细胞增殖分析

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  • 上海原能细胞生物低温设备有限公司 银牌1年
    400-860-5168转4607
    原能细胞科技集团由知名创业企业家瞿建国先生和上市公司开能健康（股票代码：300272）等于2014年创立，实收资本15亿元人民币。原能细胞总部位于上海张江国家科学城药谷核心区域拥有占地60多亩的原能细胞产业园、原能细胞科创园两大园区，同时也是上海张江细胞科技产业园的核心基地。原能细胞科技集团是创业老兵瞿建国先生在成功创办两家上市公司（老八股申华实业（600653）、创业板开能健康（300272）后再次创业，致力于“天下无穷人、地上无病人”的全民健康使命。 原能细胞科技集团下辖上海原能细胞生物低温设备有限公司、上海原能细胞医学技术有限公司、上海原能细胞库有限公司，围绕细胞生物产业构筑细胞生物低温设备、细胞医学技术与新药研发、细胞库等领域产业生态发展圈。原能细胞科技集团与海内外顶尖专家、中国一流研究型医院（复旦大学附属中山医院、上海交通大学附属仁济医院、上海市第一人民医院、海军军医大学附属长征医院等）、著名研究机构（中科院上海免疫所等）、生命科学院、著名生物研发药企等开展了多层面，多方式的合作，建有多个联合实验室和细胞治疗临床中心，开辟了细胞生物产业化发展新局面。 上海原能细胞生物低温设备有限公司是国家高新技术企业并获得ISO90001认证。公司致力于生物医学设备及系统国际前沿领域发展，集研发、设计、生产制造为一体，自主研发的全流程深低温、自动化、信息化、智能存储设备，实现超低温（-80度）、深低温（-196度）等温区全覆盖，实现生物样本与“活细胞”程序降温、冷链运输、存储、入库/出库等全流程自动化、智能化、信息化，广泛应用于分子临床转化医学中心、研究型医院样本中心、生物医药研发企业/CRO/CDMO、生命科学研究机构、大学生命科学院、医学院等。公司BSN系列设备（液氮自动化存储设备）获得CE 认证，BSN200项目获批2020年首批上海市高新技术成果转化项目。公司已申请PCT国际及国外专利、中国专利200+项，获得授权120+项、软件著作权多项。 公司与国际深低温生物顶尖专家等合作，建设业内唯一的低温生物冷冻技术平台，为低温设备研发、冻存技术研发等提供前沿核心技术保障。依托公司自动化、智能化、信息化、临床级低温存储设备及解决方案，原能细胞科技集团在张江细胞产业园打造了全国首家、国际领先的千万级临床“活细胞库”，掀开了细胞存储产业化新篇章。
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  • 香港环球分析测试仪器有限公司 银牌23年
    400-860-5168转0264
    环球分析测试仪器有限公司(UATIL)成立于1982年，总部设在香港，是国外多家知名的高新科技仪器生产制造商在中国的独家总代理。主要产品电化学仪器：电化学工作站、光电化学测试设备 化学合成仪器：全自动反应系统、反应量热仪、超声波结晶系统、平行合成仪、高温高压釜、流动化学系统 萃取及纯化仪器：超临界萃取仪、快速制备色谱、固相萃取、溶剂蒸发仪、气体纯化系统 生命科学仪器：生物反应器、发酵罐、冷冻干燥机、移液工作站、离心浓缩仪 乳品分析仪器：乳品成分分析仪、体细胞计数器、奶牛生产性能测试仪 材料测试仪器：网格应变测试仪、杯凸试验机 惰性环境仪器：手套箱 微流控仪器：单细胞测序、细胞包裹、微流控芯片、微流泵、液滴微流控系统、3D芯片打印机
    主营产品： 电化学工作站   超临界萃取   发酵罐   反应器  
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  • 瑞绅葆分析技术（上海）有限公司 银牌9年
    400-860-5168转3729
    当今世界，科学研究成果日新月异，百花齐放。大量的科学研究只有转化为技术才能更好的服务于全人类。瑞绅葆致力于为科研工作者提供有形的技术支持，从理论设想，理论验证，原型设计，过程表征，成品测试提供全方位的个性化定制服务。瑞绅葆自成立以来，以客户有效需求为中心，组建了专业的研发，设计、生产、交付和服务团队。贴近客户，认真聆听客户声音，全力满足客户有效需求。以服务赢口碑，以口碑图发展。凭借着专业的团队和对行业的理解，本着以客户有效需求为中心，技术为本，服务至上的理念，瑞绅葆已逐渐赢得了业内人士和众多客户的一致好评和广泛信赖，成为国内多家著名检测机构和专业院校及科研单位合作伙伴。我们的业务服务范围：实验室、分析测试中心，技术中心等平台服务项目：- 个性化定制服务：为科研工作者提供各种技术支持和产品支持，包括但不限于机械产 品设计，电路设计，过程自动化，零件的设计及加工等非标个性化订制服务- 提供通用分析仪器、设备及耗材服务- 提供实验室设备的维护保养，维修服务我们的产品- 压片机- 研磨机- 球磨机- 循环水冷机- 熔样机- 金属磨样机- 漂移监控样- 各种非标定制产品及系统
    主营产品： 压片机   研磨机   熔样机   冷水机  
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  • 赛多利斯 Incucyte® 活细胞分析系统 400-805-0826
    赛多利斯Incucyte 实时活细胞分析系统，可有效捕获培养箱中细胞的变化。系统支持高分辨率荧光和明场图像采集，能够实现数小时、数天或数周内数据的实时记录。系统使用灵活，从增殖分析到肿瘤球免疫杀伤检测，均可协助用户实时观察和定量复杂的生物变化。集成式软件可以简化数据分析，快速获得结果，并生成可供发表的图表和绘图。 技术优势 1. 灵活简单的样品制备：兼容多种培养容器- 在正式开始实验前，可用免标记法分析细胞融合度，监测培养瓶/ 培养皿，以确保细胞健康- 可用 96 和 384 孔板同时开展多种实验，一次性可容纳多达6 块板Incucyte 试剂可显著提高效率- 检测试剂对细胞健康和形态无影响- 采用经过验证的活细胞检测试剂和配套方案，可节省实验优化和问题查找分析的时间2. 简单灵活的实验设置快捷设置，一步完成- 向导式操作界面，可指引用户设置自动采集和分析参数- 可容纳多个用户同时使用，支持不同的采集频率和图像放大倍数- 远程监测：凭借免费许可证，即可从联网端口控制您实验室里的Incucyte 系统 向导式界面可快速进行实验设置，即使您初次使用，也能轻松完成。3. 多种成像模式获取和查看实时图像- 可采集优质高清相差、红色和绿色荧光图像以及视频- 通过自动对焦，可选择 4 倍、10 倍或 20 倍物镜成像，同时用于多个应用领域- 对细胞干扰最小- 别具匠心的移动光学设计即细胞保持静止状态，让光学元件移动，尤其适用于分析敏感和非贴壁细胞- 采取非侵入性、非干扰性图像采集模式，对整个生物学过程进行长期监测，展现出其本来状态 自动获取实时图像。