氯化锂沉淀法去除质粒DNA制备物中的小片段核酸

2019/08/27   下载量: 0

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应用领域 生物产业
检测样本 其他
检测项目
参考标准 氯化锂是强脱水剂,可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b),并剥离染色质上的蛋白质(Kondo 1979)。

质粒粗提物中的高分子质量 RNA 和蛋白质可在高浓度氯化锂溶液中形成沉淀,从而可通过低速离心加以分离(实例请见Kondo et al. 1991)。

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实验原理:

氯化锂沉淀法去除质粒制备物中小片段核酸(包括 DNA RNA ) 的原理是基于两种核酸在氯化锂溶液中的溶解度有所不同。氯化锂是强脱水剂,可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b),并剥离染色质上的蛋白质(Kondo 1979)。因此,质粒粗提物中的高分子质量 RNA 和蛋白质可在高浓度氯化锂溶液中形成沉淀,从而可通过低速离心加以分离(实例请见Kondo et al. 1991)

 

实验材料:DNA 样品

试剂、试剂盒:乙醇  异丙醇  LiCl  乙酸钠  TE

仪器、耗材   :Sorvsll SS-34 转子或性能相同的替代转子

 

 

操作步骤:

一、材料

 

1. 缓冲液和溶剂

 

乙醇,异丙醇,LiCl ( 4 mol/L),乙酸钠(3mol/L, pH 5.2)TE ( pH 8.0),含有浓度为 20 μg/ml RNase A TE ( pH 8.0)

 

2. 核酸和寡核苷酸

 

DNA 样品,CsCl 密度梯度离心纯化。

 

3. 离心机和转子

 

Sorvsll SS-34 转子或性能相同的替代转子

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