方案摘要
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检测项目 | |
参考标准 | 非对映异构体 |
在本应用案例中,样品来自某新药研发公司的合 成实验室,为合成过程中得到的一对非对映异构体。 常规的正相分离无法达到纯化目的,反相高压制备则 由于其上样量限制和成本问题也不适合。因此,三 泰科技的应用工程师尝试利用快速制备液相色谱仪 SepaBean machine T配合SepaFlash C18反相分 离柱对样品进行分离纯化,成功获得了满足纯度要求 的目标产物,为此类非对映异构体的快速制备纯化提 供了经济高效的解决方案。
实验部分
1. 样品信息
本应用案例中样品的结构式如图3所示,其分子结构式中具有2个手性中心,图3中列出了可能存在的两种构型的结构式。
图3. 样品分子可能存在的两种构型。
1. 样品初步分析
利用HPLC对样品进行了初步的纯度分析(参见图4),分析HPLC图谱可知,样品中的两个组分具有非常近似的保留时间,对后续的Flash制备分离提出了挑战。为了提高分离度,将多根Flash柱串联使用是一种简便易行的方法(参见三泰科技之前发布的应用案例《多根分离柱串联以提高分离度在化合物纯化方面的应用》),在后续的Flash分离实验中,我们采取两根分离柱串联的设置,并对进样体积进行控制。
图4. 粗品的HPLC分析图谱。
1. 样品的Flash制备纯化
样品的Flash分离纯化实验参数如表1所示。
表1. Flash制备纯化实验参数设置。
仪器 | SepaBean® machine T | |
分离柱 | 25g SepaFlash® C18反相分离柱, 两根串联 (球形硅胶, 20 – 45 μm, 100 Å, 订货号: SW-5222-025-SP) | |
检测波长 | 220 nm; 254 nm | |
流动相 | 溶剂A: 水; 溶剂B: 乙腈 | |
流速 | 15 mL/min | |
进样量 | 0.75 mL (100 mg) | |
洗脱梯度 | 时间 (min) | 溶剂B (%) |
0 | 20 | |
56 | 83 | |
95 | 83 | |
100 | 87 | |
100.5 | 100 | |
105 | 100 |
结果与讨论
图5. 两根分离柱串联的Flash制备模式示意图。
如图5所示,利用2根SepaFlash C18反相分离柱串联,以提高对样品组分的分离度。样品的Flash制备图谱如图6所示。
图6. 样品的Flash分离图谱。
对收集的2个组分利用HPLC进行纯度分析(参见图7),结果表明:纯化后收集的两个组分的纯度均达到98%以上,符合纯度要求。
图7. 纯化后两个组分的HPLC分析谱图。
本案例中利用串联的2根25 g规格的SepaFlash C18反相分离柱对100 mg样品成功进行了分离纯化。在后续的方法放大中,若采用330 g规格的相同填料Flash柱,单次上样量可以达到600 mg左右,与手性分离柱或制备型HPLC相比,无疑该方法具有通量更高且成本更低等优势。
结论
三泰科技出品的SepaBean machine配合SepaFlash系列C18反相分离柱,可以为用户提供快速高效的样品制备纯化解决方案,助力实验室研究人员轻松完成各类样品纯化任务。
如需进一步了解SepaBean machine的详细规格信息,或配套使用的Flash纯化柱订购信息,请访问ChemBeanGo在线商店:https://store.chembeango.com/。
SepaFlash® Phenyl 色谱柱在苯二氮卓类药物化合物的分离纯化
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