4. 实时自动分析-可重复的高效图像：根据不同应用领域，选择相应的数据处理和分析模块，可对数千幅图像进行可重复的定量分析，消除操作偏差- 强大的可视化图像和动态检测：专为生物学家开发的可定制的灵活工具，能够快速评估结果，缩短从生成数据到发表的时间 使用Incucyte VesselView 立即查看培养容器中所有位置的图像，并快速评估实验结果，对感兴趣的图像可以放大通过mask 自动识别感兴趣的区域生成时间间隔的图表，可直接用于演示使用Incucyte PlateGraph可立即查看所有96 或384 孔动态趋势，并导出数据以计算EC50 或IC50 值 广泛应用 细胞健康- 细胞增殖：采用免标记法实时自动监测细胞生长，或用NucLight&trade 核标记法实时自动测量活细胞数目。- 细胞凋亡：采用简单的均相方法实时检测活细胞凋亡情况。- 细胞毒性：采用均相法实时检测细胞活性，操作简单，适用于筛选。- 神经突分析：对单纯的神经元培养物、及其与星形胶质细胞的共培养体系，自动实时检测神经突动力学。- 肿瘤球：实时监测肿瘤球的形成、生长和健康状态，并进行定量分析。细胞迁移和侵袭- 划痕迁移和侵袭：研究处理因素对细胞迁移（2D基质）或侵袭（3D凝胶）的效应。- 趋化作用：使用ClearView&trade 96孔板查看并确认趋化因子介导的趋化迁移或侵袭效应。细胞功能- 免疫细胞成簇：无需从培养箱中取出，即可对细胞成簇和扩增进行观察和定量分析。- 抗体内化：适用于抗体筛选或治疗分析的快速、动态、高通量检测。- 免疫细胞杀伤：通过对NucLight&trade 核标记的细胞直接计数或利用IncucyteCaspase 3/7 试剂检测凋亡，来分析肿瘤细胞死亡。- 细胞吞噬：对细胞吞噬pHrodo标记的生物颗粒或靶细胞进行连续分析，并生成视频。- 血管生成：使用我们的共培养检测全套试剂盒，完成血管形成的动力学分析。监测细胞和其他工作流程- 活细胞免疫细胞化学：采用新的免疫细胞化学方法揭示表面蛋白表达的动力学。- 细胞培养QC：无需从培养箱中取出细胞，即可免标记监测细胞形态和增殖。- 克隆稀释：自动扫描克隆，并通过全孔分析验证单克隆性。- 转染效率：采用GFP/RFP 监测和定量分析基因转染的效率和动态变化。- 报告基因：实时检测启动子驱动的重组GFP/RFP 报告基因表达活性。提出新问题- 设计以前无法开展的新实验- 可用于日常监测，也可通过基于图像的动态检测，解答独特的科学问题获取新答案- 实时连续分析，不错过任何一个数据点- 剖析随时间变化和因细胞而异的生物活性- 通过图像和视频这种可视化方式来验证实验结果保护培养的细胞- 无需将细胞从培养箱内取出或干扰培养环境，即可完成细胞分析- 采用的试剂不会影响细胞健康和形态提高效率- 自动获取和分析图像，轻松便利- 兼容 96和 384 孔板，并完成多重性检测- 同时可容纳多个用户和多种应用
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    厂商： 德国赛多利斯集团
    品牌： 赛多利斯/SARTORIUS
    型号： Incucyte S3, SX1, SX5
    价格： 面议
  • Lionheart LX智能细胞成像分析系统 400-629-8889
    Lionheart LX是一款高性价比的全自动显微成像系统，整个机型设计紧凑，无需人眼通过目镜观察样本，有效的避免长时间人眼观察造成的视觉疲劳，也无需耗费高昂的采购成本和学习成本，搭载具有高内涵分析功能的Gen5软件，可以自动化进行图片拍摄、处理和分析，在实验室应用非常广泛。特点全自动智能显微成像系统：Lionheart LX拥有全自动的6位物镜转轮，能够同时实现4色荧光通道的成像，具有高精度电动载物台，可以自动聚焦、自动曝光、一键式成像，Gen5软件功能可以让用户体检轻松简单的全自动图像拍摄和分析。具有高对比度明场、彩色明场和荧光成像模式：明场、彩色明场和20多种荧光通道成像可选，Lionheart LX 突破多种成像拍摄体验，从Z轴层切（Z-stacking）到Z轴图像展示（Z-projection)，Montage拍摄实现图像拼接，并且具有视频录制、自定义坐标拍摄和高通量整版拍摄功能，极大的拓宽了Lionheart LX在生命科学领域的应用。非标记细胞成像：可以通过高对比度明场进行非标记细胞成像，利用Gen5软件全自动完成图片拍摄、图片处理和结果分析，方法简便，适用于细胞计数、细胞毒性、细胞增殖和融和度相关实验。Lionheart LX典型应用：——终点法活细胞检测细胞凋亡细胞自噬细胞周期细胞毒性线粒体膜电位——组织学（HE）——非标记细胞计数——融合度分析——基因毒性彗星分析γH2AX——表型分析免疫荧光
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    厂商： 安捷伦科技(中国)有限公司
    品牌： 安捷伦/ BioTek
    型号： Lionheart LX
    价格： 面议
  • 赛多利斯 Incucyte® SX5 活细胞分析仪 400-805-0826
    赛多利斯Incucyte 实时活细胞分析系统，可有效捕获培养箱中细胞的变化。系统支持高分辨率荧光和明场图像采集，能够实现数小时、数天或数周内数据的实时记录。系统使用灵活，从增殖分析到肿瘤球免疫杀伤检测，均可协助用户实时观察和定量复杂的生物变化。集成式软件可以简化数据分析，快速获得结果，并生成可供发表的图表和绘图。 Incucyte SX5 实时活细胞分析仪更多色彩，更多发现，更多可能 配备了专利光学组件的全新 Incucyte SX5可以更加深入地分析每个样本的信息。专为活细胞分析设计的颜色多达 5 种，功能更强大。该仪器具有更多通道，可以使用更多试剂。采用专门定制的软件，适用于更多应用领域。帮助您深入了解更多细胞生理学的相关信息。为活细胞分析赋能从每个样本获取更多信息，探索更多应用。支持多达五个不同的荧光通道( 同时可使用三个) 进行长时程活细胞实验。加速实现研究目标通过一个平台，即可完成复杂的免疫- 肿瘤细胞相互作用、神经元共培养突触活动、癌细胞代谢等研究。保护宝贵细胞样本三色光学模块正在申请专利，包括长波长、低光毒性NIR 通道，以及专为长期活细胞试验而设计的试剂。提高生产力最多可并行使用六个微孔板，自动获取并分析图像，为您提供远程控制便利。 关键功能 专为活细胞分析设计- 多达 5 个不同的荧光通道- 每次可同时使用 HD 相位和多达 3 个荧光通道 ( 绿色 /橙色/ 近红外)- 新三色光学模块包含一个长波长，低光毒性 NIR 通道和适用于完整应用的优化试剂- 自动式转台配备 4x、10x 和 20x 物镜支持多个用户- 配备支持 3 个可互换容器的托盘以及 600 多个容器- 最多可以同时放置 6 个微孔板- 通过远程网络访问和无使用限制的许可证，可无缝支持多用户使用 广泛应用 细胞健康与增殖增殖与细胞计数细胞周期细胞凋亡细胞毒作用细胞活性线粒体膜电位　新增！ATP 代谢　新增！细胞功能免疫细胞杀伤抗体内化免疫细胞化学吞噬作用神经突动力学神经元活动血管新生三维细胞建模肿瘤球生长与活性肿瘤球侵袭类器官QC 新增！细胞运动与形态趋化性迁移和侵袭划痕迁移和侵袭
