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高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液,但是如何配制?别不重视!因为,选择配制的方法不同,分析结果,特别是保留时间,是会有显著差别的!一、有机溶剂和水性溶剂的混合方法有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的,但由于混合方法不同,有时分析结果相差很大。如20mM磷酸钠缓冲液(pH2.5)90%与乙腈10%的混合液,混合比为9∶1时,20mM 磷酸钠缓冲液(pH2.5)90%与乙腈10%的体积比为9∶1,也就是可以解释为各自按体积比例的相当量称取后进行混合。另外,按10%乙腈解释,用20mM 磷酸钠缓冲液(pH2.5),将乙腈稀释调制也可以成立。在后者情况下,产生混合体积减少部分,余下的添加20mM 磷酸钠缓冲液。两者虽然没有太大的差别,但由于混合方式不同,分析结果,特别是保留时间,也会有显著的差别,这点必须注意。二、50%或(V/V=1/1)乙腈水溶液的配制方法对于用V/V=1/1的表示配制乙腈水溶液,多按这种方法进行:用量筒测定乙腈500mL,用另一量筒测定水500mL,两种液体在瓶内充分摇晃混合。不过 50%乙腈水溶液的表示时,同样也多是按上述方法配制,但查化学辞典时,实际上是按这种方法进行配制:首先将500mL乙腈,注入1L的量瓶中,量瓶边搅拌边加水,等待液温达到室温,用全量水,使溶液到1L。这样一来,用%表示和“V/V”体积比表示,最终得出的流动相组成不同。也就是说,混合溶剂的密度,与由原溶剂密度计算的单纯平均值不相同,所以用上述两种方法调制的流动相组成差异。如在室温(25℃)附近水50mL和乙腈50mL混合时体积不是100mL,而有所减少,约为96mL。在一般情况下,多用操作简便的第一种方法。三、溶剂体积的温度影响如前所述,溶液的密度受周围温度的影响。刚从溶剂冷藏箱拿出来的溶液温度与实验室的室温相比,要低不少,乙腈和水混合液因发热反应,溶液温度升高。因此,为能调制再现性好的流动相,建议在使用前用水浴(或热水浴)将液温调到接近室温。
[size=3] 高效液相色谱法的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂、或他们的混合液。另外,水性溶剂也常用于缓冲液。虽然我们实际应用较多,但通常对缓冲液的解释往往含糊不清。因此,常因资料上表示的内容与实际的配置方法的不同,而产生流动相的差异,影响色谱图和分析结果。而且,不仅缓冲液,有时候还要考虑到溶剂的混合方法等流动相调制方法方面的漏洞等因素。大家对此说说自己的看法吧~[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09505.gif[/img][/size]
我再跑一个样品配制流动相的时候,方法是:甲醇-,我是把甲醇作为流动相A,然后B相是取20mM甲酸铵放入1000ml纯水中,再向纯水中加入规定量0.2%三乙胺,然后用0.5%甲酸调节PH值到3,问题就在我向水中加入甲酸铵和三乙胺以后,用甲酸很难将PH值调制3,求教是什么情况?