核酸纯化

由Percepta 公司发布的最新一季行业分析报告显示，中国核酸纯化(nucleic acid purification，NAP)市场明年内预计将增长8%，对于这个具有广阔前景却没有行业龙头的新兴市场，各大公司都在虎视眈眈的企图分一杯羹。 　　&ldquo 中国的核酸纯化市场年轻而又富有生机，在这个新的市场领域缺乏相应的供应商以及相关领域专家。&rdquo Percepta 公司生命科学市场研究事务所主任Anne St Louis作为业内人士解释道。 　　Percepta 公司近日以中国449名科研专家为调查对象做了一份调查报告，449名学者中将近20%从事相关产业。受访者表示Qiagen公司、Tiangen公司以及life technologies公司在当前细分的15个市场中是三大龙头供应商。罗氏、康宁、BioTeke、lllumina、Promega以及Clontech六家公司平分了中国核酸纯化的二线市场。 　　根据Percepta 公司的这项调查显示，核酸纯化市场近四成以上被质粒DNA的小量制备、凝胶提取DNA、细胞和组织的隔离及反应后清理占据。 　　与北美和欧洲市场不同，中国的核酸纯化市场没有明确的领导者。在西方市场，Qiagen公司占据着不容置疑的垄断性地位，通过调查北美和欧洲各个阶层核酸纯化市场，Qiagen最终以超过37个平均百分点的成绩击败了与其最接近的竞争对手。Qiagen公司以雄厚的资金和实力稳坐欧美核酸纯化市场的江山。 　　只有拥有强大实力和背景、在世界名列前茅的生物公司才有可能占据中国核酸纯化市场的半壁江山。在中国，某些核酸纯化部门甚至以超过整体市场预估率的速度直线增长。例如，为下一代测序准备的DNA/RNA文库构建正以超过20%的速率迅猛增长。 　　&ldquo 在北美及欧盟市场，由于Qiagen公司的垄断地位，几乎没有几家小型的核酸纯化企业在运行，但在中国仍有一些本土企业参与核酸纯化的市场运作。&rdquo Percepta 公司说。 　　此外，除了中国Percepta 公司还将对印度、韩国的核酸纯化市场及产值做调研。无论怎样，对于中国的核酸纯化市场，Percepta 公司已经为我们描述出一幅诱人的蓝景。

自20世纪诞生以来，分子生物学迅速发展并在整个生命科学领域广泛渗透和应用，推动了传统医学进入基于分子层面实验科学的现代生物医学时代。核酸提取和纯化是分子生物学试验的基础，在以下应用实验中都需要进行核酸提取： ● 分析基础研究和疾病研究中的基因表达；● 跟踪对药物治疗的反应(例如，在抗病毒治疗期间和之后监测病毒滴度）；● 识别新物种并深入了解进化过程 (例如，Ancient DNA分析）；● 对人类、动物和植物中引起传染病暴发的病原体进行监测和分类；● 通过微生物检测和量化监测食品和水安全；● 诊断疾病 (如基因疾病，癌症，免疫学缺陷）。核酸提取纯化基本步骤 核酸纯化方法是影响提取核酸质量高低的最重要因素之一，也是下游分子生物学试验成败的关键，遵循提取纯化原则以及选择合适的纯化、浓缩方法，可以使核酸的质量及回收率达到最大化。 核酸提取纯化原则和要求 ● 需要保证核酸一级结构的完整性，为下游实验做准备；● 排除其它核酸分子的污染（提取DNA时排除RNA的干扰，反之亦然）；● 核酸样品中没有对酶有抑制作用的有机溶剂和高浓度的金属离子；● 将核酸样品中其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染降到最低程度。 核酸提取纯化的常见方法溶液抽提法经典的DNA提取方法：酚氯仿抽法，主要是使用两种不同的有机溶剂交替抽提将蛋白去除。通过苯酚氯仿处理细胞破碎液或者组织匀浆后，在水相中主要溶解的是以DNA为主的核酸成分，在有机相中主要是多糖和脂类物质，蛋白质则沉淀于两相之间。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含核酸的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀核酸，之后再离心分离和溶解洗脱，最后通过将洗涤后的核酸沉淀进行浓缩干燥即可得到高纯度核酸。 离心柱法（柱膜法）通过特殊硅基质吸附材料，能够特定吸附DNA，而RNA和蛋白质顺利通过。硅胶膜表面的硅醇基团呈弱酸性，其水化后带负电。当溶液中存在一定浓度的阳离子后，形成的阳离子桥能够中和DNA和硅醇基团之间的表面负电荷，从而使DNA牢固地吸附在硅胶膜表面。反之，处于低盐水溶液状态下时，由于硅胶膜的硅醇基团与DNA磷酸基团之间的静电排斥，硅胶膜释放DNA。 利用高盐低PH结合核酸，低盐高PH值洗脱，来分离纯化核酸。离心柱纯化也是试剂盒提取中广泛的使用方法。磁珠法运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。