基槽检测

红学研究者曹祖义经DNA验证确为曹操后裔，他说最新研究成果支持“曹雪芹祖籍乳山说” 　　曹雪芹是曹操的后代? 　　近日，自称曹操第70代孙的曹祖义称，他提出的“曹雪芹祖籍山东乳山说”经复旦大学现代人类学教育部重点实验室DNA检测结果及家谱比对印证，证实了“曹雪芹是曹操后裔”这一说法。 　　红学研究者： 　　家谱显示我和曹雪芹是本家 　　关于曹雪芹的祖籍，历来说法很多，有丰润、辽阳、铁岭说，有武阳、进贤、花塘说，还有兴城、河北正定说，等等。 　　而曹祖义10多年前就提出了“乳山说”。 　　近日，记者辗转联系到曹祖义。 　　曹祖义，自称曹操第70代孙，1985年起，就开始潜心研究《红楼梦》。起初，他的目的是想弄清楚自己家这个曹姓与曹雪芹是否同宗，经过十多年研究，他结合大孤山曹家清光绪二十年所立家谱，收获了很多“意外”。 　　据曹祖义介绍，300年前他的先辈就生活在乳山，具体位置是当时的宁海州河南村，这在他的家谱中有记载，“吾曹氏原籍四川小云南人氏后，又原籍山东登州府宁海州河南村深水乡神山社二甲人氏”。后经查找有关资料，发现家谱中所述河南村即下初镇河南村。 　　曹祖义说，他在对《红楼梦》多年的研究中发现，曹雪芹把其家谱用“十首怀古诗”灯诗谜的方法，写在《红楼梦》第五十一回中。怀古诗的谜底共记录了十个人，前三个是远祖，第四到第十是曹雪芹的山东始祖曹锡章一直到他这一辈。复原的家谱如下：远祖曹操、曹丕、曹髦 山东始祖曹锡章(曹锡远)——曹霖——曹文龙——曹峦(曹玺)——曹寅、曹宣——曹顒、曹頫——曹雪芹。 　　而东港市大孤山曹家家谱则为：山东始祖曹锡章——曹雲——曹元龙——曹岱——曹宗孔——曹積(曹大汉)——曹延聪。 　　从这个家谱可以看出，曹雪芹家和曹祖义的亲宗辽宁大孤山曹家在起名范字上是一脉相承的，由此可以证明他们两个曹家是同宗谱的本家人，有着共同的祖籍，即当时的宁海州河南村。 　　今年1月中旬，复旦大学现代人类学教育部重点实验室课题组又做了一次关于曹操后裔的DNA检测，工作人员来到山东乳山市下初镇河南村，在该村共取了7个血样或唾液样品，就该村曹姓村民是否为曹操后裔进行考证。 　　经检测，首批抽取的四个样本Y型染色体类型，与前一次曹操后代的Y型染色体检测结果相同。 　　“他们还查看了乳山河南村的曹家家谱，同我们家家谱已对上‘锡、雨、龙、山’四代先祖的范字——这是我们家现存家谱的最早祖先。”曹祖义说，这次DNA检测结果及家谱比对，支持了曹雪芹祖籍“乳山说”。 　　红学研究者： 　　“滴血验亲”证实我是曹操第七十代孙 　　曹祖义说，关于我是曹操后代这一点，复旦大学“滴血验亲”实验已得证实。 　　2009年12月27日，河南省安阳县安丰乡的西高穴村西高穴墓，经考古学者挖掘认定为曹操高陵墓。 　　2010年1月22日，复旦大学现代人类学教育部重点实验室发出征集令，面向全国征集现代曹姓男子DNA，以验证墓中男性遗骨身份到底是不是曹操。得到这个消息后，曹祖义远赴上海，向复旦大学现代人类学教育部重点实验室捐献了3毫升血液。 　　2011年12月29日，复旦大学课题组正式对外发布了研究成果，6支曹姓家族被认证为曹操后代，检测结果证明：辽宁东港大孤山、铁岭腰堡两支曹姓的Y染色体，测得结果均属O2*单倍群(M268+,M95-,M176-)。其中东港曹家的代表人物就是曹祖义。“曹祖义是曹操后代”的说法得到科学上的认证。 　　关于自己是“曹操七十代孙”的说法，曹祖义显得十分自信。曹祖义说，他有两点可以证明其家族确实是曹操的后代。 　　第一，家族口口相传。曹祖义说，根据家谱记载，辽宁东港曹氏于清朝康熙年间从山东闯关东来到东港大孤山，家族口口相传是曹髦(曹操的曾孙，曹丕的孙子)的后裔。 　　第二，根据现有的家谱可以证实。