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    厂商： 德国赛多利斯集团
    品牌： 赛多利斯/SARTORIUS
    型号： Incucyte SX5
    价格： 面议
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细胞增殖分析相关的资讯

  • 细胞增殖检测新技术——EdU 取代BrdU
    直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一，是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法，其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物&mdash &mdash BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期，和细胞一起孵育的BrdU能掺入DNA分子中，再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合，就能够检测到DNA复制活跃的细胞。 但BrdU有一大缺点，就是需要变性DNA后才能与抗体结合，但这就破坏了DNA双链结构，影响了其他染料的结合染色，导致染色弥散，准确性降低等问题。哈佛大学医学院细胞生物学家Adrian Salic就认为：&ldquo 为了能够暴露BrdU的抗原表位，必须用高浓度的盐酸，乙酸或酶解，但经历了如此严重的处理后，细胞原本精巧细致的结构在显微镜下就变得惨不忍睹了。&rdquo 事实上，现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生&mdash &mdash EdU检测。EdU （5-乙炔基-2&rsquo 脱氧尿嘧啶核苷）也是一种胸腺嘧啶核苷类似物，但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见，在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中，基于EdU与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析，可以有效地检测处于S期的细胞百分数。与传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法相比，更简单，更快速，更准确。EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样品变性（酸解、热解、酶解）处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。Adrian Salic特别强调：&ldquo 与传统的免疫荧光染色不同，EdU反应能在几分钟内完成，且不需要进行严格的样品变性处理，使得组织成像更简单易行。&rdquo 细胞增殖检测方法基于EdU与Apollo？荧光染料的完美结合准确检测新合成的DNA，简单，快速，准确。这种检测方法非常快速，且只需简单的几个步骤，因此也适用于高通量筛选试验，如在药物筛选中检测加药后细胞的活力。 图1 BrdU 与EdU 检测原理示意图 表1 BrdU 与EdU 检测优缺点比较 图2 BrdU 需要DNA 变性后才能与抗体结合，导致BrdU、Hoechst 染色弥散，边缘模糊不清； 而EdU 边缘清晰完整，检测更灵敏、更准确EdU可以检测新合成的DNA，而EU则可以检测新合成的RNA。EU是一种尿嘧啶核苷类似物，能够在RNA转录时期代替尿嘧啶（ U ）渗入正在合成的RNA分子，基于EU与Apollo？荧光染料的特异性反应进行RNA检测。EU能够在体内和体外水平检测时间和空间上RNA合成的变化，能够更方便地研究RNA转录位点，结合相关抗体标记能够检测与RNA有相互作用的蛋白。结合EdU和EU进行检测新合成的DNA和新合成的RNA，可以深入开展细胞增殖、细胞周期、细胞毒性、DNA复制及修复、信号通路等方面的研究。
    时间： 2012-05-09
    作者： 上海高创
  • 分子细胞卓越中心等阐释细胞增殖示踪技术ProTracer的建立与应用
    6月2日，《自然-实验手册》（Nature Protocols）在线发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心周斌研究组与西湖大学何灵娟研究组合作完成的研究成果（Genetic recording of in vivo cell proliferation by ProTracer）。该研究阐释了细胞增殖示踪技术——ProTracer的构建及应用，并以肝细胞增殖的示踪为例，论述了如何利用ProTracer技术示踪成体哺乳动物在器官稳态与修复再生过程中的细胞增殖。细胞增殖是多种组织器官发育、稳态维持及修复再生过程中细胞来源的基础。体内细胞增殖由于细胞类型以及所处的时期不同存在较大差异。此前，领域内较为常用的检测细胞增殖的方法主要分为细胞增殖标志物染色、核苷酸类似物掺入及同位素掺入。上述方法对于检测体内细胞增殖均有一定的局限性：细胞增殖标志物染色方法只能检测某个瞬间的细胞增殖状态，核苷酸类似物可以进行长时程的掺入却有一定的细胞毒性，同位素掺入的检测方法比较复杂且不便捷。此外，上述检测方法均无法做到细胞类型特异性的细胞增殖检测。当目的细胞的增殖速率较为缓慢时，利用上述检测方法易出现目的细胞的增殖信号被其他增殖速率较快的细胞增殖信号干扰或淹没的问题。为了解决上述问题，周斌研究组最近建立了能够示踪体内细胞增殖的遗传示踪技术——Proliferation Tracer（ProTracer）。该技术实现了在体内长时间不间断地示踪细胞增殖、细胞类型特异性的细胞增殖检测以及活体检测细胞增殖等多方面的突破。该工作剖析了使用ProTracer技术进行细胞增殖示踪的技术细节，包括小鼠品系的构建、鉴定、交配策略以及细胞增殖示踪的最终检测方法。