磁珠法利用了磁性颗粒活性基团在一定条件下可与核酸结合和解离的原理，先使用细胞裂解液裂解细胞，带有活性基团的磁性颗粒可特异性吸附从细胞中游离出来的核酸分子，而样品中的其他干扰物则很好的移除了，在磁场作用下，磁性颗粒与液体分开完成，最后回收颗粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脱液洗脱，纯化浓缩后即可得到纯净的DNA，获得质量较高的核酸模板。 提取纯化方法的选择一般地，分离纯化步骤越多，核酸的纯度也越高，但得率会逐渐下降，完整性也愈难以保证。相反，通过分离纯化步骤少的实验方案，我们可以得到比较多的完整性较好的核酸分子，但纯度不一定很高。这需要结合核酸的用途而加以选择。如果对核酸提取的质量要求不高，可以选择经济实惠的溶液法，选择柱膜法还是磁珠法自动化提取，基本上取决于样本数量，针对大批量的样本，优选磁珠法自动化提取。如果对样本数量较少，则可以选择柱膜法，既快速又经济实用。对于Oligo寡核苷酸的纯化，实验要求更高。（可参考往期推文） 不管采用哪一种核酸提取纯化方法最后都离不开浓缩干燥！ ● 再浓缩核酸样品，随着核酸提取试剂的逐步加入，以及去除污染物过程中核酸分子不可避免的丢失，样品中核酸的浓度会逐渐下降，甚至影响到后面的实验操作或不能满足后继研究与应用的需要时，需要对核酸进行浓缩，可将150uL DNA水溶液浓缩至10uL再进行测序；● 去除DNA样品中醇的残留，当DNA样品中有乙醇的残留会影响测序反应；● 干燥DNA样品。DNA沉淀后可能会含水或水/乙醇混合液，浓缩去除后可以得到干燥的DNA样品。常用的干燥方法：风干VS真空离心浓缩仪应用案例分享WTCHG（牛津大学人类遗传学威康信托中心) 使用Sequenom MassARRAY® SNP 基因分型系统用于SNP分析，样品前制备过程分别使用风干（左）和Genevac EZ-2真空离心浓缩仪（右）干燥含有寡核苷酸样品的384孔板。下图结果表明，使用EZ-2真空离心浓缩仪干燥寡核苷酸样品，可以大大降低样品降解率，保证样品不会被污染，消除了样品损坏的潜在来源。深绿色-高样本数据质量浅绿色-中等样本数据质量红色-样品质量差或无数据使用真空离心浓缩仪，可以避免核酸浓缩干燥遇到的过度加热、绝对干燥、交叉污染及紫外损害保证核酸样品的完整性。Genevac真空离心浓缩仪浓缩干燥DNA样本，Genevac真空离心浓缩仪是合适的选择，Genevac系统广泛应用于DNA样品制备与纯化处理，不论是处理PCR前的简单的小体积浓度DNA pellets，还是高通量处理许多纯化DNA或寡核苷酸的样品，都有不同的机型可供选择。如果你对上述产品或方案感兴趣，欢迎随时联系德祥科技，可拨打热线400-006-9696。 Genevac英国Genevac是德祥集团资深合作伙伴之一。英国Genevac公司成立于1990年，隶属SP Scientific旗下，一直专注于研究和生产各种离心蒸发浓缩设备，其产品广泛应用于生命科学、制药、化学、分析等领域。德祥科技德祥科技有限公司成立于1992年，总部位于中国香港特别行政区，分别在越南、广州、上海、北京设立分公司。主要服务于大中华区和亚太地区——在亚太地区有27个办事处和销售网点，5个维修中心和2个样机实验室。30多年来，德祥一直深耕于科学仪器行业，主营产品有实验室分析仪器、工业检测仪器及过程控制设备，致力于为新老客户提供更完善的解决方案。公司业务包含仪器代理，维修售后，实验室咨询与规划，CRO冻干工艺开发服务以及自主产品研发、生产、销售、售后。与高校、科研院所、政府机构、检验机构及知名企业保持密切合作，服务客户覆盖制药、医疗、商业实验室、工业、环保、石化、食品饮料和电子等各个行业及领域。2009至2021年间，德祥先后荣获了“最具影响力经销商”、“年度最佳代理商“、”年度最高销售奖“等殊荣。我们始终秉承诚信经营的理念，致力于成为优秀的科学仪器供应商，为此我们从未停止前进的脚步。我们始终相信，每一天都在使这个世界变得更美好！

核酸纯化新技术研讨会 Solutions on NA extraction by AJ to state-of-the-art researchers 下面这些核酸纯化问题，您也碰到过吗？ 由于高盐或乙醇残留，导致DNA样品不够纯，抑制后续的酶切、PCR反应和测序等 整个提取过程步骤太多，过程太长，导致核酸有降解 复杂样品、痕量样品、细胞外循环DNA等核酸很难获得 样品量大，核酸提取工作占用太多的时间，而且每次的提取效果不一致 您想改善这些情况吗？ 德国耶拿的DC双缓冲液新技术和PMI聚合物介导分离新技术 及革命性的全自动平台可以帮您找到解决办法！ 