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关于美标产品伸长率标距的标定:此产品标准中规定了标距为50mm,这是在直径为12.5mm的情况下,如果试棒直径不为12.5mm,那么这里的标距50mm,是不是也应该相应的发生变化啊?我查询了一下相关美标,这里的标距直径比为4:1。[img=,690,283]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907311946573042_9439_3502509_3.png!w690x283.jpg[/img][img=,690,364]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907312003150252_3773_3502509_3.png!w690x364.jpg[/img][img=,690,552]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907312003164602_9274_3502509_3.png!w690x552.jpg[/img]
本文主要从酶标仪的几个测量参数出发,再结合酶标仪的测量系统的几个关键部件,讨论测量得到数据出现问题时,可以通过调整那些部件尽量得到合格的测量值;在酶标仪的结构上有不清楚的,可以参考本人第三届原创大赛作品【第三届原创大赛】酶标仪的内部结构、故障判断以及排除测量原理:酶标仪的测量原理与紫外分光光度计一样,都是采用朗伯比尔定律;不过一般的酶标仪都是采用滤光片获取单色光【紫外分光光度计一般采用菱镜或者光栅】,关于如何获得每孔的光密度值一致,在后面将有介绍;线性相关性、重复性是很重要的,为此还需要稳定的测量溶液【标准板一般人都没有,所以选用了重铬酸钾的稀硫酸溶液】;测量方法与数据设备准备:两台酶标仪【最好有一台是鉴定合格的,一台是备用的,本次使用的两台新仪器,有一台已经鉴定合格】,含板孔的酶标板两块;试剂:重铬酸钾【分析纯】,硫酸【分析纯】,去离子水试剂配制:硫酸配制:取2.7ml浓硫酸加入到去离子水中,【一边加入硫酸,一边搅拌,顺序不可颠倒,否则很危险】冷却后定容到1L备用浓度一:称取0.35g重铬酸钾固体,加入到100ml硫酸溶液中溶解;浓度二:取20ml浓度一的溶液,加入到20ml硫酸溶液中混匀;浓度三:取10ml浓度一的溶液,加入到30ml硫酸溶解中混匀浓度四:取5ml浓度一的溶液,加入到35ml硫酸溶液中混匀浓度五:取2.5ml浓度一的溶液,加入到37.5ml硫酸溶液中混匀浓度六:直接用硫酸溶液即可测量模块每个孔中加入200ul溶液,具体的溶液如下板一第一、二列为浓度六溶液,第三、四列为浓度五的溶液,以此类推布满整个板板二选用浓度二的溶液,布满整个板每个空中加入200ul数据讲解首先使用板一进行两次间隔性,首次测定数据如下【8*12模块】http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312025_343315_1600026_3.jpg间隔三个小时后进行第二次测定,得到的数据如下http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312033_343319_1600026_3.jpg完成第二次测定以后,将该板转移到另一台经过第三方机构鉴定过的酶标仪上进行测定,数据如下;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312034_343320_1600026_3.jpg数据处理,经过计算,得到如下这个数值,并用Excel做了处理,得到相应的相关系数,乃至曲线公式首次测定http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312037_343321_1600026_3.jpg二次测定http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312037_343322_1600026_3.jpg对比测定数值http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312040_343325_1600026_3.jpg用板二测定得到如下数值,只要是测定横排的变异系数,最后还做了一下大概的不确定度计算,2.8%的整板变异,还算行吧;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312041_343326_1600026_3.jpg这就是大名顶顶的检测器,可一次完成八孔测定,整版完成需要十二次测定,一旦污染,板一测定过程中得到的CV%将变得很大;所以板一测得数据的CV很大时,可以检查一下这个地方是不是被污染了;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312330_343444_1600026_3.