为了实现体内无缝隙捕捉细胞增殖，研究构建了一个可被诱导变成Cre的CreER小鼠品系——Ki67-Cre-rox-ER-rox（Ki67-CrexER），其中rox是Dre同源重组酶的识别位点。当将Ki67-CrexER小鼠与特定的DreER小鼠结合后，DreER能够在Tamoxifen诱导后入核并识别Ki67-CrexER中的rox位点，同时发生Dre-rox同源重组反应将位于两个rox位点之间的ER序列切割掉，从而在DreER表达的细胞中将诱导性表达的Ki67-CrexER转变为持续性表达的Ki67-Cre，实现时空可控以及细胞特异性的细胞增殖的不间断捕捉。此外，结合荧光素酶报告基因，ProTracer技术也可以实现终身无创检测活体动物内特定细胞类型的增殖，无需处死动物。该工作以成体小鼠肝脏作为示例，探究了对成年小鼠组织中细胞增殖的示踪，包括小鼠交配策略、tamoxifen诱导策略、小鼠损伤模型与组织样本分析等。科研人员利用ProTracer技术探讨了肝脏在成体组织稳态及损伤再生中的肝细胞增殖，并量化了肝脏稳态以及损伤状态下的新生肝细胞数量，发现了肝细胞增殖的区域性富集现象，揭示了成体肝脏中新生肝细胞的主要来源。该工作的发表为领域内使用ProTracer技术研究特定细胞类型的体内增殖示踪提供了便利。研究工作得到中国科学院、国家自然科学基金、科学技术部、上海市科学技术委员会，以及分子细胞卓越中心动物平台和细胞平台等的支持。红色：GS+肝细胞；紫色：E-Cad+肝细胞；绿色：GFP+肝细胞
    时间： 2023-06-06
    作者： 情绪波动
  • 库尔特 细胞研究不可或缺的细胞体积分析
    生物、药物等许多的研究均需要通过观察细胞体积的变化或细胞数目增减的来判断和评估实验的效果。由于细胞所处环境的改变可促使其自身体积做出相应的变化，以便适应改变后的环境大致新的平衡。由于并不能清晰地知道该种细胞体积变化规律，因此必须检测其体积或细胞数目随条件、时间的变化。 　　细胞的发育与细胞分裂周期级数递增均需要连续不断的细胞增殖。 　　在培养液中正在增殖的细胞在其分裂前其体积将增大至原体积的两倍。然而对细胞发育与分裂的速度作如何调整才能保证细胞体积的不变并不明确。因此，测量细胞的体积的变化对了解与控制细胞的发育和周期非常重要。 　　细胞的死亡 　　细胞的增殖与细胞的死亡之间需要一个精细的平衡以保持足够的细胞数量。该种平衡容许细胞作最佳的状态调节以适应各样机能变化的需求。细胞死亡有两种清晰的机制，坏死与凋亡。坏死是一个病理生理的机制，包括细胞膨胀以及细胞膜破裂而释出内容物。凋亡则是一个程序式死亡的机制。凋亡的特征之一就是细胞收缩。细胞有缺陷的凋亡与过度凋亡，两者同样会导致严重疾病。 　　渗透压的补偿 　　任何种类的细胞都有可能因处于不利环境而死亡。细胞犹如多孔的网筛极易因渗入已溶解于周围环境的化学物而使渗透压受影响。细胞内外环境中该些溶解物颗粒数目的不平衡，将会导致水份透进细胞而使其体积涨大，或者是水份从细胞渗出使其体积收缩。 　　当细胞或微生物遭遇环境的变化，它们都会尝试通过自身调节来适应新的环境。 　　细胞平均体积(MCV)的变化 　　当细胞或微生物遭受环境变化时，它们将通过自身调整以图适应新的环境。一些例子中细胞需要改变自身体积以便达到适合的目标。 　　由贝克曼库尔特公司出品的Multisizer 3 库尔特细胞特性分析仪是目前最权威的细胞体积、细胞计数的分析仪器，应用文献多不胜数。无可逾越的领先技术更使Multisizer 3 成为分辨率最高的仪器。国外的用户统计表明，Multisizer 3 已成为细胞实验室必备的研究工具。 　　自华莱士• 库尔特先生发明 库尔特原理 以来，该原理已广泛应用于材料、生物、医学、制药等众多的领域。目前生物领域的细胞计数标准就是库尔特原理。美国材料实验协会ASTM将库尔特原理定为生物细胞计数的标准(ASTM-F2194)。国际血液学标准化委员会亦指定库尔特原理为计算红细胞与白细胞的标准实验室方法 (Clin. lab. Haemat. 1988. 10, 203-212.)。 　　作为库尔特原理及技术应用的鼻祖，美国贝克曼库尔特公司始终保持着技术领先的优势。† 库尔特计数仪(Coulter Counter)无论在研究还是在质量控制的应用均具有深远的影响力。在权威的研究机构及其发表的学术文献当中，库尔特计数仪均担当着不可或缺的角色。 　　多年来贝克曼库尔特公司在市场上推出了一系列的库尔特计数仪(Coulter Counter)，如：ZM、TA II、Multisizer II等系列型号，为科研与产品控制的实验室颗粒/细胞的检测提供最可靠的分析手段。Multisizer 3 型库尔特颗粒/细胞计数及粒度分析仪为当今所有计数仪、粒度分析仪当中分辨率最高的仪器。 　　库尔特原理(Coulter Principle) 　　又称为电感应区技术。 　　悬浮于弱电解液中的细胞被抽吸而经过一个小孔，因产生外加电压而形成“感应区”。细胞经过小孔时，细胞的体积替代了电解液的相应体积。因相应体积的电解液被替代，小孔感应区产生电压脉冲而导致电阻的改变。脉冲的强度与细胞的体积成比例的关系 。 　　Multisizer 3 先进的DPP 数码脉冲处理器，使测量过程中的数以百万计的脉冲信号无须经压缩而保存。数据因无损失而能实现再分析功能。DPP的功能使得Multisizer 3 能够实时监测样品在分析过程中的原始变化。 　　DPP同样可用于检测细胞体积的改变。在许多的生化过程中细胞体积是一个重要的参考因素。如细胞发育、细胞周期、细胞死亡、渗透压的补偿、致病机理和吞噬作用等。Multisizer 3 可以观测细胞粒径与体积从几秒到几小时内的变化。 　　DPP技术在低温生物学中的应用 　　这是在冷冻过程中受渗透压影响的细胞，其平均体积(MCV)的分布曲线和20秒内连续的脉冲峰值平均值的变化。 　　择任意的脉冲群可以将一个粒度分布“分割”成多重的分布。因此，可获得在分析全程中的某一时段的粒度分布。如图示，可获得细胞的平均直径随时间的变化。 　　使用Beckman Coulter 的Multisizer™ 3 库尔特体积粒度分析仪将能方便而精确地测量细胞平均体积(MCV)的各种变化。
    时间： 2009-05-14
    作者： 贝克曼库尔特
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  • 流式细胞仪检测细胞增殖方法有哪些？