3min完成PCR产物纯化，6min完成质粒抽提，1h完成小鼠尾巴核酸纯化 轻松获得高质量的细胞外循环DNA（circulating cell-free DNA）、石蜡包埋组织的高纯度DNA，在毛发、烟蒂、指纹等痕量检材上能获得足够量的DNA用于检测 快速的DNA甲基化修饰试剂盒 ，3h完成转换，高效的转换效率为下游的分析提供可靠和可重复的保障 采用自动化的核酸纯化系统，可明显节省在核酸提取方面的时间，更重要的是标准化的过程，能确保每批样品提取结果的稳定性 第一场： 时间：2013年11月26日下午14:00-16:30 地点：北京-中国科学院动物研究所B105室 （朝阳区北辰西路1号院5号） 第二场： 时间：2013年11月27日下午14:00-16:30 地点：北京-中国农业大学西校区图书馆报告厅 所有参会者，可获赠精美礼品，以及德国耶拿核酸纯化试剂&ldquo 买一送一&rdquo 优惠券（试剂盒介绍详见下面） 报名联系方式： 电话：010-65543849 短信：13764007224 Email：info@analytik-jena.com.cn 此外，活动现场还有精彩的抽奖活动，众多奖品等您来拿！ (提前报名且实际到场的人员可参加抽奖，电话和邮件均可报名) 自动核酸纯化系统InnuPure C16/C96 高效的全自动核酸纯化，16个或96个样品同时处理 核酸产物洁净，无磁珠残留 专业的设计确保产物无污染 优化好的程序和试剂直接调用，实现标准化操作 满足各种样品类型的核酸纯化 德国耶拿核酸抽提纯化试剂盒 基因组DNA 抽提试剂盒 RNA抽提试剂盒 innuPREP DNA Micro Kit（5mg样品） innuPREP RNA Mini Kit（总RNA） innuPREP DNA Mini Kit（50mg样品） innuPREP RNA MIDI Direct Kit（总RNA） innuPREP Forensic Kit（痕量法医样品） innuPREP Micro RNA Kit（小RNA） innuPREP Blood DNA Mini Kit（300µ l全血） innuPREP Blood RNA Kit（1ml全血） innuPREP Blood DNA Midi Kit（2ml全血） innuPREP Blood RNA MIDI Direct Kit（10ml全血） innuPREP Blood DNA MIDI Direct Kit（1ml全血） innuPREP Plant RNA Kit（100mg植物样品） innuPREP Blood DNA Master Kit（5ml全血） innuPREP Virus RNA Kit（150µ l或20mg） innuPREP Plant DNA Kit（100mg植物样品） 总核酸抽提试剂盒 innuPREP Swab DNA Kit（拭子样品） innuPREP DNA/RNA Mini Kit innuPREP Bacteria DNA Kit（109细菌） innuPREP Virus DNA/RNA Kit innuPREP Mycobacteria DNA Kit（唾液、痰液等） innuPREP MP Basic Kit A（细菌和病毒）innuPREP Stool DNA Kit（400µ g粪便） 胞外循环DNA抽提试剂盒 innuPREP Virus DNA Kit（200µ l或20mg） PME circulating cell-free DNA kit blackPREP试剂盒&mdash &mdash 专门针对复杂的初始样品 blackPREP Tick DNA Kit 蜱虫 blackPREP Tick DNA/RNA Kit 蜱虫 blackPREP Powder DNA/RNA Kit 奶粉、茶、土壤等 blackPREP Rodent Tail DNA Kit 小鼠尾巴 blackPREP FFPE DNA Kit 石蜡包埋组织 blackPREP Food DNA Kit I 食品 blackPREP Swab DNA Kit 擦拭子 质粒提取试剂盒 innuPREP Plasmid Mini Kit 5ml菌液约得20µ g质粒DNA innuPREP Plasmid Mini Kit Plus 15ml菌液约得70µ g质粒DNA innuPREP Plasmid MIDI Direct Kit 25ml菌液约得80ug质粒DNA innuPREP Plasmid Rapid Kit 快速，可在6min完成 innuPREP Plasmid Small Kit 250µ l菌液约得3µ g质粒 PCR或凝胶产物纯化试剂盒 innuPREP PCRpure Kit PCR产物纯化 innuPREP Gel Extraction Kit 凝胶电泳产物回收 innuPREP DOUBLEpure Kit PCR产物或凝胶产物纯化 innuPREP DYEpure Kit 测序反应中去除荧光标记的ddNTPs 甲甲基化修饰试剂盒 innuCONVERT Bisulfite Conversion Kit 主办方： 德国耶拿分析仪器股份公司 北京元业伯乐科技发展有限公司 北京竹远科创科技有限公司