低温溶出仪

生物安全涉及人体健康、国防安全等多个方面，许多发达国家将生物安全战略纳入国家安全战略，我国也于今年4月15日开始实施《生物安全法》。生物安全是多学科交叉的综合性领域，生物安全解决方案是保障各项生物技术研究、开发和应用全流程有效实施的基础方案。随着生物制药、CXO、医学检验、体外诊断等各项生物技术创新速度加快和产业化应用场景扩容，生物安全解决方案的用户需求将持续快速增加。此外，国家也正从经费投入、基础设施建设、人才培养等方面入手，来保障生物安全能力建设。受益于下游应用场景的扩容、政策法规的持续利好以及技术的持续迭代进步，生物安全解决方案市场空间预计将进一步扩大。从我国生物安全解决方案市场的发展现状来看，与国外发达国家还有一定差距，预计增速将高于全球平均水平。低温储存在生物安全解决方案中是非常重要的一环，低温储存设备属于医疗设器械，根据相关调研，2018年全球生物医疗低温储存设备市场规模为27.47亿美元，到2025年预计将达到36.47亿美元，年复合增长率为3.2%；中国2018年低温储存市场为1.45亿美元，年复合增长率超过4%。目前，全球生物医疗低温储存市场，强势品牌包括赛默飞、松下健康、普和希，国产厂商表现相对较弱。排名前五的企业占整个全球生物医疗低温储存市场份额的72.9%。注：2017年数据我国低温制冷设备行业尚处于起步阶段，市场潜力巨大，吸引了众多企业进入本行业。国内从事生物医疗低温储存业务的主流企业有海尔生物、中科美菱、澳柯玛、中科都菱等。据悉，海信、新飞、容声等企业也在积极布局。海尔生物是国内生物医疗低温储存的龙头企业，2020年海尔生物营收14.2亿元，主营产品中，超低温、低温保存箱营收4.55亿，此外恒温冷藏箱营收5.56亿。近年来，海尔生物在巩固增强国内占有率优势的同时，也在不断拓展和完善海外销售，有数据显示，2018年海尔生物在排到了前四位，在全球市场占比约10.7%，在中国市场占有主导地位。中科美菱低温科技股份有限公司是长虹美菱股份有限公司与中国科学院理化技术研究所合资成立的公司，2016年新三板挂牌，2020年营业收入为3.73亿元，增长率为67.95%，净利润4604万，其中医用冷藏设备系列产品销售总金额本期较上期增长 1681.99%，主要是随智慧冷链业务能力构建提升。澳柯玛生物医疗业务主要经营单位为控股子公司青岛澳柯玛超低温冷冻设备有限公司，主要从事超低温设备、生物医疗设备以及冷库的开发、生产、销售及服务。澳柯玛布局低温储存管线时间相对较晚，但近两年的增长速度却十分迅猛，2020年，该公司的营业收入为1.93亿元。生物医药、精准医疗产业的快速发展为低温储存设备市场的发展带来持续动力，而新冠疫情的爆发给生物医疗低温储存全球市场带来了更大的增量扩容，未来几年低温储存设备市场的复合增长率可能高于预期。

高低温试验箱是一款环境试验箱中的成熟产品，任何只要是环境试验设备制造上都能生产出一台符合基本要的设备。就像手机，只要是手机都具有打电话发短信等基本功能，为何价格天差地别。我想这也与外观、多功能、稳定性、品牌等原因相关吧。那么，本章小编就从这几方面谈谈高低温试验箱吧。 高低温试验箱外观：美的事物总是较容易得到人的青睐的，外观是否美观决定了设备的结构，一个注重细节的厂家是会从各个角度考虑用户的感受的。 高低温试验箱多功能：此设备属于温度设备，是否操作简单方便，是否有附加功能也是很重要的。 高低温试验箱稳定性：稳定性绝对是设备的至关重要的因素，稳定性包含了厂家的技术能力、板材、零配件选用及设备细节的处理，一台性能稳定的设备从核心原件到小配件都是经过重重考验的。 高低温试验箱品牌：在这个品牌繁多，选择众多的社会。品牌的号召力是巨大的。因为品牌不仅仅只是满足使用者的“虚荣”，它还代表了厂家的口碑、服务及性能。若服务与产品本身都没有做好的话是不可能有好口碑的，更不谈品牌。 由上可知，一台高质量的高低温试验箱也要从实用与品牌，全方位考虑各个因素，选择时也要多多对比，切不可贪一时之快造成损失。