曹祖义表示，“根据族谱和范字规则，从曹髦算起，曹雪芹范‘延’字，是曹操64代孙，而我是曹操的第七十代孙。” 　　目前无计划调查曹操家族DNA与曹雪芹家族关系 　　复旦大学曹操家族基因研究成果是否能证实“曹雪芹是曹操后裔”? 　　复旦大学曹操家族基因研究课题组专家、复旦大学生命科学学院教授李辉对此表示，在血缘关系上，山东乳山的曹家和辽宁东港的曹家确实是一支，但是其家谱中没有记载与曹雪芹家族的血缘关系，目前有关曹雪芹家族的直系后代或同族人的材料存世极少，因此无法判断曹操家族DNA的研究成果与曹雪芹家族之间有何种关系。 　　据介绍，在曹操家族基因研究过程中，自称与曹雪芹家族相关的曹氏族人也在其中，但课题组并没有对此作过专门调查，他们的调查研究都是以曹操为中心展开的。 　　而曹雪芹家族是否是曹操家族的后裔，这不是靠一两支曹氏族群就能够判定的，需要重新梳理、立项才能完成，更需要把自称与曹雪芹家族相关的曹氏族群全部统合起来进行调查，而课题组方面并未有此计划。本报记者 史云峰 　　曹操DNA属比较罕见类型，后人很难假冒 　　复旦大学现代人类学教育部重点实验室李辉教授说：“这个研究持续了三年，因为涉及到采样、实验分析等。我们得到结论是曹操(最有可能)的Y染色体类型，属于一个比较罕见的类型，我们在Y染色体分型上叫做O2-M268类型。” 　　利用DNA进行亲子鉴定技术已经是很成熟的技术，但要鉴定近2000年前的曹操，不可能有绝对可信的样本，怎么办?课题组采用了多条证据链互相印证的办法。首先由遗传实验室广泛征集当代曹氏男性基因样本，绘制出一幅遗传图谱，看看曹姓到底来源于多少个祖先。而历史学者则要通过对各种资料的搜集分析，找出曹操后代可能的线索。在这个过程中首次对数百份曹姓家谱做了一个全面的梳理研究。

二极管阵列检测器——从现象到本质看木犀草素沈国滨 施磊 金燕 01紫外检测器的进阶版本——二极管阵列检测器(Diode Array Detector, DAD)紫外检测器(Ultraviolet Detector, UV)是目前HPLC应用最广泛的检测器，其工作原理是朗伯-比尔定律。紫外检测要求被检测样品组分具有紫外吸收，通常选择在被分析物有最大吸收的波长处进行检测，以获得最大灵敏度和抗干扰能力。可惜这会导致其它组分在该通道下的吸收变弱甚至无紫外吸收。因此，单通道紫外检测器在对目标化合物，特别是未知化合物进行纯度及定量分析时，结果可能会产生严重的偏差。图1 朗伯-比尔定律（A=lg(1/T)=Klc） 二极管阵列检测器(Diode Array Detector, DAD)是一种新型的光吸收检测器，它采用光电二极管阵列作为检测元件，形成多通道并行工作，可对光栅分离的所有波长的光信号进行检测，从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。可得任意波长的色谱图及任意时间的光谱图，具有色谱峰纯度鉴定、光谱图检索等功能，为定性、定量分析提供更丰富的信息。图2 二极管阵列检测器 02 DAD在天然产物构型变化监测时的妙用独一味（学名：Lamiophlomis rotata）是唇形科独一味属植物，有活血祛瘀，消肿止痛的功效，是青藏高原特有的一种重要药用植物。木犀草素是独一味叶中的主要成分 (Luteolin, CAS No. 491-70-3 )，是一种天然弱酸性的黄酮类化合物。木犀草素具有抗炎、抗过敏等作用，可用于治疗COPD、支气管哮喘以及慢性咽炎、变应性鼻炎等引起的慢性咳嗽。图3 木犀草素结构式本文基于赛默飞液相色谱系统和二极管阵列检测器，开发了一种可用于检测中药独一味胶囊提取液中木犀草素含量的方法。通过DAD检测器不仅可以实现定量分析，也可以用于色谱峰的定性分析。