    [font=宋体][font=宋体]在生物学和医学研究中，细胞增殖是一个关键过程，对于理解生命活动的基本规律以及疾病的发病机理具有重要意义。随着科技的发展，流式细胞仪作为一种高效、灵敏的分析工具，广泛应用于细胞增殖的检测。流式细胞仪通过快速分析单个细胞，可以对细胞周期、细胞增殖活性、细胞凋亡等多个方面进行研究。本文将探讨流式细胞仪在检测细胞增殖方面的主要方法，包括但不限于溴脱氧尿苷（[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]）掺入法、细胞周期蛋白检测法以及细胞大小分析法等，以期为读者提供全面的技术应用概览。流式细胞仪检测细胞增殖方法：[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]（氚离子）掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]原理：是在细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时，用[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]脱氧胸腺嘧啶核苷代替普通的脱氧胸腺嘧啶核苷掺入新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中，增殖的细胞因为掺入[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]而具有放射性，通过定量检测样品细胞的放射性大小而反映细胞的增值活性[/font][/font][font=宋体][font=宋体]缺点：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）使用的是具有放射性的同位素，操作较为复杂，同时需要采取放射性保护措施 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）低比例高活跃增殖和高比例低活跃增殖可能得到的是相同的结果，用此方法无法进行鉴别 [/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）此方法无法进一步得到具有活性的增值细胞用于下一步的研究 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]） 此方法时间较短，无法检测加入前细胞的增殖情况，而且检测到放射性只能说明细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成，而不能提供合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的细胞是否进入增殖阶段的信息[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、相对计数法[/font][/font][/b][font=宋体]原理：将对照组和各实验组控制在相同条件下直接计数然后比较计数结果得到增殖结论[/font][font=宋体]注意点：[/font][font=宋体][font=宋体]对照组与实验组每种细胞所加浓度必须相同，每组至少设置[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔，这样每个孔可以得到[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]个细胞数，将[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔取平均值后就是这个组的结果。如果同时需要得到每孔目标细胞增殖后的绝对参数，在每孔细胞中加入[/font][font=Calibri]1*105PE[/font][font=宋体]标记的人工微球作为内参[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]收集各组的细胞于[/font][font=Calibri]EP[/font][font=宋体]管中，注意必须尽量将各组的所有细胞都收集起来。标记需要计数细胞的标志表型的荧光素偶联抗体，[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃静置[/font][font=Calibri]30min[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤一次，洗去游离的抗体[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、示踪染料标记法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]示踪染料与细胞结合的方式：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）能够与细胞内的蛋白质上的氨基发生非特异性的共价结合 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）能够非特异性地嵌入细胞膜的脂质双分子层中与细胞发生非共价性结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原理：示踪染料的荧光信号都很强，当细胞分裂时，母细胞内的染料会被平均分配到子细胞中，细胞荧光信号会被减弱一半，所以通过检测减弱的、发射示踪染料荧光信号的细胞比例就可以判断细胞增殖的强弱。当荧光强度减弱到标记时的[/font][font=Calibri]1/2[/font][font=宋体]以及以下的细胞都是增殖后的细胞，这些细胞所占比例越高则代表细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]标记方法：[/font][font=宋体][font=宋体]①纯化增殖反应的目标细胞，将细胞的浓度调整为[/font][font=Calibri]1*106/ml[/font][font=宋体]，加入[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体]，其标记浓度为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]微摩尔[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]升。