大家好，本周为大家分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章，Zero-Degree Celsius Capillary Electrophoresis Electrospray Ionization for Hydrogen Exchange Mass Spectrometry1，文章的通讯作者为乌普萨拉大学的Erik T. Jansson博士。　　氢氘交换质谱(HDX-MS)适用于研究蛋白质在溶液中的动力学和相互作用，其能够快速分析非变性蛋白中位于蛋白表面的氨基酸序列，广泛应用于蛋白动态表位、活性位点的表征。HDX-MS平台通过低温UPLC分离提供自动化、在线的样品处理和分析。目前，HDX-MS装置的工作流程主要基于Peltier冷却的超高效液相色谱(UPLC)模块的LC-MS方法，但该系统价格昂贵，成本较高，并且在低温条件下，流动相粘度增加导致高背压(可达-20,000 psi)，降低了LC的分离效率。而毛细管电泳(CE)在HDX领域有着更好的应用潜力。CE是一种成熟的分离多种类型分子的方法，在蛋白质组学研究中具有独特的价值。CE基于分析物在电场中的不同迁移率进行分离，分离速度取决于分析物的尺寸和电荷。20世纪90年代初，CE-MS开始应用于肽段水平的蛋白质和蛋白质复合物的分析。自此，CE-MS在多肽和蛋白异质体的检测中就显示出比反相LC-MS高10~100倍的灵敏度。近年来，HDX-MS领域的研究人员也聚焦于探究CE用于HDX-MS工作中的潜在优势。本文利用熔融硅毛细管电泳在零摄氏度下完成了氘代肽段和蛋白的淬灭、酶切和分离，该平台具有较好的成本效益，易于装配于任何MS。　　CE装置的主要配件包括丙烯酸气密匣(图1A)、毛细管液相分离装置(图1C)和P-727聚醚醚酮三通组件(图1D)。丙烯酸气密匣用于接收N2，内部放有一个不锈钢小瓶装纳氘代背景电解液，能够允许高电压传导到分离毛细管。P-727聚醚醚酮三通组件联通高压电源和N2源，提供分离电压和N2，在毛细管出口产生离子。　　图1.Peltier冷却CE外壳+进样槽的结构。(A) 丙烯酸气密匣。(B) Peltier冷却单元所粘附的铝壳体的截面。(C) 毛细管液相分离装置。(D) 同轴三通阀nano电喷雾针。　　完成该毛细管平台(图1)的加工和组装后，作者评估了其性能，并将其与先前在微芯片电泳装置上发表的报道进行了比较。首先是峰值容量的评估。使用血管紧张素II(ATII)和甲硫啡肽(ME)作为分离标记的淬灭肽标准品，在0 ℃下，以1 % FA、25% ACN (BFS毛细管)和10% HAc(LPA毛细管)组成的氘代背景电解液(BGE)计算峰容量。与BFS毛细管相比，LPA毛细管除了峰容量值增加外，其序列覆盖率也明显增加。作者比较了0 ℃ CE到0 ℃ LC和微芯片电泳的峰容量值。结果显示，CE的上峰容量虽小于微芯片电泳方法，但序列覆盖率更高。而与LC相比，CE的峰值容量大大提高。　　氘质子在淬灭时和分析时中的回交(BE)也是HDX实验重点考察的因素之一。作者使用缓激肽(BK)、ATII和ME作为肽标准品对BE进行了评估。在0 ℃、20 kV的条件下对BFS毛细管和LPA毛细管分别进行测试。结果表明，ATII在BFS和LPA毛细血管上的BE分别为20 %和34 %。ATII在LPA毛细管上的BE值与已报道的商业和实验室改装的UPLC平台的数据(28~36 %)相似，而在BFS毛细管上则接近直接进样完全氘代标准品达到的BE水平。此外，由于注入到毛细管中的样品量与LC所使用的样品量相比很低，在检测的质谱中没有出现任何残留的迹象。　　