方案摘要
方案下载应用领域 | 食品/农产品 |
检测样本 | 蜜饯 |
检测项目 | |
参考标准 | GB5009.35-2016 |
食品合成着色剂,也称为食品合成染料,被广泛应用到食品的加工过程中。鉴于合成着色剂的不安全性,国家加强了对这类合成着色剂的监管,制订了食品合成着色剂的测定标准(GB5009.35-2016)。
蜜饯和糖果中8种合成着色剂的测定
(Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱)
《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》
食品合成着色剂,也称为食品合成染料,被广泛应用到食品的加工过程中。鉴于合成着色剂的不安全性,国家加强了对这类合成着色剂的监管,制订了食品合成着色剂的测定标准(GB5009.35-2016)。
逗点生物依据国标的征求意见稿,建立了固相萃取-高效液相色谱法测定食品中8种合成着色剂含量的方法,样品经乙醇氨水提取后,经PWAX混合型弱阴离子交换柱净化,采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证,8种合成着色剂在0.10 μg/mL到10 μg/mL范围内线性良好,R^2>0.995,加标回收率在80%-110 %范围内,符合测试需求。
1、 样本前处理
1.1样品提取
准确称取样品2 g(精确至0.001 g),置于50 mL具塞离心管中,加入25 mL乙醇氨水溶液(硬糖需要先加入2 mL水超声使其溶解),涡旋1 min,50℃超声提取20 min,8000 转/分钟离心5 min,取上清液置于50 mL离心管中,残渣中再加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50 mL,即得提取液。准确吸取提取液10 mL,50℃下氮气浓缩至2 mL左右,分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解,作为待净化液。
注:乙醇氨水溶液配制,量取无水乙醇700 mL,加入4 mL氨水,用水稀释并定容至1 L,混匀。
1.2试样的净化浓缩
先依次用6 mL甲醇和6 mL水活化WAX固相萃取柱(150 mg/6 mL),保持柱体湿润,将待净化液注入柱中,控制流出液流速在1滴/秒,弃去流出液。再依次用6 mL 2%甲酸水和6 mL甲醇淋洗,弃去淋洗液,抽干小柱。最后用6 mL 2%氨化甲醇洗脱,分两次加入,收集洗脱液,于50 ℃氮吹至近干。准确加入2 mL pH=9的乙酸铵溶液溶解,过0.45 μm PTFE滤膜,弃去2~5滴初滤液,取续滤液作为待测液。
1.3空白实验
1.3.1过程空白:取一支洁净的50 mL具塞离心管,不称取试样,按照上述1.1和1.2进行提取、净化,浓缩,取续滤液上机测试。
1.3.2空白本底实验
称取样品2 g(精确至0.001 g)按照上述1.1和1.2进行提取、净化,浓缩,取续滤液上机测试。
2、 标准系列工作液
精密移取着色剂混标中间液(1 μg/mL)0.10 mL、0.20 mL于2个1 mL色谱瓶中,再吸取混合标准中间液(10 μg/mL)0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50mL于3个1 mL色谱瓶中,分别用水定容至1 mL,混匀,得标准系列工作液。浓度分别为0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、2.00 μg/mL、5.00 μg/mL和10.0 μg/mL。
3、 仪器条件
仪器:ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱:CommaSil® C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)
流动相:A:20 mmol/L乙酸铵溶液 B:甲醇
洗脱方式:梯度洗脱,见表1
流速:1 Ml/min
柱温:30 ℃
进样量:10 Μl
检测器:紫外检测器
检测波长:415 nm、520 nm、610 nm
表1 梯度洗脱程度
时间/min | A/% | B/% |
0.01 | 90 | 10 |
12.0 | 65 | 35 |
19.0 | 55 | 45 |
22.5 | 50 | 50 |
23.0 | 45 | 55 |
24.0 | 35 | 65 |
34.0 | 35 | 65 |
35.0 | 90 | 10 |
42.0 | 90 | 10 |
4、 实验结果
4.1 加标回收
表1 加标浓度7.5 mg/kg竞品比对结果
样品 | 化合物 | 平均回收率(%)n=3 | ||
Copure® | A品牌 | D品牌 | ||
山楂 | 柠檬黄 | 91.3 | 95.4 | 94.3 |
新红 | 95.5 | 96.1 | 94.3 | |
苋菜红 | 94.4 | 93.1 | 93.6 | |
胭脂红 | 92.3 | 88.9 | 85.8 | |
日落黄 | 92.6 | 95.3 | 95.1 | |
诱惑红 | 94.5 | 96.2 | 96.0 | |
赤藓红 | 94.5 | 90.6 | 71.2 | |
亮蓝 | 94.4 | 95.7 | 93.7 |
表2 加标浓度12.5 mg/kg竞品比对结果
样品 | 化合物 | 平均回收率(%)n=3 | ||
Copure® | A品牌 | D品牌 | ||
硬糖 | 柠檬黄 | 92.8 | 96.9 | 100 |
新红 | 103 | 99.8 | 103 | |
苋菜红 | 105 | 98.2 | 101 | |
胭脂红 | 106 | 65.3 | 90 | |
日落黄 | 82.7 | 80.8 | 80.1 | |
诱惑红 | 103 | 103 | 101 | |
赤藓红 | 88.3 | 80.3 | 77.3 | |
亮蓝 | 101 | 97.3 | 96.4 |
图1 加标浓度为7.5 mg/kg时山楂中8种合成着色剂液相色谱图
图2 加标浓度为12.5 mg/kg时硬糖中8种合成着色剂液相色谱图
5、 注意事项
1.在使用乙醇氨水溶液提取时,需要提取两次以上,提取一次可能会导致提取不充分,导致回收率偏低。
2.过柱前确认样液的Ph值<6,以便于合成着色剂目标化合物和填料PWAX更好的结合。
3.上机之前过滤所用的针式过滤器不能使用尼龙针式过滤器,会吸附部分合成着色剂,导致回收率偏低,建议使用PTFE亲水针式过滤器。
4.在检测赤藓红时,需要注意在使用离心管氮吹时会有少量的赤藓红会附着在离心管上,可以采用涡旋和超声的方法进行溶解,使用玻璃的氮吹管更易溶解;或者在溶解的时候加入一定量的甲醇便于赤藓红的溶解。
六、订购信息
货号 | 描述 | 包装 |
COPWAX6150 | Copure®混合型弱阴离子交换柱,PWAX,150 mg/6 Ml | 30支/盒 |
HC1801 | CommaSil® C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm) | 1根/盒 |
SDC-3000-D | biocomma® 多管涡旋混匀仪 | 1台/箱 |
BN24 | biocomma® 24孔智能氮吹仪 | 1台/箱 |
SF130-22-PTFE-HL | 亲水性PTFE针式过滤器,直径13mm,孔径0.22 μm,有机系 | 100个/盒 |
SC2-1 | 2 mL蓝色聚丙烯盖,白色PTFE/红色硅胶垫,9-425 | 100个/盒 |
V2-AL-N | 2 mL螺纹棕色样品瓶,带书写处11.6*32 mm,9-425 | 100个/盒 |
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