中英细胞死亡干细胞与癌症国际研讨会

NovoCyte Penteon是一台灵敏的流式细胞仪，具有5激光和多达30个荧光通道。它具有出色的灵敏度、分辨率、速度和灵活性。它还具有7.2 log的宽动态范围以及全自动补偿功能，让用户能够在同一实验中检测暗淡信号和明亮信号。在上一代智能化流式细胞仪基础上，提供了更强大的处理能力，以适应更高端的使用需求。搭载自动上样系统NovoSampler Q，兼容40管流式管架、 24/48/96/384孔板等多种上样方式，还可以整合到不同的实验室自动平台。简便及友好的NovoExpress 软件，在数据获取、分析及报告方面带来更可期待的用户体验。仅限研究使用。不可用于诊断目的。- 5激光30荧光通道- 超凡灵敏度和分辨率- 软件功能强大，支持数据边获取边分析- 智能化设计，操作无需人工值守，简化工作流程- 高通量检测自动完成- 10^7.2宽动态范围检测，无需电压调节- 高速收集，最高可达100,000次/秒- 准确的体积法绝对计数功能，无需计数微- 优异的散射光分辨率，可检测小至100nm的颗粒具有流体反馈控制机制始终保持非常稳定的流速。在各种样品流速下具有出色的稳定性，可在不同的操作条件下提供一致的结果。新版NovoExpress，继续保留传统的优秀功能之外，提供了更多高级分析方法：- 细胞周期分析模块：除了之前的Watson Pragmati算法之外， 又新增了Dean Jet Fox（DJF）分析模型。为G1，S和G2 / M的定量拟合、以及其他参数（如CV's和G2 / G1 比率）的量化提供了更多选择， 尤其适合药物处理后的不规则周期分析。- 细胞增殖分析模型：自动分析细胞增殖，快速识别细胞分裂代数，并计算增殖指数，便于定量。- 热图数据显示：用户定义参数的颜色，方便快速查看并同时比较多个样品。 应用领域：- 癌症/免疫学- 药物及疗法开发- 病毒感染研究- 疫苗开发- 细胞生物学- 干细胞- 微生物学/水生生物学- 植物学性能指标：激光器数量5激光器配置UV/紫色/蓝色/黄色/红色荧光通道30工作原理：无与伦比的光电检测器硅光电倍增管 (SiPM) 是基于硅基底的固态半导体器件，具备光子能级灵敏度，动态范围为 7.2 个数量级，是一款具有光子计数功能的紧凑检测器。NovoCyte Penteon 设计中的创新光学器件包含 30 个独立的 SiPM，可收集并处理来自每个荧光通道的信号。出色的散射光分辨率，可检测小颗粒NovoCyte Penteon 散射光检测光学系统和信号处理电子器件经过优化，可以分辨粒径小至 0.1 µ m 的颗粒。凭借这种优异的分辨率，可轻松识别和分析血小板、细菌和各种亚微米颗粒。高重现性和稳定性NovoCyte Penteon 和 NovoCyte Quanteon 的液路系统专为提供高性能而设计。NovoCyte Penteon 和 NovoCyte Quanteon 拥有其他流式细胞仪无法比拟的液路一致性和稳定性。使用蠕动泵的其他仪器通常会受到液路脉动的影响，导致绝对细胞计数不一致和不准确。应用：凋亡分析细胞凋亡也称为细胞程序性死亡，是细胞调控自身死亡的过程，通过激活特定通路使细胞发生收缩、凝聚，并最终通过吞噬作用被清除。这与坏死细胞死亡形成鲜明对比，坏死细胞死亡时细胞失控死亡并裂解，可产生免疫反应异常激活等有害影响。因此，凋亡细胞以非常有序的方式死亡，可限制其对周围细胞和组织的破坏。多种方法可用于测定细胞死亡并区分其为凋亡还是坏死。NovoCyte 流式细胞仪具有自动补偿设置和宽荧光检测动态范围，可轻松对检测进行定量，无需调整 PMT 电压免疫表型分析免疫状态与疾病状态、治疗效率以及对疫苗等外部刺激的反应有关。免疫表型分析可快速识别候选细胞类型、亚类和功能。由于免疫细胞可能影响疫苗的免疫原性及其效能，因此监测多种免疫细胞群的频率以及特定细胞亚群（如单核细胞、NK 细胞、T 细胞和 B 细胞）的分化或活化状态至关重要。