置于[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃水浴中标记[/font][font=Calibri]15min[/font][font=宋体]，在标记过程中每隔一段时间混匀细胞一次[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②加入预冷、含有血清的培养基终止标记，在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃冰箱中静置[/font][font=Calibri]5min[/font][font=宋体]，离心沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③用培养基再洗涤一次，尽量洗净未结合的游离的[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体]，然后将目标细胞静置在增殖体系中[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]EdU[/font][font=宋体]掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]5-[/font][font=宋体]溴脱氧尿嘧啶核苷是胸腺嘧啶核苷的类似物，其特点是胸腺嘧啶环上[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]位[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]连接的甲基被溴取代，在细胞增殖[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时可以与内源性的胸腺嘧啶核苷竞争掺入到新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中，而[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体可以特异性的识别[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]，不与胸腺嘧啶核苷结合，所以可以用于检测细胞增殖[/font][/font][font=宋体][font=宋体]适用范围：适用于体内检测目标细胞的增殖，一般将[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]掺入小鼠的应用水中或经腹腔注射，经过一段时间后，取出目标细胞制成单细胞悬液然后用多聚甲醛固定细胞，后用打孔剂皂苷在细胞膜上打孔，最后标记荧光素偶联抗[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体，目标细胞的[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]阳性细胞就是增殖的细胞，阳性比例越高，增殖越活跃。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、其他方法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]细胞周期法检测细胞增殖：流式细胞术能够检测细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量，所以可以检测细胞周期。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的细胞，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的量处于二倍体和四倍体之间[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]处于[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期时，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]量为四倍体。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期的细胞比例越高说明细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]检测细胞增殖：[/font][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]（增殖细胞核抗原），在细胞核合成且只存在于细胞核内，是[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]聚合酶的辅助蛋白，所以与细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的合成关系密切，是反映细胞增殖状态的良好指标[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Ki-67[/font][font=宋体]检测细胞增殖：是一种与细胞增殖特异相关的核抗原[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CD71[/font][font=宋体]检测细胞增殖：是转铁蛋白受体，表达于细胞的表面，该受体广泛表达于各种恶性肿瘤细胞表面，正常细胞表达较少，与肿瘤细胞的增殖密切相关[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url]，更多关于流式细胞仪检测细胞增殖详情欢迎咨询，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 细胞增殖与活性测定新选择—CCK8（WST-8）细胞分析试剂盒

    WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT、WST-1或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点，成为细胞增殖与活性测定新选择。国际知名生化试剂供应商Cayman Chemical提供的WST-8 Cell Proliferation Assay Kit（WST-8细胞增殖分析试剂盒）及WST-8，因其超高性价比，受到国内外科研工作者的追捧！ WST-8是一种水溶性四唑盐，常用于评估细胞的代谢活性。在中性pH值及中间电子受体存在的情况下，被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的蓝/紫色甲臜产物（formazan）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。