同时利用DAD全波长扫描的结果以证实木犀草素在流动相pH变化时会发生最大吸收波长红移，从而影响其在C18色谱中的保留等现象进行解释。 03 实验部分色谱条件流动相pH值对色谱行为的影响图4 流动相不同pH对于保留时间和吸收波长的影响 实验结合文献表明木犀草素对于流动相的pH敏感，依据计算模拟表明木犀草素的pKa 为 6.5±0.4。即在中性时，部分木犀草素可能以极性较强的离子形式存在，保留较弱；当调节pH为酸性时，抑制了电离，使得该分子以分子形式存在。借助二极管阵列检测器（DAD），可以实现全波长扫描，可以获得更全面的紫外光谱信息。木犀草素的紫外吸收波谱也对流动相的pH敏感，不仅保留时间产生了较大的差异，且随着碱性增强，最大吸收波长产生红移。表明该物质会在不同pH条件下产生不同的构象，且构象的变化会引起共轭结构的变化。 样品分析结果图5 标准品与样品对照色谱图（蓝色：标准品，黑色：样品） 图6 样品DAD三维色谱图（插图：8.640分钟的紫外吸收光谱图） 木犀草素保留良好，色谱峰形对称，无杂质干扰，可用于定性和定量分析。在0.3~100 μM 的范围内线性良好，相关系数R2达0.9999。进样精密度良好，标准品和样品的保留时间RSD均小于为0.2 %，峰面积RSD均小于为0.9 %。根据分析标准品保留时间的紫外吸收光谱，可见样品中对应色谱峰的最大吸收波长与木犀草素一致，推断该物质为木犀草素。根据校正曲线计算可得独一味胶囊提取液中木犀草素的摩尔浓度为27.4 μM。通过在样品中加入已知浓度的标准品来判断方法的准确性，该方法的回收率在95.9~103.0%之间。 04 结论本文基于赛默飞液相系统和二极管阵列检测器，开发了一种可用于检测中药独一味胶囊提取液中木犀草素含量的方法。通过DAD检测器不仅可以实现定量分析，也可以用于色谱峰的定性分析。利用DAD全波长扫描结合其它有关计算，验证了木犀草素在不同pH条件下最大吸收波长产生了红移，从而影响其在C18色谱中的保留。本文报道的方法能为极性小分子检测方法的开发提供定性和定量分析实验基础，为阐明色谱柱中的保留机理提供了理论依据，凸出了全波长扫描DAD检测器在分析物质变化过程和监测反应过程时的优势。

瑞安德沃特-约翰逊（Ryan De Vooght-Johnson）一种新的LC-MS/MS方法用于检测头发中的草甘膦及其代谢物AMPA（氨甲基膦酸），有助于监测这种除草剂的暴露情况，并与健康问题建立联系。草甘膦暴露是潜在的健康风险草甘膦是孟山都公司于1974年推出的一种广谱除草剂，是世界上使用最广泛的除草剂之一。美国有750多种产品含有这种除草剂。其专利于2000年到期，草甘膦现在由一系列制造商销售。喷洒在作物上后，除草剂会进入河流和水体，细菌将其转化为氨甲基膦酸（AMPA）。接触草甘膦被认为与某些癌症有关，包括非霍奇金淋巴瘤。据报道，草甘膦具有细胞毒性和遗传毒性作用，并引起炎症，以及影响淋巴细胞功能和微生物与免疫系统之间的相互作用。世界卫生组织国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer）报告称，草甘膦“可能对人类致癌”，尽管美国环境保护署（US Environmental Protection Agency）认为草甘膦小心使用是安全的。欧洲食品安全局（EFSA）表示，它不太可能导致人类癌症，但在2015年，EFSA规定急性参考剂量的限值为每千克体重0.5毫克，并承认这是一种有毒化学品。头发中草甘膦的快速分析研究人类草甘膦暴露对于建立与健康问题的联系很重要，但草甘膦在暴露后3天内就从体内消除，因此在尿样中检测的窗口很短。头发分析可以提供接触一系列化学物质的时间信息，这些化学物质通常用于药物检测。为了监测草甘膦暴露情况，巴黎萨克雷大学MasSpecLab的科学家开发了一种用于测定头发中的草甘膦和AMPA的LC-MS/MS方法。