NovoCyte 流式细胞仪可同时定量分析多种白细胞，以便更好地了解患者的免疫状态并监测机体对传染病的免疫反应。细胞增殖细胞增殖是一种重要功能，是高度结构化的事件，如果不受控制，会导致疾病。我们可以通过绝对细胞计数或使用染料（例如 CFSE）测量增殖。当 CFSE 标记的细胞发生分裂时，染料在子细胞之间平均分配，随着染料的不断稀释，我们可以测量 CFSE 荧光随时间的损失。此外，还绘制染料的平均荧光强度 (MFI) 与细胞浓度随时间的变化曲线，以揭示两者之间的反比关系。这类分析方法通常用于观察 T 淋巴细胞活化的变化。图：使用 CFSE 测量 Jurkat T 细胞增殖。A) 使用 CFSE 标记 Jurkat T 细胞，并通过 NovoCyte 流式细胞仪分析细胞随时间的变化，以测定细胞分裂。每个峰值都对应于一个单独的时间点。B) 使用随细胞分裂产生的信号稀释，绘制绝对细胞计数与 CFSE 的平均荧光强度 (MFI) 随时间的变化曲线。细胞因子检测细胞因子是免疫细胞对病原体、自身免疫或治疗药物的激活反应所必需的小分子。细胞因子的信号传导可以调节基因调控、先天免疫反应和适应性免疫反应以及炎症。因此，测量细胞因子产生并确定细胞因子产生的来源对于深入了解免疫反应非常重要。基于微球的流式细胞术检测是测量细胞因子的高效方法，可以使用具有不同荧光强度的混合微球来测量单个样品中的多种可溶性分析物。细胞内蛋白质检测对细胞内蛋白质的检测和分析有助于细胞亚群和细胞过程的额外表征。为分析非细胞表面蛋白质，需要进行细胞固定和破膜。然而，许多磷酸特异性抗体与许多基于去垢剂的常用破膜方法（用于细胞内染色）不兼容。在确定磷酸特异性抗体的适宜固定和破膜方法时，需要特别注意。最常见的方法是用 1.5% 多聚甲醛固定，然后用 100% 甲醇破膜。虽然这种方法适用于多种抗体，但请注意，并非每种磷酸特异性抗体都适用。此外，在异质性样品中鉴定不同的细胞群，需要对表面蛋白连接的磷酸化蛋白进行染色。必须特别考虑这些表位对固定剂的敏感性，并采取相应预防措施，避免损害表位。因此，样品在固定前可能需要对特定的表面标记物进行染色细胞周期分析正常的人体细胞是含有恒定数量 DNA 的二倍体。在细胞分裂的过程中，DNA 合成导致总 DNA 含量翻倍，随后在有丝分裂后恢复正常的 DNA 含量。利用 NovoCyte 流式细胞仪，可以进行详细的细胞周期分析，了解肿瘤细胞分化、细胞转化以及细胞与化合物之间的相互作用。图：在 10 µ g/M MG132 或 500 µ g/M 5-FU 处理 16 小时后，使用 ACEA NovoCyte 流式细胞仪分析 A549 细胞的细胞周期分布。NovoExpress 内置的细胞周期分析模块中的图像显示了处于 G0/G1 期（绿色）、S 期（黄色）和 G2/M 期（蓝色）的细胞。与正常未处理的细胞相比，MG132 处理的细胞停滞在 G2/M 期，而 5-FU 处理的细胞停滞在 G0/G1 期。

InvitrogenTM AttuneTM NxT，快速且不堵的流式细胞仪！突破传统流式50年技术瓶颈，创新的声波聚焦技术助力流式新发现！Invitrogen Attune NxT流式细胞仪是一款全新的台式流式细胞分析仪，采用创新的声波聚焦技术，在保证高精确度的同时可以10倍极速上样；仪器配置灵活，最高可达4激光14色，可满足各种实验方案和实验室预算要求。Attune NxT流式细胞仪具有以下优势：专利声波聚焦技术，实现极速精准上样；专业防堵塞，大细胞、粘细胞轻松上；稀有细胞超灵敏高通量分析，全血样本免洗免裂解；顶级平顶光斑激光器，无需调光路；配置可达4激光16参数，模块化设计，可现场升级；可配备自动化工作站，实现24小时无人值守上样。什么是声波聚焦？