002)色谱柱能够达到分离度为4.84的良好分离结果,在杂质对照溶液及供试品溶液的分析中,能够得到满足药典分离要求的良好结果,供客户参考。
2015年版《中国药典》头孢氨苄有关物质的分析
客户提供了头孢氨苄工作对照品、杂质7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸、α-苯甘氨酸、△-2-头孢氨苄对照品和80℃条件下破解供试品溶液所得的分离度溶液。现要求本实验室选择合适的C18色谱柱,实现头孢氨苄的有关物质分析。
在头孢氨苄有关物质分析中,流动相为高水相条件,故本实验室首先尝试使用能在高水相下稳定使用的高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm(柱号:A6AD04229) ,对80℃破解所得分离度溶液进行分析,结果见图1。
图1 80℃破解溶液及空白溶液分析所得色谱图(C18 AQ色谱柱)
*注:峰上所标数字为分离度,下同。
如图1,头孢氨苄主峰保留时间为21.09 min,主峰与前后杂质分离度分别为2.42和3.37,达到药典要求的基线分离。
进一步分析杂质对照品溶液和供试品溶液,如图2,杂质7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)和α-苯甘氨酸的分离度为11.19,符合药典要求。
图2 杂质对照品溶液分析所得色谱图(C18 AQ色谱柱)
如图3,对供试品溶液进行分析,各杂质间分离度良好。
图3 头孢氨苄供试品溶液分析所得色谱图(C18 AQ色谱柱)
客户要求考察低浓度(10 μg/mL)下头孢氨苄与其异构体△-2-头孢氨苄的分离情况,在客户允许调整柱温(30℃~40℃)的前提下进行分析,如图4,当柱温设定为30℃时,头孢氨苄与△-2-头孢氨苄的分离度最佳,为1.17。
图4 头孢氨苄及△-2-头孢氨苄混合溶液分析所得色谱图(C18 AQ色谱柱)
为使客户有更多色谱柱选择,本实验室又进一步尝试了资生堂中等极性色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII以及高碳载量色谱柱SUPERIOREX ODS进行分析。
使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱在30℃条件下对头孢氨苄及其异构体△-2-头孢氨苄进行分离,分离度为1.05,分离效果不及CAPCELL PAK C18 AQ;使用SUPERIOREX ODS色谱柱进行分析,分离度为1.18,分离效果略优于AQ柱,但在分析破解所得分离度溶液时,杂质峰形及分离效果不佳。
在对头孢氨苄及其异构体△-2-头孢氨苄的分离中,本实验室也尝试使用键和金刚烷基团的高表面极性色谱柱CAPCELL PAK ADME和键合五氟苯丙基、对同分异构体有良好分离能力的CAPCELL PAK PFP色谱柱进行尝试。
由于ADME色谱柱保留较强,在原梯度条件下未得到待测物洗脱,提高梯度条件中有机相比例后,亦未得到理想的分离效果;而使用CAPCELL PAK PFP S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm(TQAD01002)色谱柱进行分析,能得到4.84的分离度(见图5)。表1为各色谱柱分离度结果对比。
图5 头孢氨苄及△-2-头孢氨苄混合溶液结果(PFP色谱柱)
表1 各色谱柱分离度结果对比(色谱柱规格S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm)
进一步,使用PFP色谱柱在原色谱条件下对供试品溶液、杂质对照溶液、△-2-头孢氨苄对照溶液、高温破解溶液及空白溶液进行分析。供试品溶液中各杂质能得到良好分离,主峰头孢氨苄与杂质△-2-头孢氨苄分离度为1.78(见图6),杂质对照品溶液中7-ADCA和α-苯甘氨酸的分离度为7.28(见图7)。
图6 供试品溶液、空白及△-2-头孢氨苄溶液分析所得色谱图(PFP色谱柱)
图7 80℃破解溶液及杂质对照溶液分析所得色谱图(PFP色谱柱)
综上实验结果,在C18系列色谱柱中,使用资生堂CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm(A6AD04229)色谱柱分析头孢氨苄有关物质结果最优,能够实现杂质对照溶液及高温破解所得分离度溶液的分离。在供试品溶液分析中,由于浓度较高,△-2-头孢氨苄被包于主峰中,客户反馈属正常现象,单独考察低浓度头孢氨苄与其异构体△-2-头孢氨苄的混合溶液分离情况,能够达到1.17的分离度结果。
在头孢氨苄及其异构体△-2-头孢氨苄的分离中,相比C18柱,资生堂CAPCELL PAK PFP S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm(TQAD01002)色谱柱能够达到分离度为4.84的良好分离结果,在杂质对照溶液及供试品溶液的分析中,能够得到满足药典分离要求的良好结果,供客户参考。
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