小鼠角膜上皮细胞

原代培养原理和应用：

一、细胞原代培养是通过特殊分离方法从胚胎、组织器官以及外周血中分离获得单细胞，置于合适的培养基中培养，在无菌、适当温度和一定条件下，使细胞生存、生长和繁殖的过程。原代培养的“代”并非细胞的代数，是指细胞培养的次数，从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段，都属原代培养，一般持续1-4周。常见的原代培养过程如图1所示。

二、原代培养细胞直接来源于活体组织，体外培养也尽量模拟体内环境，使得分离得到的细胞接近生物体内的生活状态，可作为研究生物体细胞的生产、代谢、繁殖、凋亡提供有力手段，亦可用于各种药理作用、药物开发研究和临床实践。

三、原代细胞的质量取决于多个因素：取材、培养条件的优化、无菌操作，特别是组织分离技术等。对于大多数研究者而言，想要获得高质量的原代培养细胞仍然比较困难。尽管原代培养技术已较普遍，但是有时仍会得到一些难以解释的结果。拥有行政许可的洁净级实验动物中心，已构建细胞培养和实验平台，可分离培养数百种人、大小鼠和大型动物的原代细胞，并在此基础上提供相关细胞实验服务，包括细胞培养、细胞转染以及细胞药物刺激后各种增殖、侵染和凋亡实验。

小鼠角膜上皮细胞

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介：

公司实验室分离的小鼠角膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的小鼠角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

细胞简介：

小鼠角膜上皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下：①角膜是唯一的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能，分三层细胞层，外层即是上皮细胞；②角膜上皮细胞能参与先天性免疫，能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统；③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。

贴壁细胞传代操作步骤：

用移液管或者巴氏吸管吸取培养液；

使用不含钙镁离子的平衡盐溶液（PBS）冲洗细胞1-2次；

弃PBS，加入胰蛋白酶-EDTA消化液（消化液浓度根据各细胞不同有调整），轻轻摇晃培养瓶，使胰酶与细胞表面充分接触，37 ℃孵育2-3 min，加入含血清完全培养基终止消化。

将细胞悬液移入离心管中，800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清，加入预热的完全培养基重悬细胞，轻轻吸打混匀，吹打过程中尽量不要出现气泡。

细胞计数，根据细胞量选择合适的传代比例，最后转移置37 ℃细胞培养箱中进行培养。

 悬浮细胞传代操作步骤：

悬浮细胞由于本身在生长培养基中悬浮，无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞损伤较小。悬浮细胞传代，通常有两种方法，直接传代法和离心传代法。

（1）直接传代法

①　悬浮细胞长满至80%-90%左右（细胞悬液变黄，最大细胞密度随细胞系不同而有所差异），即可传代；

②　用吸管吸弃细胞悬液1/2～2/3；

③　加入适量的新鲜培养基，继续培养。

（2）离心传代法

①　将细胞悬液转移到离心管内；

②　800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清；

③　使用新鲜的培养基重悬细胞；

④　吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。

公司正在出售的产品：

WYE-354  1062169-56-5  C24H29N7O5

Dihydrodaidzein  17238-05-0  C15H12O4

Org 27569  868273-06-7  C24H28ClN3O

Cytidine 5-triphosphate  65-47-4  C9H16N3O14P3

CGP 57380  522629-08-9  C11H9FN6

BMS 453  166977-43-1  C27H24O2

CCG-63802  620112-78-9  C26H18N4O2S

Fosaprepitant dimeglumine salt  265121-04-8  C37H56F7N6O16P

EHT 1864  754240-09-0  C25H29Cl2F3N2O4S

Destruxin B  2503-26-6  C30H51N5O7

TTP 22  329907-28-0  C16H14N2O2S2

HLI 373  502137-98-6  C18H23N5O2.2HCl

ONO 2506  185517-21-9  C11H22O2

Ertapenem (sodium salt)  153832-38-3  C22H23N3O7S • 2Na

Dexrazoxane  24584-09-6  C11H16N4O4

小鼠血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA试剂盒 ，英文名： VEGFR-3/Flt-4 ELISA Kit

小鼠胶原酶I(CollagenaseI)ELISA检测试剂盒MouseCollagenaseIELISAKit 96T/48T

人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)免疫试剂盒 Human myosin light chain kinase,MLCK ELISA Kit

RatClusterin,CLUELISAKit大鼠凝聚素(CLU)ELISA试剂盒规格：96T/48T

10倍酵母菌SD-P/URA培养基100毫升

MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISA试剂盒小鼠Ⅱ型胶原(ColⅡ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

小鼠角膜上皮细胞小鼠Klothoβ蛋白(KLβ)ELISA试剂盒 ，英文名： KLβ ELISA Kit

人己糖激酶(HK)ELISA检测试剂盒HumanHexokinase,HKELISAKit 96T/48T

大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)免疫试剂盒 Rat Bone morphogenetic protein receptor 1A,BMPR-1A ELISA Kit

CLIAKitforVZV-IgG(HumanVaricellazostervirusIgG)ELISAKit人水痘带状疱疹病毒IgG规格：48T/96T

麻风杆菌(LeprosyBacilli)染色试剂盒50次

ELISAKitFcαRⅠ/CD89人免疫球蛋白AFc段受体Ⅰ规格：48T/96T

小鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human leishimaria aibody (Leishimaria Ab) ELISA Kit 人利什曼原虫抗体(Leishimaria Ab)ELISA试剂盒

HumanAi-Saccharomycescerevisiaeaibody,ASCAELISAKit 人抗酿酒酵母抗体(ASCA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

C4ELISA试剂盒鲑鱼补体蛋白4规格：96T/48T

鱼类组织元素比色法定量检测试剂盒20次

MouseInsulieceptorβ,ISR-βELISAKit小鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISA试剂盒规格：96T/48T