Attune NxT流式细胞仪采用超声波 (超过2 MHz) 和流体动力学双重聚焦模式，将样本细胞沿液流的中心轴汇聚成一条直线。声波聚焦基本不受进样速率的影响，这使细胞能够强聚焦于激光检测点，与样本-鞘液的比率无关，所以可以在极高的样本通量下实现高精度分析。此外，Attune NxT利用注射泵进样系统进行上样，无需绝对计数微球即可实现细胞绝对计数——可最大程度地降低成本，缩短样本制备时间。相比之下，采用单纯流体动力学聚焦的流式细胞仪最高进样速度受限，而且提高流速会增大样本核心流的宽度、细胞重合率升高，使得检测信号的CV值变大。稀释样本，但不影响数据质量裂解红细胞 (RBC) 会造成待测细胞的损失和损伤。极高的样本采集速率（高达1,000 μL/分钟）使得Attune NxT流式细胞仪能够提供免洗免裂解的实验方案，最大程度地避免细胞损失，简化样本制备过程。该特性尤其适用于那些浓度较低的样本，诸如海水、脑脊液 (CSF)、干细胞及细胞数量较少的稀释样本，这些样品分析的采集时间通常较长。采用Attune NxT流式细胞仪，即便是稀释样本，亦可快速采集，且不影响数据质量。可以对诸如小鼠血液和骨髓等难以采集的样本、细针抽吸样本或低细胞产量的样本直接进行荧光标记然后稀释上样，无需洗涤或进行红细胞裂解。在高样本采集速率下可轻松实现采集——您可在四分钟内运行至多4 mL样本。这种样本制备过程不会造成样本损失，且可对所有珍贵样本进行全面检测。快速检测稀有细胞少量细胞群体的分析需要多次采集才能获得准确且值得信赖的结果，这导致其采集时间较长。Attune NxT流式细胞仪的样本运行速率比其他流式细胞仪快10倍——高达1,000 μL/分钟，每次运行能采集2 x 107个细胞，可以快速且准确地检测稀有细胞，且不影响数据质量。在各种进样速率下保证同样的精度和灵敏度Attune NxT流式细胞仪可以在您需要时提供更高的灵敏度。即便是在1,000 μL/分钟的高进样速率下，您也可以维持精确的聚焦。声波聚焦提供的精确聚焦使研究人员能够获得更小的CV值，更好地检测弱荧光信号和背景，从而减少差异，改善信号分离效果 。最大程度地减小数据差异细胞周期分析是必须精确检测多个细胞群体之间的荧光强度差异的实例之一。采用Attune NxT流式细胞仪，不论样本进样速率如何变化，都可以最大程度地减小结果的差异。即使采用高流速上样，也可以获得相同的实验结果 。符合您的规格标准的软件Attune NxT软件采用直观且易于使用的界面，能提供强大的数据采集和分析功能。您可以方便地建立、自定义并保存实验供将来研究之用。自动进行补偿，并可根据补偿指南进行设置。分析软件为数据分析效率最大化设计，其对较大的数据组的刷新速度快 (高达2,000万次/样本)，当您作出调整时，能够立即显示于数据曲线上。软件采用独特的工具简化了实验设置，包括利用滤光片配置管理器进行试剂选择。您可以从预置或定制试剂下拉菜单中选择试剂，根据仪器上的优化通道匹配适当的试剂，然后应用于曲线标志。服务与支持Attune NxT流式细胞仪可享受全球技术支持和服务项目。我们致力于提供个性化的服务，自从您向我们的销售代表购买Attune NxT仪器之日起，仪器可终生享受服务。Attune NxT流式细胞仪可享受一年的全面服务计划，包括：? 综合培训 (每台仪器2位用户)? 应用和分析支持? 全球技术服务? 预防性维护应用领域 ? 癌症 ? 免疫学? 侧群细胞分析 ? 人类间充质干细胞 ? 细胞周期分析 ? 细胞增殖 ? 免疫分型 ? 海洋样品分析 ? 微生物学? 植物研究 ? 磷酸化蛋白检测

