细菌、酵母、真菌、霉菌、放线菌常用培养基汇总!
百欧博伟生物:自然界的微生物由于种类不同,它们对营养的需求也有差别,因此在菌种分离、保藏以及工业发酵中,都要根据该菌株对营养需求的特点来配制相应的培养基。
在科研生产上按所用原料不同,又可分两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基。含化学试剂的培养基,大多为合成培养基。由于液体培养基不适合长期保留,现已有公司改制成粉末。培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此保管时必须防潮、避光,置低温处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的储存必须放在2~6℃的冰箱内。常见培养基有以下一些。
一、细菌培养基
配方一:牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏0.03g,蛋白胨1.0g,氯化钠0.05g,琼脂1.5g,水100ml。在烧杯内加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,置火上加热,待各组分溶解后,加人琼脂,不断搅拌以免粘底。待琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH为7.2~7.6,分装各试管,加塞,用高压蒸汽灭菌30 min备用。
配方二:肉汤培养基
取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250g,用刀剁成肉末,加人500ml蒸馏水和5g蛋白胨。煮沸,转文火炖2h,过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液调pH为7.5左右。每支试管内加人10ml。肉汤和少量碎肉末,灭菌,备用。
配方三:根瘤菌培养基
葡萄糖10g,磷酸氢二钾0.05g,碳酸钙3g,硫酸镁0.02g酵母粉0.04 g,琼脂20g,水1000ml,1%结晶紫溶液1mL。先把琼脂加水煮沸溶解,再分别加入其他组分,搅拌溶解后,分装,灭菌,备用。
配方四:LB培养基
LB培养基的配方如下:胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L,酵母提取物(Yeast extract) 5g/L,氯化钠(NaCl) 10g/L,
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)。
二、放线菌培养基
配方一:淀粉琼脂培养基(高氏培养基)
可溶性淀粉2g,硝酸钾0.1g,磷酸氢二钾0.05g,氯化钠0. 05g,硫酸镁0.05g,硫酸亚铁0.001g,琼脂2g,水100 mL。先把淀粉用5ml水调成糊状后,倒入95mL水,搅匀后加入其他药品,使其溶解。煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH为7.2~7.4,分装后灭菌,备用。
配方二:面粉琼脂培养基
面粉60g,琼脂20g,水1000mL。用水将面粉调成糊状,加水到500mL,文火煮30min。另取500mL水,放入琼脂,加热煮沸到溶解,把两液调匀,补充水分,调整pH到7.4,分装,灭菌,备用。
三、真菌培养基
配方一:萨氏(Sabouraud's)培养基
蛋白胨10g,琼脂20g,麦芽糖40g,水1000mL。先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40g麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,溶解后分装,灭菌,备用。本培养基可培养许多种类真菌。
配方二:马铃薯糖琼脂培养基
取200g切成小块,加水1000ml,煮沸30 min后,补足水分。在滤液中加入10g琼脂,煮沸溶解后加糖20g(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。将该培养基的pH调为7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。
配方三:豆芽汁培养基
黄豆芽100g,琼脂15g,葡萄糖20g,水1000mL。洗净黄豆芽,加水煮沸30min,用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌溶解,补足水分到1000 mL,分装,灭菌,备用。将该培养基的pH调为7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌。配方四:豌豆琼脂培养基豌豆80粒,琼脂5g,水200 mL。取80粒干豌豆加水适量,煮沸1h,纱布过滤,在滤液中加入琼脂,煮沸溶解,分装,灭菌,备用。
四、酵母培养基
1、基础培养基
YPD 或YEPD:Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L),又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基