作者对溶液中牛血红蛋白(Hb)进行了HDX，随后又进行了淬灭、胃蛋白酶酶切、低温毛细管电泳分离与质谱(MS)检测。图2显示了根据Kyte-Doolittle疏水性指数选择的6个肽段在不同分离条件下相应的电泳图谱和氘代速率。从图中可以看出，LPA毛细管上分离的肽段峰形更对称，信号强度比BFS毛细管上高一个数量级左右。与BFS毛细管相比，LPA涂层的毛细管整体的氘标记保留绝对值较低，但氘代速率没有检测到差异。虽然BFS毛细管迁移时间更快，但由于BFS毛细管在样品进样之间需要更多的冲洗步骤，因此分析时间比使用LPA毛细管要长。　　图2.强度归一化的提取离子电泳图谱，显示了BFS和LPA毛细血管之间迁移时间的差异，以及标记Hb的消化性中的6个代表性肽的HDX动力学图。橙色的迹线显示了使用BFS毛细管分离的结果，紫色的迹线显示了使用LPA涂层毛细管分离的结果。肽段序列的注释及其对应的Kyte-Doolittle疏水性指数显示在右方。(左)在500 s标记时间点显示了代表性的峰形和迁移时间。(右)BFS毛细管中的氘代保留更高。误差棒表示一个标准差，每个时间点n = 3。有些多肽在所有孵育时间内只存在于LPA涂层中，因此上述六个面板其中的两个面板没有在BFS毛细管中的痕迹。α 136 - 141在BFS毛细管上分离的特定样品在500 s时间点显示，但在以后的时间点没有足够的质量，从最终的数据集中省略，因此HDX动力学图不包括该肽段。β 35 - 40没有被检测到，也未被包括在HDX动力学图中。　　最后，本文研究了HDX CE-MS平台在表征结构相关信息方面的作用。作者比较了非变性条件下的Hb样品与用6 M尿素置于变性条件下的Hb样品的相对氘代值。研究发现，在非变性状态下更容易受到HDX保护的位点与Hb亚基的相互作用位点相吻合。具体来说，α-Hb上的R32-Y43和L92-D127以及β- Hb上的R29-E42和D98-Q130与这两个单体相互结合的位置相吻合。数据显示(图3)，与局部区域的尿素暴露状态相比，Hb的非变性状态对HDX的敏感度降低。这一发现验证了该方法可作为结构蛋白质组学研究的潜在工具——能够表征分子结合和构象动力学，如蛋白质-配体相互作用中遇到的问题。　　图3. Hb的HDX数据在PDB 1FSX上的映射。在非变性条件下用D2O标记的Hb与用6 M尿素变性后标记的Hb进行比较。颜色刻度表示50,000 s氘掺入后，天然/尿素D吸收量的比值。　　总的来说，本研究提供了低温CE - MS应用于溶液内标记HDX的理论证明。尽管BFS毛细管提供了快速的肽段分离和标记肽段的最小氘损失，但研究结果表明LPA涂层的毛细管在HDX CE - MS中更有优势。有很多途径能够实现该平台的进一步优化，包括但不限于BGE优化(pH、有机质含量、浓度)、浓缩/脱盐步骤、固定化/嵌入式蛋白酶消化、升级Peltier元件以实现更低温的分离、集成无鞘电喷雾界面、交替毛细管涂层和评估更长或更短的毛细管。进一步研究蛋白质化学中常见的盐和溶质分离的耐受性也将是未来优化的一个重点。　　撰稿：陈凤平　　编辑：李惠琳，罗宇翔　　文章引用：Zero-Degree Celsius Capillary Electrophoresis Electrospray Ionization for Hydrogen Exchange Mass Spectrometry　　参考文献　　1. Aerts, J. T. Andren, P. E. Jansson, E. T., Zero-Degree Celsius Capillary Electrophoresis Electrospray Ionization for Hydrogen Exchange Mass Spectrometry. Anal. Chem. 2022.