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固相萃取,高效液相色谱法直接测定饮料中的改性胭脂虫红【生活中的仪器分析】食品安全——饮品卫生大检测胭脂虫红是提取于雌性胭脂虫的一种蒽醌类天然动物色素,我国食品添加剂使用卫生标准GB2760-2011规定:胭脂虫红(以胭脂虫红酸计)可用于碳酸饮料,最大使用量为0.6g/Kg,配制酒最大使用量0.25g/Kg,冷冻饮品最大使用量0.15g/Kg。对胭脂虫红酸的测定研究,国内有福建省产品质量检验研究院的林钦,陈永煊等(1) ,广州分析测试中心的喻凌寒等(2),北京联合大学应用文理学院的丁靖等(3),上海市质量监督检验技术研究院的虞成华(4)等,中国林业科学研究院资源昆虫研究所的郭元亨(5)等。而作为商品应用的胭脂虫红,通常是经过改性的,是一种水溶性钙铝色淀。本文对此种钙铝色淀进行检测研究,并与胭脂虫红酸检测进行比较。1 实验部分1.1仪器与材料Agilent Technologies 1260 高效液相色谱仪,色谱柱:ZORBAX SB-C18 StableBond Analytical 4.6*150mm 5-MicronAgilent Technologies 6530 Accurate-mass Q-TOF LC/MS,色谱柱:CNW.Athena UHPLC C18 2.1mm×100mm.1.8um. ANPEL,P/N LAEO-2110uA固相萃取柱:用100-200目聚酰胺粉自制,迪马ProElut PLS 500mg 6ml。改性胭脂虫红液体样品:广州市威伦食品有限公司提供,自制改性胭脂虫红标准品:经低温(50度)减压干燥制备。1.2实验过程1.2.1 固相萃取适用范围适用于水性饮料中胭脂虫红色素的测定。1.2.2提取吸取5mL饮料,200uL甲酸于试管中摇匀,作上样液待净化。1.2.3净化聚酰胺固相萃取小柱制作:取3mL的固相萃取用空柱,下端放些脱酯棉,将75-150um的聚酰胺粉加入甲醇成浆状,湿法装填,上用玻璃棒压实后聚酰胺填料厚度约为2cm。a活化:2mL酸化甲醇(500mL甲醇+10mL甲酸)和2mL水淋洗活化。流出液弃去;b上样:将待净化液加入小柱,流出液弃去;c淋洗:5mL水溶液,流出液弃去,将小柱抽干;d洗脱:5-10mL1%氨水/甲醇(1:1)溶液洗脱至无色,收集流出液,2%甲酸/甲醇溶液调至中性e重新溶解:40度下将洗脱液减压蒸馏(或氮吹)至近干,用50%甲醇水溶液溶解并定容至1mL,用0.2umPTFE滤膜过滤后HPLC分析1.2.4色谱条件流速:1.0mL/min进样量:10uL柱温:30度检测器:UV510nm流动相:A:0.05mmol/L乙酸铵,B:甲醇梯度设置时间/min02[size=1
固相萃取,高效液相色谱法直接测定饮料中的改性胭脂虫红胭脂虫红是提取于雌性胭脂虫的一种蒽醌类天然动物色素,我国食品添加剂使用卫生标准GB2760-2011规定:胭脂虫红(以胭脂虫红酸计)可用于碳酸饮料,最大使用量为0.6g/Kg,配制酒最大使用量0.25g/Kg,冷冻饮品最大使用量0.15g/Kg。对胭脂虫红酸的测定研究,国内有福建省产品质量检验研究院的林钦,陈永煊等(1) ,广州分析测试中心的喻凌寒等(2),北京联合大学应用文理学院的丁靖等(3),上海市质量监督检验技术研究院的虞成华(4)等,中国林业科学研究院资源昆虫研究所的郭元亨(5)等。而作为商品应用的胭脂虫红,通常是经过改性的,是一种水溶性钙铝色淀。本文对此种钙铝色淀进行检测研究,并与胭脂虫红酸检测进行比较。 1 实验部分1.1仪器与材料Agilent Technologies 1260 高效液相色谱仪,色谱柱:ZORBAX SB-C18 StableBondAnalytical 4.6*150mm 5-Micron Agilent Technologies 6530Accurate-mass Q-TOF LC/MS,色谱柱:CNW.Athena UHPLC C18 2.1mm×100mm.1.8um.ANPEL,P/N LAEO-2110uA 固相萃取柱:用100-200目聚酰胺粉自制,迪马ProElut PLS 500mg 6ml。改性胭脂虫红液体样品:广州市威伦食品有限公司提供,自制改性胭脂虫红标准品:经低温(50度)减压干燥制备。 1.2实验过程1. 固相萃取适用范围适用于水性饮料中胭脂虫红色素的测定。2. 提取吸取5mL饮料,200uL甲酸于试管中摇匀,作上样液待净化。3. 净化聚酰胺固相萃取小柱制作:取3mL的固相萃取用空柱,下端放些脱酯棉,将75-150um的聚酰胺粉加入甲醇成浆状,湿法装填,上用玻璃棒压实后聚酰胺填料厚度约为2cm。a活化:2mL酸化甲醇(500mL甲醇+10mL甲酸)和2mL水淋洗活化。流出液弃去;b上样:将待净化液加入小柱,流出液弃去;c淋洗:5mL水溶液,流出液弃去,将小柱抽干;d洗脱:5-10mL1%氨水/甲醇(1:1)溶液洗脱至无色,收集流出液,2%甲酸/甲醇溶液调至中性e重新溶解:40度下将洗脱液减压蒸馏(或氮吹)至近干,用50%甲醇水溶液溶解并定容至1mL,用0.2umPTFE滤膜过滤后HPLC分析 4. 色谱条件流速:[font=Times New Roma
