色谱准备灯

液相色谱是世界各地实验室使用的流行纯化技术。如果系统设置和操作正确，它可以立即从混合物中分离出所需的化合物。学习如何使用和制备缓冲液和溶剂是能提高系统性能的重要技巧之一。准确制备和正确选择缓冲液对于在液相色谱中获得可重复的结果至关重要。 一、了解您的化合物 如果您正在寻找混合物中的特定化合物，您应该使用最能将您的分析物与其他分析物分开的缓冲液/溶剂组合。例如，了解极性和溶解度（极性或非极性）、电离、您正在寻找的紫外吸光度将有助于指导您使用特定的色谱柱和溶剂组。 二、纯度 使用较低等级且成本较低的试剂来制作缓冲液以节省一些钱是很诱人的，但从长远来看，它最终会变得更加昂贵。与含有稀少或不含杂质的 HPLC 级试剂相比，纯度较低的试剂会导致不需要的峰和嘈杂的基线。它们还会对您的系统造成严重破坏，造成阻塞，从而导致系统故障和更昂贵的维护费用。所有试剂和溶剂，包括您使用的水，都应该是高质量的 HPLC 级，以减少缓冲液中不需要的微粒。高级试剂的成本可能比低级试剂略高，但纯度的差异是值得的。HPLC 级试剂还有助于获得更一致的结果并保持系统平稳运行。 即使是使用高纯度实验级别的溶剂，也需要在进入色谱系统前进行过滤，采用恒谱生溶剂过滤器可以有效过滤化学污染等杂质进入系统，通用于流动相或输液泵，配套用于外径1/8英寸或1/16英寸的管子，放置于流动相溶剂瓶中，过滤杂质。过滤后，溶剂应储存在有盖的容器中，以防止被灰尘或其他不需要的材料污染。 四、避免气泡 在与您的系统一起使用之前对缓冲液进行脱气或真空过滤可以大限度地减少流动相中的空气和微粒。如果液相色谱系统中发生流动相脱气，主要会影响泵和检测器。为了解决这个问题，在将新制备的流动相泵入 HPLC 系统之前进行脱气，连同在线脱气器，应彻底脱气以去除所有溶解的气体。最有效的脱气形式是用氦气或其他低溶解度气体鼓泡。如果该方法可用，建议在整个分析过程中以非常低的水平持续对流动相进行脱气。 五、定期检查 细菌几乎可以在任何溶液中适应和生长，甚至是有机溶剂，具体取决于浓度。为防止细菌生长堵塞色谱柱筛板，每次制备新的缓冲液批次时更换缓冲液容器，检查缓冲液瓶/袋是否有细菌生长迹象。摇晃或搅拌时出现浑浊的溶液应丢弃。使用抑菌剂（例如 0.02% 叠氮化钠）处理会延长溶液的储存时间，尽管这些试剂可能会影响您的色谱图。 六、新鲜配置 恒谱生建议稀释缓冲液的有效期为一周。这种做法可确保缓冲液的 pH 值不受长期储存的影响，并且不会出现微生物生长。pH 值变化和微生物生长都会影响您的色谱运行并导致运行之间的不一致。虽然您可以添加稳定剂，例如焦亚硫酸钠，但这些试剂会影响光学和色谱结果。 液相色谱法可能是一项具有挑战性的技术。遵循上述关于如何准备和使用缓冲液进行纯化的提示，将有助于使每次运行的一致性和可重复性。