http://www.bio-review.com/wp-content/uploads/2016/04/WST.jpg图1：WST-8作用原理以前，客户习惯用MTT、WST-1法测定细胞增殖，WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点：WST-8溶液对细胞的毒性非常低，细胞在WST-8法检测后仍然可以正常生长MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。WST-8 Cell Proliferation Assay Kit（WST-8细胞增殖分析试剂盒，货号：10010199）及WST-8（货号：18721）。http://www.bio-review.com/wp-content/uploads/2010/06/ads1-earthox.gif产品名称及描述品牌货号产品说明WST-8 Cell Proliferation Assay KitCayman10010199 WST-8 Cell Proliferation Assay Kit特点：比色法、无放射性测定细胞活性及增殖可定量的细胞密度高达5×106cells/ml，每孔可定量2,000-500,000的细胞快速分析，2-4h得结果操作简便、灵敏度高、数据可靠、重现性好这么无敌的试剂盒，价格还便宜！该试剂盒含两种Cayman Chemical专利组分：WST-8 Developer Reagent及Electron Mediator Solution。简便的试剂盒操作步骤如下：将WST-8 Developer Reagent和Electron Mediator Solution等比混合，制成混合物将混合物加入细胞（如果需要测细胞毒性，此过程中加待测药物），共孵育450nm，读取吸光值。http://www.bio-review.com/wp-content/uploads/2016/04/result-1.png图2：白血病细胞活性测定结果建议参考文献：Li, Li, et al. "Protective effects of decursin and decursinol angelate against amyloid β-protein-induced oxidative stress in the PC12 cell line: the role of Nrf2 and antioxidant enzymes." Bioscience, biotechnology, and biochemistry 75.3 (2011): 434-442.Lin, Tzu-yin, et al. "Targeting canine bladder transitional cell carcinoma with a human bladder cancer-specific ligand." Molecular cancer 10.1 (2011): 1.Li, Li, et al. "Decursin Isolated from Angelica gigas Nakai Rescues PC12 Cells from Amyloid-Protein-Induced Neurotoxicity through Nrf2-Mediated Upregulation of Heme Oxygenase-1: Potential Roles of MAPK." Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 2013 (2013).Martinesi, M., et al. "Biocompatibility studies of low temperature nitrided and collagen-I coated AISI 316L austenitic stainless steel." Journal of Materials Science: Materials in Medicine 24.6 (2013): 1501-1513.l向全球科学工作者提供多研究领域的生化、免疫试剂和分析试剂盒，其产品被广泛应用于肿瘤、氧化氮、神经学、凋亡、氧化性损伤、内分泌学等不同研究领域。Cayman Chemical还提供各种有机化合物和生物化合物的定制合成服务，被视为全球最复杂和最不稳定化合物合成的唯一供应商。作为Cayman Chemical在中国的区域总代理，将为中国客户提供最全面的Cayman Chemical产品及客户订制化服务。如果您对以上产品及Cayman Chemical产品感兴趣，

  • 敲低 MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响

    敲低 MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响

    [align=center][size=18px]敲低[/size][size=18px] MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响[/size][/align][size=16px]检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞生长增殖的影响[/size][size=16px]收集[/size][size=16px] H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组[/size][size=16px]细胞细胞[/size][size=16px]离心，并用完全培养基调整细胞浓度，H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、[/size][size=16px] [/size][size=16px]H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 以每孔 1×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞平铺于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2，以每孔 1.3×[/size][size=16px]104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞平铺于 96 孔板中，37℃ 恒温培养箱中培养。铺板后，分别于 24 h、48 h、72 h、96 h、120h 在每孔加入 10 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px] CCK-8 溶液，37℃ 恒温培养箱中孵育 4h。