介电泳细胞特性分析仪3DEP Dielectrophoresis Cell Analysis System 介电泳DIELECTROPHORESIS任何物质都有一定的介电特性，在外加电场之下，它们会受到不同程度的极化，而顺着外加电场的方向来排列。如果外加不均匀的电场，极化的微粒会受到介电泳动力（dielectrophoretic force）的影响，造成不同程度的漂移。简而言之，极化（polarizable）的微粒在不均匀（non-uniform）的外加电场中所发生的运动，便称为「介电泳动」。利用不均匀电场来操纵微小物体的介电泳动技术，除了可由交流频率的调控来切换其模式（正、负）之外，介电泳动也具有大量平行处理的潜质，再结合光学微影技术的运用，让单一芯片上具备许多独立操作的微孔槽，而每一微孔槽都可经由介电泳动的机制来操纵微小粒子。这即是微介电泳槽技术（DEP-Well Technology）的基础。细胞在不均匀的电场中会因频率的不同而改变被极化的状态，当细胞被极化后往高电场的方向移动时称为positive-DEP（上图）；若往低电场的方向移动则为negative-DEP（下图） 微介电泳槽技术DEP-WELL TECHNOLOGY微介电泳槽技术乃是将不均匀电场设计在3D的微小孔槽中，并可将细胞直接置于微小孔中进行介电泳动分析的一种专利技术。3DEP使用专利的微孔芯片，芯片上的20个微孔壁都由正负交错的电极所构成以形成不均匀电场；20个孔洞中之每一微孔（装载约1000个细胞）于实验时会同时给与不同的频率（10k~20M-Hz）使细胞有不同程度的极化，再由摄像机来辨别孔洞的明暗度变化，以量化样本的介电泳强度；当DEP-negative时细胞会被推挤到孔洞中间，拍照时暗度提升，当DEP-positive时细胞会被吸附到孔洞壁上，拍照时亮度提升。不同类型的细胞，拥有不同的介电特性，各孔洞的明亮度也会有所不同。 突破性新技术介电泳技术虽已发展数十年，但由于传统介电泳普遍为2D，需在单一样本内改变频率做数小时以上的观测，且由于能放置细胞数量少，导致实验变异性大，跨入门坎高。3DEP整合了微电极微孔槽芯片、光学感应侦测系统、自动信号撷取系统及自动化分析软件等，将介电泳此一技术首次商品化进入市场；不但操作门槛降低，更有高度的稳定性与再现性，让介电泳细胞分析从理论变成真实可靠的应用。 专利芯片设计抛弃式的芯片设计让实验之间不会有交叉污染的机会；样本的分析小到病毒微粒，大到心肌细胞都适用，整个实验样本不需标定也不会伤害样本。实验时20个孔洞同时给与不同频率进行侦测，只需数秒就可得到实验结果，跳脱了过往费时费工的限制；3D孔洞的设计可放入大量的样本，以明暗度的变化来量化DEP-Force，使实验的稳定性与再现性达到可商业化的标准。自动化分析软件20个孔洞中的明暗度变化直接换算为DEP-Force，中间省略繁琐的物理公式。由环境导电度与电场强度、大小等参数的固定之下，软件会自动进一步计算出细胞膜导电度（membrane conductance）、细胞膜电容度（membrane capacitance）、细胞质导电度（cytoplasm conductivity）和细胞质介电度（cytoplasm permittivity），让细胞在介电泳下的分析获得更多的信息。 介电泳分析细胞的方式，并不像一般的分子标记侦测细胞的化学性变化，而是侦测细胞的物理性变化，包括有：细胞质离子含量和组成、膜电位、膜的导电性、形态学和表面粗糙度、尺寸和形状的形式。由于各种细胞具有不同的介电特性（导电率、介电常数），当受到某种程度的非均匀交流电场时，会诱发细胞上电荷有不同程度的极化现象，细胞将因其不同的介电特性而受到正或负的介电泳力，在此力的作用下会移动到不均匀电场的特定位置，利用此特性即可鉴别不同介电特性的细胞，如肿瘤细胞与正常细胞的介电特性有显著的差异。再由于此法不会破坏细胞且适合微小化，目前已成功应用于分离水中细菌、酵母菌细胞，且能分辨出血液中之癌症细胞及红血球细胞。 干细胞分化潜质的早期鉴定若在干细胞分化之前就可判断其偏好分化的方向，将可协助未来干细胞的挑选和临床应用。此研究使用已经确认会分化为Neural-Cells的SC27与确认会分化为Astrocytes的SC23人类神经干细胞进行测试分析。