出现荧光的口蘑(上)和蟹棒菇(下)样品照片 　　针对“蘑菇漂白”事件，中国政法大学公共决策研究中心主任何兵教授20日透露，他和学生已自己动手检测了蘑菇中的荧光物质，参与检测的学生表示，在22组受检蘑菇中，有3组在紫外分析仪下出现明显的荧光物质斑点。何兵表示，已经让学生草拟好诉状，准备起诉北京市工商局。 　　18日，何兵发表博文《中国政法大学学生：发现市场蘑菇存在问题》，文章描述，法大学生从市场上购买蘑菇送检北京农学院、食品安全监控中心均碰壁。“我们找到了农业部颁布的关于如何检测荧光粉的国家标准……国家不检测，我们自己动手!”这项检测在17日进行，参与检测的是何兵的两名学生。检测过程持续了两小时。何兵将有荧光反应的蘑菇照片传到博客上，一张是蟹棒菇，另一张是口蘑，蟹棒菇的菌杆和口蘑表面有明显的蓝紫色荧光。 　　何兵在博客中说，检测结果给他的最大感受是：北京市两千多万市民的食品安全,根本没有保障。他表示，已经让学生草拟好诉状,准备状告北京市工商局。另外，何兵还建议，不能仅仅靠工商局自己检测，须设立制度，动员社会和广大群众参与，“政府应当在批发市场和零售市场设立检测机构，免费让消费者送检，就像工商在市场设立公平秤一样。” 　　■何兵检测试验 　　检测仪器：参加检测的法学院研一学生庆启辰说，按照农业部发布的《食用菌中荧光物质的检测》标准，他从某仪器经销公司购买了一台紫外分析仪，约1000余元。检测中他和另一名学生戴着塑料手套防止污染样品。 　　检测地点：法学院某办公室。 　　检测样本：本月8日，何兵的13名研究生在海淀、东城、西城、朝阳、丰台、昌平的17个超市和市场随机购买新鲜食用菌，包括平菇、口蘑、金针菇等七种常见品，每个菇种称取一两斤。蘑菇样品采集完全随机，来源以露天菜市场为主，规模都不大，最大的采集点是一家大超市。这些蘑菇在本月10日曾送到北京市食品安全监控中心要求检测，遭婉拒后，被冻在冰柜里封存至今。 　　庆启辰说，实验前先剔除冻坏的部分蘑菇，然后洗净。冰柜里共22袋蘑菇，每袋取一点，放在紫外分析仪下照射。 　　检测过程：按照检测标准的4个要求步骤，将蘑菇放入清洁的培养皿，置于紫外分析仪下——固定数码相机，关闭闪光灯，调焦——避光条件下，调整紫外灯，观察是否有可见蓝紫色荧光，拍照——不对原始照片做任何处理。 　　检测结果：庆启辰说，22袋蘑菇中，共有3袋蘑菇在接受照射时出现荧光，另一张照片荧光不太明显，就没有放在网上。 　　■观点 　　仅靠紫外线难定“漂白” 　　科学松鼠会、科普专栏作家瘦驼称，“蘑菇体内存在的木质素就是一种荧光物质，蘑菇本身所含的木质素，在紫外线的照射下也会产生蓝绿色的荧光。从生物学角度来看，蘑菇的培养液中含有的秸秆或木屑也属于可以被紫外线激发出荧光的物质。平时大家买蘑菇的时候，会看到有一些白色或棕色的颗粒，这些物质中都有可能激发出荧光。因此，仅用紫外线照射蘑菇，然后看它是否会发出荧光，是不足以判断蘑菇是否被工业荧光增白剂污染的。不同种类的蘑菇中含有的木质素多少不同。” 　　对于政法大学教授何兵的检测方式，瘦驼表示“没有看到实验过程”故不便评价。“虽然我不知道农业部关于食用菌中荧光检测的具体标准，但依我的经验来看，仅用紫外分析仪照射，就能用照相机拍出含有如此明显荧光的图片确实不太正常，正常情况下荧光不会那么强烈。” 　　瘦驼认为，紫外分析仪只能间接检测蘑菇中是否含有能激发荧光的物质，但无法准确判断蘑菇是否被荧光增白剂污染。“如果蘑菇受到荧光增白剂的污染，用紫外分析仪确实是可以检测出荧光的。