并用酶标仪测定波长 450 nm 处 OD 值，利用 [/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 计算增殖情况。[/size][size=16px]检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响[/size][size=16px]收集[/size][size=16px] H69 、H82 、H526 、SW1271 的对照组和实验组细胞， 其中 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、[/size][size=16px]H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 细胞系以 1×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞/孔的细胞密度接种于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 以 1.3×104 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]细胞/孔的细[/size][size=16px]胞[/size][size=16px]密度接种于[/size][size=16px] 96 孔板中。待细胞融合率约 80%，加入不同浓度顺[/size][size=16px]铂[/size][size=16px]。每组均设置对照组及空白组（仅有同体积培养基）。H69、H82、H526 的对照组和实验组[/size][size=16px]加药浓度梯度为 0、1、2、4、8、16、32、64 nmol/mL，SW1271 对照组和实验组细胞加药浓度梯度为 0、2、4、8、16、32、64、128、256 nmol/mL，（加药浓度梯度根据细胞类型、前期预实验结果及细胞对药物的敏感程度而定）。每种浓度设 6 [/size][size=16px]个[/size][size=16px]复孔，每孔总体积为 100 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px]，培养 24、48、72、96、120 h 后[/size][size=16px]分别检测细胞活力。每孔加入[/size][size=16px] 10 [/size][size=16px]μL[/size][size=16px] 的 CCK-8[/size][size=16px]（避光），培养箱中孵育[/size][size=16px] 4 h 后取出，使用酶标仪测定波长为 450 nm 的吸光度（OD 值）。利用公式：抑制率=（加药组－空白组）/（对照组－空白组）计算增殖抑制率。实验重复 3 次，取平均值。以药物浓度为横坐标，细胞增殖抑制率为纵坐标，利用[/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 绘图。[/size] [size=16px]敲低[/size][size=16px] MSI1 对人小细胞肺癌细胞增殖能力的影响[/size][size=16px]CCK-8 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲[/size][size=16px]瓒[/size][size=16px]，生成的甲[/size][size=16px]瓒[/size][size=16px]物的数量与活细胞的数量呈正比，因此可以直接进行细胞增殖和毒性分析。[/size][size=16px]CCK-8 法 测 生 长 曲 线 实 验 结 果 如 图[/size] [size=16px]3-1 显 示 ， 实 验 组 H69-shMSI1-1 、[/size][size=16px]H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、[/size][size=16px]SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 OD [/size][size=16px]值明显[/size][size=16px]低于对照组。[/size][size=16px]表明敲低[/size][size=16px] MSI1[/size][size=16px]抑制了[/size][size=16px] SCLC 细胞的生长增殖。[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302321138249_2126_5887180_3.png[/img][size=16px] [/size][size=16px]图[/size][size=16px] [/size] [size=16px]MSI1 低表达对 H69、H82、H526、SW1271 对照组和实验组细胞增殖的抑制情况。应用 [/size][size=16px]Graphpad[/size][size=16px] prism5 作图所示（*P0.05,**P0.01,***P0.001,表示与对照组相比，[/size][size=16px]敲低组[/size][size=16px] OD 值减小[/size][size=16px]具有统计学意义）。[/size] [size=16px]测敲低[/size][size=16px] MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响[/size][size=16px]药敏实验结果如图[/size][size=16px] 3-2 所示，与对照组相比，实验组 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、[/size][size=16px]SW1271-shMSI1-2 经不同浓度[/size][size=16px]顺铂处理[/size][size=16px] 24、48、72、96、120 h 后细胞的药物敏感性无明显变化。[/size][size=16px] [/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302321124223_9282_5887180_3.png[/img]

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