分化前两细胞不论是型态与marker表现都几乎一致，无法以现行方法分辨。但介电泳实验则可证实两个样本在membrane-capacitance有显著差异，表示两样本之间细胞膜的介电特性有所差异，虽然从图像上无法分辨，但以介电泳侦测方式则可看出端倪；且不论在人类与小鼠和不同细胞代数之间都获得一致的结果。因此遵循此标准，未来将可在早期就判定此神经干细胞分化的趋向。Biophysical characteristics reveal neural stem cell differentiation potential.H. Labeed et al，PLoS One.2011.细胞早期癌化的侦测目前许多癌症由于发现时已是末期，因此治愈机率相对降低，若能提早发现并治疗将可大幅降低死亡率，可惜的是目前许多分子诊断的方式也难以早期发现正常细胞转化成癌症细胞的征状。使用human oral keratinocytes（HOK）、dysplastic oral-keratinocytes（DOK）及oral squamous cell carcinomas（H357，H157）进行细胞物理性质的分析。结果发现随着细胞恶性的程度增加，其Effective Membrane Capacitance逐渐上升，代表其细胞膜的完整性降低；同时Cytoplasmic Conductivity逐渐下降，表示其细胞质内的导电度下降。借此方式，可从病人口腔直接收集样本，进行早期的分析诊断。Cancer, pre-cancer and normal oral cells distinguished by dielectrophoresis.H.J. Mulhall et al, Anal Bioanal Chem. 2011. 细菌抗药性快速检测近来具有抗药性的细菌感染逐年增加，因此快速评价抗生素是否具有杀死细菌的效果就变得相当重要。但传统的纸锭扩散试验（Disk diffusion test）大约需要24小时，在测试结果出来之前，病人仍处在危险之中。以E. coli为例，加入40-μg/mL-polymyxin-B，在一小时及两小时后可观察到E. coli的细胞膜导电度（Gspec）与电容度（Cspec）有相当程度的上升，而细胞质导电度（σcyto）则是明显的下降；此结果表示此抗生素造成E. coli细胞膜严重的破损，进一步使得细胞质内的离子渗漏出来。此测试方式不但可在数秒之内就知道抗生素对细菌的效果，且敏感性与稳定性也相当可靠。Rapid determination of antibiotic resistance in E. coli using dielectrophoresis.K.F. Hoettges et al, Phys Med Biol. 2007. 药物毒性评价药物剂量与细胞存活率的关联性是评价药物使用浓度的重点，快速而又准确的定量药物毒性将可大幅缩短实验时间。由于药物处理后，细胞膜形态与胞内离子浓度的变化比生化标志的出现更为快速，因此可以利用介电泳技术快速评价药物对细胞的反应（图A）。使用Doxorubicin药物处理K562细胞4小时后，即可使用介电泳技术观察细胞死亡情形（白色柱状），且此结果与传统利用Trypan-blue的方法一致（灰色柱状图），不同之处在于Trypan-blue需在药物处理72小时后才有反应，若处理4小时则无法分辨差异（黑色柱状图）（图B）。此现象反映在不同的细胞株中，表示此技术可用来快速评价药物毒性。应用范畴DEP-Well-技术应用领域极为广泛，由于不同生理状态的细胞或细菌，其介电特性皆不同，因此可用来检测干细胞分化能力、细胞凋亡、分辨正常细胞与肿瘤细胞、分辨血液中之癌症细胞（Circulation Tumor Cell，CTC）与红血球细胞、检测细菌种类与抗药性等，极适合用在药物毒性测试与口腔癌检测。