但是，检测的蘑菇中激发荧光的物质是否确实为荧光增白剂还不好说，不同荧光物质也有可能激发出同样程度的荧光，仅从照相机拍摄的图片就能判断出激发荧光的物质也不准确。这一切都有待更精确的检测，如采用检测农药残留的气相色谱、液相色谱等方式可以精确到分子检测，那才是确定激发荧光物质的直接手段。” 　　■链接 　　荧光增白剂“保鲜”蘑菇 　　由于蘑菇富含包括木质素在内的多酚类物质，同时蘑菇内部又存在多酚氧化酶，因此这些多酚类物质很容易在多酚氧化酶的催化下被氧化，产生一种褐色的物质，让那些原本雪白的鲜蘑卖相不佳。在食品工业中对付蘑菇酶促褐变的常见方法是用亚硫酸盐或者半胱氨酸溶液浸泡，而这些方法都不能长时间让鲜蘑保持白嫩。用荧光增白剂的确可以让蘑菇保持鲜亮的时间更长，数年来，有关这两者之间发生关系的报道屡见于媒体。

前情提要近日，据报道，某市食药监局发布今年第4期全市食品安全监督抽检信息通告，检出不合格产品达50批次。多家餐饮企业生产及销售的牛羊肉被检出禁用的瘦肉精，主，角，又，是，克伦特罗和沙丁胺醇，水产品检出孔雀石绿。什么是“瘦肉精”？在中国，通常所说的“瘦肉精”是指克伦特罗(Clenbuterol)，本身是一种能够增强心脏收缩、扩张骨骼肌血管和支气管平滑肌的药物，在兽医和临床上用于治疗休克和支气管痉挛。当超过治疗剂量5~10倍使用时，对牛、羊、猪、家禽等多种动物具有提高饲料转化率和增加瘦肉率的作用。然而，“瘦肉精”的副作用对心血管和神经系统产生影响，表现为肌肉震颤、剧烈腹痛、心跳和呼吸加快，严重者甚至死亡。除克伦特罗外，这样的药物还有沙丁胺醇、西马特罗、特布他林等，都属于β-受体激动剂类，同样能起到“瘦肉”作用，却对人体健康危害过大，因而造成安全隐患。因此，中国农业部于2001年12月27日、2002年2月9日、4月9日，分别下发文件明确禁止食用动物使用β-受体激动剂类药物作为饲料添加剂（农业部176号、193号公告、1519号条例）如何让“瘦肉精”无所遁形？在经济利益的驱使下，不法商家铤而走险，“瘦肉精”一再“重出江湖”。作为食品安全检测利器的岛津三重四极杆质谱仪自然不能闲着。应对克伦特罗和沙丁胺醇检测，我们早有准备。除克伦特罗和沙丁胺醇外，还建立了25种β-受体激动剂类药物同时快速测定的检测方法。LC-MS/MS条件：流动相A: 2 mM醋酸铵水溶液流动相B: 乙腈色谱柱: Shim-packXR-ODS III （2.0 mm I.D.×75 mm L., 1.6 μm）MRM条件25种β-受体激动剂色谱图25种β-受体激动剂：特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、吡布特罗、齐帕特罗、西布特罗、非诺特罗、克伦塞罗、莱克多巴胺、羟甲基克伦特罗、克伦普罗、氯丙那林、克伦特罗、溴代克伦特罗、妥布特罗、溴布特罗、班布特罗、马布特罗、丙卡特罗、克伦异磅特罗、克伦潘特、马喷特罗、福马特罗、Clenhexerol、喷布特罗未完继续保卫舌尖上的安全，只管好“瘦肉精”是不够的。岛津针对食品安全检测中常见的兽药种类，重磅推出《LC-MS/MS兽药残留数据库》。其中包含247种适合LC-MS/MS检测的兽药的MRM参数信息，支持兽药残留多组分同时分析方法的建立，使得方法建立的过程变得简便。