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白介素1 (IL-1)是一种多肽,分子质量为17 ku,有 IL-1a 及 IL-1β 两种亚型。IL-1a 由159个氨基酸组成;IL-1β 含153个氨基酸;两者由不同的基因分别编码。虽其氨基酸顺序仅有26%的同源性,然而IL-1a 和IL-1β 以同样的亲和力结合于相同的细胞表面受体,发挥相同的生物学作用。IL-1受体(IL-1r)IL-1r几乎存在于所有有核细胞表面,每个细胞的IL-1r数目不等,少则几十个(如t细胞),多则数千个(如成纤维细胞)。IL-1r主要有两种类型:一种为IL-1r1,其分子伸入胞浆内的肽链部分较长,起着传递活化信号的作用;另一种为IL-1r2,胞内部分的肽段较短,不能有效地传递信号,而是将胞外部分的肽链释放到细胞外液中,以游离形式与IL-1结合,发挥反馈抑制作用。gm-csf、g-csf及IL-1自身均可提高细胞IL-1r的表达水平,而tgf及皮质类固醇能降低IL-1r的表达。
产品名称:人白介素1(IL-1)ELISA试剂盒
英文名称:Human IL-1 ELISA KIT
使用目的:本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中的指标含量。
注:本试剂仅供科研,不得用于临床!
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中指标水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算浓度。
简介:
白介素1 (IL-1)是一种多肽,分子质量为17 ku,有 IL-1a 及 IL-1β 两种亚型。IL-1a 由159个氨基酸组成;IL-1β 含153个氨基酸;两者由不同的基因分别编码。虽其氨基酸顺序仅有26%的同源性,然而IL-1a 和IL-1β 以同样的亲和力结合于相同的细胞表面受体,发挥相同的生物学作用。IL-1受体(IL-1r)IL-1r几乎存在于所有有核细胞表面,每个细胞的IL-1r数目不等,少则几十个(如t细胞),多则数千个(如成纤维细胞)。IL-1r主要有两种类型:一种为IL-1r1,其分子伸入胞浆内的肽链部分较长,起着传递活化信号的作用;另一种为IL-1r2,胞内部分的肽段较短,不能有效地传递信号,而是将胞外部分的肽链释放到细胞外液中,以游离形式与IL-1结合,发挥反馈抑制作用。gm-csf、g-csf及IL-1自身均可提高细胞IL-1r的表达水平,而tgf及皮质类固醇能降低IL-1r的表达。
人白介素1(IL-1)ELISA试剂盒包括:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;
(7)酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的最终体积而异,在板式ELISA中一般采用2mol/L。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可在小试管中进行稀释。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
结果判定方法
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
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