jpg下图就是已经变成单色光以后的光源,一个八个,对应上图的八个检测器,它采用了光纤传导技术,即一束经过了滤光片的光束照在很多根光纤上,每根光纤射入的光能量基本相同,再将这些光纤从数量上分为均一的8股,每股对应下图的一个光源,从而尽可能的保证每个光源的能量一致;板一的CV太大时也需要对此进行检查;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312331_343445_1600026_3.jpg光源与检测器【背面】的相对位置,已经部分检测器的电路原件;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312333_343448_1600026_3.jpg光源的旁边是一个定位用的感应器,用于定位;两个螺丝用于调整板孔停留的位置,不能乱动,只有在发现吸光度值均明显与标准酶标仪吸光度不同时,并且换过钨灯无效的情况下,再对此进行核查校准【一般情况下不动为好】http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312332_343447_1600026_3.jpg下图是板孔定位器,配套上图的感应器使用;图中的每个空代表一个停留点一个十二个位置,也就是每列孔停留测定定位;当板二的CV较大时,大家可以看看是不是这个定位卡条被损坏;有时候酶标仪报错显示“酶标板错误”时,也有可能是定位感应器被异物堵塞了感应不上http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312334_343449_1600026_3.jpg下图为酶标仪的外观图,这张图片是老图片了,大家可以在我去年的一篇原创中看到更对的酶标仪图片http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112312335_343450_1600026_3.jpg说道这里,很对的点已经差不多了,在此还有需要做一些说明1、Excel在处理线性系数的时候,0.999以上的直接被显示为1,这个已经通过第三方软件测试2、两台酶标仪时新仪器,两者的差异很小,数据接近,但时间太紧,用了一些去年的老图片上传了,不过结构完全一致的;3、选用重铬酸钾硫酸溶液的原因主要是应为它稳定,重复性测试的误差值相对更加真实一些;4、仪器的检验校准是一件很大的事情,所以我们不仅要知道所以然,还要知道其所以然【现象和原理都要知道】;最后,希望以后大家在写这类的时候,也把所有的东西都写进去,更加便于学习和处理存在的问题,当然上述提到的可能会有很多问题,希望大家提出意见一起讨论,一起学习;
酶标仪校正程序1.滤光片波长精度检查:将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下,用UV-2201型紫外-可见分光光度计(波长精度±0.3nm)于可见光区对每个滤光片进行扫描,其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。2.通道差与孔间差检测:通道差检测是取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑,透明,无污染以酶标板架作载体, 将其(内含200ul甲基橙溶液吸光度调至0.500A左右)置于8个通道的相应位置,蒸溜水调零,1于490nm处连续测三次,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性,可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家,同一批号酶标2板条(8条共96孔)分别加入200ul甲基橙溶液(吸光度调至0.100A左右)先后置于同一通道,蒸溜水调零,于490nm处检测,其误差大小用±1.96s衡量。n 零点飘移(稳定性观察):取8只小孔杯分别置于8个通道的相应位置,均加入200ul蒸溜水并调零,于490nm处每隔30分钟测一次,观察各个通道4小时内吸光度的变化。附1:酶标仪校正程序3.精密度评价:每个通道3只小杯分别加入200ul高中低3种不同.浓度的甲基橙溶解,蒸溜水调零,于490nm作双份平行测定,每日测二次(上下午各一次),连续测定20天。分别计算其批内精密度,日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的CV值。4.线性测定:用电子天平精确称取甲基橙配制5个系列的溶液,于490nm平行测8次,取其均值。计算其回归方程,相关系数及标准估计误差s,并用±1.96s表示样品测量的误差范围.双波长测定评价:取一分甲基橙溶液,分别加入3种不同浓度的溶血液(测定波长为490nm,校正波长为585nm),先后于8个通道检测,每个通道测3次,51比较各组之间是否具有统计学差异,以考察双波长消除干扰组分的效果。5.一般酶标仪无585nm滤光片,可选用550nm或630nm滤光片。450nm 滤光片的检定选用普鲁兰溶液(校正波长为630nm)