配方:1% Yeast Extract(酵母膏),2% Peptone(蛋白胨),2% Dextrose (glucose)葡萄糖,(若制固体培养基,加入2%琼脂粉)
配制方法:
(1)溶解10gYeast Extract(酵母膏),20gPeptone(蛋白胨)于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉
(2)加入20g Dextrose (glucose)(葡萄糖)
(3)高压 115 度 15min
注:葡萄糖,yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应,导致培养基成分变化,所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌,也可以115℃ 15min灭菌,(葡萄糖溶液灭菌后加入)。
2、基本培养基
配方一:NaAc 10g, (NH)2SO4 5g, NaHPO4 0.05g, MgSO4-7H2O 1g,维生素B 100ug,蒸馏水100mL,处理琼脂2g ,pH自然,121℃灭菌15min;
配方二:葡萄糖2%, KHPO4 0.0 1%, MgSO4 · 7H2O 0.05%,(NH)2S04,0.05% ,处理琼脂2%。蒸馏水配制,pH 6.0,121℃灭菌15min;
配方三:葡萄糖10g, NaCl 0.01g, (NH)2SO4 1g,微量元素母液1mL, K2HPO4 0.0125g,维生素母液1mL, KI 0.0001g, MgSO4·7H2O 0.05g, CaCl·2H2O 0.01g,蒸馏水1000mL。 pH 5.5~6.0,115℃灭菌25min;
微量元素母液:HPO4 1mL,ZnSO4·7H2O 7mg,CuSO4-5H2O 1mg, CaCl2-6H2O 5mg,蒸馏水 100mL。
维生素母液:烟碱酸 40mg,肌醇 200mg,泛酸 20mg,对氨基苯甲酸 20mg,核黄素 20mg,维生素B 40mg,生物素 0.02mg,吡哆醇 40mg,蒸馏水 100mL。
3、YNB培养基
YNB培养基由以下A、B、C三种溶液组成:
A液,维生素混合液:维生素B 1000mg,烟酸 400mg,吡哆醇 400mg,生物素 20mg,泛酸钙 2000mg,核黄素 200mg,肌醇 10000mg,对氨基苯甲酸 200mg,无离子水 1000mL;
B液,微量元素液:HBO4 500mL,MnSO4 ·7H2O 200mg,ZnSO4-7H2O 400mg, CuSO4-7H2O 40mg, FeCls•6H2O 100mg,Na2MnO3 200mg,无离子水 1000mL。
C液,其它无机盐液:KI 0.01mg,CaCl2-2H2O 0.01g,K2HPO4 0.015g,KH2PO4 0.085g,MgSO4·7H2O 0.05g,NaCl 0.01g,无离子水1000ml。
配制方法:取A液1mL、B液1mL、C液10mL、无离子水1000mL,混合,调pH为6.5,即成。说明:①配制YNB时,先分别将已灭菌分装的A、B液各1mL与C液10mL,在无菌条件下混合,再将已灭菌的(NH4)2SO4按0.05%的量加人到无离子水中,混匀即可。
注:配制糖发酵培养基时,方法同上,只是按2%浓度加入不同的糖液。
五、食用菌菌种培养基
配方一:马铃薯-蔗糖-琼脂培养基
20%马铃薯煮汁1000 mL,蔗糖20 g,琼脂18 g。马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取小块200 g,加水1000 mL,煮沸20min后,过滤。 在滤汁中补足水分到1000 mL,即成20%马铃薯煮汁。在汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。pH要求不严,可以不测定。
配方二:综合马铃薯培养基
20%马铃薯煮汁1000 mL,磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5 g,葡萄糖20 g,维生素10 mg,1脂18g。先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH到6,分装,灭菌,备用。该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
六、蓝藻培养基
BG-11培养基
母液1: NaNO3,300mg/mL,NaCO3,4mg/mL;
母液2: MgSO4·7H2O 15mg/mL;
母液3: CaCl2·2H2O;
母液4:柠檬酸(CA) 1.2mg/mL,FeCA 1.5mg/mL,Na2EDTA 0.08mg/mL;
母液5: KHPO4 ·3H2O 8mg/mL:
母液6: HBO3 2.86mg/mL,MnCl-4H2O 1.81mg/mL,ZnSO4·7H2O 0.0222mg/mL ,NaMoO4·2H2O 0.03mg/mL,CusO4-5H2O 0.079mg/mL,Co(NO3)2·6H2O 0.0494mg/ml。
取母液1、2、3、4、5各5mL,取母液6 1mL,加蒸馏水至1000mL,调pH值为8。0.0 BG-11固体培养基含琼脂1% 。
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