食品中苏丹红染料检测的固相萃取方法一、实验目的本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法,HPLC法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程,节省有机溶剂的使用,操作简便。 二、实验目标物 苏丹红Ⅰ(CAS:842-07-9),苏丹红Ⅱ(CAS:3118-97-6),苏丹红Ⅲ(CAS:85-86-9),苏丹红Ⅳ(CAS:85-83-6)三、应用范围本方法适用于食品中苏丹红染料的HPLC检测及确证。 四、参考标准 推荐性国家标准《GB/T 19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法》五、实验材料 ALN固相萃取柱3mL/500mg。六、实验方法 1、样品提取 称取均质试样2.0g试样(精确至0.001g)于50mL离心管中,加入20mL正己烷,超声5min,过滤,用10mL正己烷洗涤残渣数次,至洗出液无色,合并正己烷液,用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下。 2、SPE柱活化 向氧化铝柱小柱中加入6.0mL正己烷活化。 3、上样和洗脱在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样,立即倒入上述待净化溶液,用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶,一并注入层析柱,待样液完全流出后,视样品中含油杂质的多少用10-30ml正己烷洗柱,直至流出液无色,弃去全部正己烷淋洗液,用含5%丙酮的正己烷液60ml洗脱,并收集洗脱液。 4、重新溶解 50℃缓慢氮气流条件下吹至近干,用丙酮转移并定容至5ml,经0.45um有机滤膜过滤后上液相色谱仪测定。 5、HPLC条件色谱柱:XR-ODS Ⅱ C18(2.0mm ×75mm×2.2μm)流动相:A;B:丙酮=80:20] 梯度洗脱表1 梯度洗脱条件[table=395][tr][td] 时间/min [/td][td] B/% [/td][td] A/% [/td][/tr][tr][td] 0.00 [/td][td] 25 [/td][td] 75 [/td][/tr][tr][td] 1.50 [/td][td] 25 [/td][td] 75 [/td][/tr][tr][td] 4.00 [/td][td] 100 [/td][td] 0 [/td][/tr][tr][td] 8.00 [/td][td] 100 [/td][td] 0 [/td][/tr][tr][td] 8.01 [/td][td] 25 [/td][td] 75 [/td][/tr][tr][td] 13.00 [/td][td] Stop [/td][td] [/td][/tr][/table] 流速:1mL/min柱温:30℃进样体积:10μl七、实验结果1、10ppb甜橙基质中苏丹红染料的添加回收结果 加标回收率均大于80%,RSD值小于5,符合标准要求。表2 10ppb甜橙基质中苏丹红染料的添加回收结果[table][tr][td] 名称 [/td][td] 1(%) [/td][td] 2(%) [/td][td] 3(%) [/td][td] 平均回收率(%) [/td][td] RSD(%) [/td][/tr][tr][td] 苏丹红Ⅰ [/td][td] 90.24 [/td][td] 95.67 [/td][td] 94.35 [/td][td] 93.42 [/td][td] 3.03 [/td][/tr][tr][td] 苏丹红Ⅱ [/td][td] 92.56 [/td][td] 95.98 [/td][td] 99.13 [/td][td] 95.89 [/td][td] 3.43 [/td][/tr][tr][td] 苏丹红Ⅲ [/td][td] 95.49 [/td][td] 99.84 [/td][td] 90.19 [/td][td] 95.17 [/td][td] 5.08 [/td][/tr][tr][td] 苏丹红Ⅳ [/td][td] 90.59 [/td][td] 95.16 [/td][td] 101.23 [/td][td] 95.66 [/td][td] 5.58 [/td][/tr][/table]2、 空白样品添加苏丹红染料残留物色谱图[img=,611,356]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508141704_560823_3310_3.jpg[/img]