对短于3厘米的头发进行批量分析，但在长度足够长的情况下，则将头发分为2厘米的段进行分析。头发在DCM（二氯甲烷）中清洗，然后磨成粉。在研磨后的样品中，根据需要加入校准标准溶液或QC溶液，然后在5µL 10 mg/L内标溶液中进行超声处理。将溶液在真空下蒸发至干，将残渣重新溶解在水中，然后进行LC-MS/MS分析。使用带有Luna HILIC色谱柱和TSQ Altis三重四极杆MS的Dionex Ultimate 3000进行分析。梯度模式以0.5 mL/min的流速进行，5mM甲酸盐缓冲液作为流动相A，乙腈作为流动相B。梯度从90% B开始，持续2 min，在0.5 min内下降至20%，然后保持1.5 min。在负模式下使用ESI进行检测，离子喷射电位为-3.5 kV，毛细管温度为350°C，氮气作为屏蔽气体，氩作为碰撞诱导离解气体。MRM（Multiple Reaction Monitoring，质谱多反应监测）用于监测下列转换：168.2→63.2和168.2→79.2适用于草甘膦，110.0→79.2和110.0→63.2适用于AMPA。按照2011年EMA（European Medicines Agency，欧洲药品管理局）指南进行验证。选择性、交叉污染、线性、LOD/LOQ、准确度、精密度、基质效应和稳定性都被认为是可以接受的。对于现实生活中的分析，从使用草甘膦多年的农民身上采集了头发样本，确保他们的头发足够长，足以覆盖最近使用的除草剂。为了进行比较，还从生活在城市中没有接触草甘膦的人和其中一位农民的妻子身上采集了样本，他们没有在农场工作，但住在同一个地方，吃同一种食物。其中一位农民还提供了一份尿液样本进行比较，并使用改进版的HPLC方法进行分析。四个农民中有三个头发中含有草甘膦。农民甲每年喷洒作物三到四次，头部、阴毛和尿液中的草甘膦含量都很高。农民丁与农民甲合作，接触情况相似，但草甘膦检测结果未呈阳性。作者解释说，这是因为她经常漂白头发，然后把头发染成红色，这肯定消除了任何残留物。农民甲的妻子没有在农场工作，头发中的草甘膦含量很低，与城市居民中的草甘膦含量相似。现在可以进行长期暴露监测通过可以使用本文报道的新LC-MS/MS方法测量头发中的除草剂及其代谢物AMPA来评估长期暴露于草甘膦的可能性。只有四位农民参与了这项研究，因此作者计划研究更多的主题，并进一步优化方法。这种方法对于监测这种除草剂的暴露情况和评估其毒性很有用。相关链接Alvarez JC，Etting I，Larabi IA。通过 LC/MS-MS 方法定量人发中的草甘膦和氨基甲基膦酸。生物医学铬。2022. https://doi.org/10.1002/bmc.5391除草剂草甘膦是一种“重要的”癌症因素。英国广播公司新闻。2019 年 3 月 20 日（https://www.bbc.co.uk/news/business-47633086；2020年 5 月 12 日访问）。草甘膦会损害昆虫的免疫系统。威利分析科学。2021 年 5 月 28 日（https://analyticalscience.wiley.com/do/10.1002/was.00080263；2020年 5 月12 日访问）。关于作者瑞安德沃特-约翰逊Ryan 是一名自由科学作家和编辑。在获得仪器和分析方法硕士学位后，他在制药行业担任过各种分析开发职务，之后担任编辑职务。作为委托编辑，他创办了两本与分析化学和药物相关的期刊，Bioanalysis 和 Therapeutic Delivery，并管理了许多其他期刊。他现在是一名自由科学作家和编辑，让他有更多的时间陪伴家人、骑自行车和分配土地。符 斌，北京中实国金国际实验室能力验证研究有限公司 供稿