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一、概述玉米赤霉烯酮又称F2毒素,是由镰刀菌、三线镰刀菌、尖孢镰刀菌、黄色镰刀菌、串珠镰刀菌、木贼镰刀菌、燕麦镰刀菌、雪腐镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物,是一种雌激素真菌毒素。主要存在于玉米和小麦中,虫害、冷湿气候、收获时机械损伤和储存不当都可以诱发产生玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯酮类毒素包括玉米赤霉烯酮,立玉米赤霉烯醇、4-酰基玉米赤霉烯酮等。玉米赤霉烯酮的化学名为6-(10-羟基喝;氧基-1-碳烯基)-β雷锁酸一内酯,分子式C18H22O5,相对分子量为318。,玉米赤霉烯酮是白色结晶化合物,溶于碱性水溶液、乙醚、苯、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯,微溶于石油醚,不溶于水、二硫化碳和四氯化碳,在紫外线照射下呈蓝绿色。玉米赤霉烯酮具有较强的生殖毒性和致癌作用,可引起动物发生雌激素中毒症。二、检测方法(一)薄层色谱测定法1.原理试样中的玉米赤霉烯酮经提取、净化、浓缩和硅胶G薄层分离后,玉米赤霉烯酮在254nm紫外线下产生蓝色荧光,根据其在薄层上显示荧光与标准比较定量。2.试剂无水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、1mol/L氢氧化钠、磷酸、丙酮、硅胶G、无水硫钠。玉米赤霉烯酮标准溶液:精密称取3mg玉米赤霉烯酮标准品,加无水乙醇溶解并转入100mL容量瓶中,加无水乙醇至刻度,此标准溶液含玉米赤霉烯酮0.03g/L。吸取此标准溶液1mL,用无水乙醇稀释至10mL,此标准溶液1mL含玉米赤霉烯酮3μg。将此标准溶液置于4℃冰箱备用。3.仪器小型粉碎机、电动振荡器、紫外线灯、玻璃板(5cm×20cm)、薄层板涂布器、微量注射器。4.分析步骤(1)提取及纯化称取20g粉碎的试样,置于250mL具塞瓶中,加6mL水和100mL乙酸乙酯,振荡lh,用折叠式快速滤纸过滤,量取25mL滤液于75mL蒸发皿中,置水浴上将溶液浓缩至干,再用25mL三氯甲烷分3次溶解残渣,并转移至100mL分液漏斗中,在原蒸发皿中加入10mL1mol/L氢氧化钠溶液,然后用滴管沿分液漏斗管壁离三氯甲烷层1~2cm处加入1mol/L氢氧化钠溶液,并轻轻转5次,防止乳化,静置分层后,将三氯甲烷层转移至第2个100rnL分液漏斗中,再慢慢加入10mL,1mol/L氢氧化钠溶液,轻轻旋转5次,弃去三氯甲烷层,将第2个分液漏斗中的氢氧化钠溶液合并人第一个分液漏斗中,用少许蒸馏水淋洗第2个分液漏斗,洗液倒入第1个分液漏斗中,加入5mL三氯甲烷,轻轻振摇,弃去三氯甲烷层,再用5H止三氯甲烷重复振摇提取一次,弃去三氯甲烷层。在氢氧化钠溶液中加入6mL 1.33mol/L磷酸溶液后,再用0.67mol/L磷酸调节pH至9.5,于分液漏斗中加入15mL三氯甲烷,振摇20~30次,将三氯甲烷层经盛有约5g无水硫酸钠的定量慢速滤纸,滤于75mL蒸发皿中,最后用少量三氯甲烷淋洗滤器,洗液合并于蒸发皿中,将蒸发皿置水浴上通风蒸干。待冷却后在冰浴上准确加入丙酮1mL,充分混合,用滴管将溶液转移至具塞小瓶中,供薄层点样用。(2)薄层色谱①薄层板的制备 称取3g硅胶G,加7~8mL蒸馏水,研磨至糊状后,立即倒人涂布器内,推成5cm×20cm薄层板三块,室温干燥后在105℃活化lh,取出放于燥器中备用。②展开剂 三氯甲烷-甲醇(95:5)15mL.或甲苯一乙酸一甲酸(6:3:1)15mL任选一种。③点样 在距薄层板下端2.5cm的基线上用10μg微量注射器滴加试样液三点:滴1点为标准液10μL,滴2点为试样提取液30μL,滴3点为试样提取液30μL加标准液10μL,滴加时可用吹风机冷风边吹边加,点1滴吹干后再继续滴加。④展开在展开槽中倒入展开剂,将薄层板浸入溶剂中,展至10cm,取出挥干。⑤观察与评定 薄层板置短波紫外线(254nm)下观察,样液点处于标准点相近位置上未出现蓝绿色荧光点,则试样中玉米赤霉烯酮的含量在方法灵敏度50g/kg以下;若出现荧光点的强度与标准点的最低检出量的荧光强度相等,而且此荧光点与加入内标的荧光点重叠,则试样中玉米赤霉烯酮的含量为50μg/kg;若出现荧光点的强度比标准点的最低检出量强,则根据其荧光强度估计减少滴加的体积(μL),或将样液稀释后再滴加不同的体积(μL),直至样液的荧光强度与最低检出量的荧光强度一致为止。
玉米赤霉烯酮(Zearalenone)又称F-2毒素,它首先从有赤霉病的玉米中分离得到。玉米赤霉烯酮其产毒菌主要是镰刀菌属(Fusarium)的菌侏,如禾谷镰刀菌(F.graminearum)和三线镰刀菌(F.tricinctum)。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物。其中玉米的阳性检出率为45%,最高含毒量可达到2909mg/kg;小麦的检出率为20%,含毒量为0.364~11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐热性较强,110℃下处理1h才被完全破坏。 玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用,能造成动物急慢性中毒,引起动物繁殖机能异常甚至死亡,可给畜牧场造成巨大经济损失。玉米赤霉烯酮是玉米赤霉菌的代谢产物。1980年李季伦教授发现植物体内也存在玉米赤霉烯酮。 这么毒的玉米赤霉烯酮怎么办?有一种方法可以快速的检测出猪的玉米赤霉烯酮,那就是快速金边检测卡,本卡检测快速、直观准确、操作简便,非常适合各级兽医站、动物门诊和养猪场的疾病监测和区域性疾病普查。
1.二氧化硫: ①抗性强的植物:大叶黄杨、雀舌黄杨、瓜子黄杨、海桐、蚊母、山茶、女贞、小叶女贞、枳橙、棕榈、凤尾兰、夹竹桃、枸骨、枇杷、构树、无花果、枸杞、白蜡、木麻黄、相思树、榕树、十大功劳、九里香、侧柏、银杏、广玉兰、北美鹅掌楸、柽柳、梧桐、重阳木、合欢、皂荚、刺槐、国槐等。 ②敏感的植物:苹果、梨、羽毛槭、郁李、悬铃木、雪松、油松、马尾松、云南松、落叶松、白桦、樱花、毛樱桃、贴梗海棠、梅花、玫瑰、月季等。 2.氯气: ①抗性强的植物:龙柏、侧柏、大叶黄杨、海桐、蚊母、山茶、女贞、夹竹桃、凤尾兰、棕榈、构树、木槿、紫藤、无花果、樱花、枸骨、臭椿、榕树、九里香、小叶女贞、丝兰、广玉兰、柽柳、合欢、皂荚、国槐、黄杨、白榆、丝棉木、正木、沙枣、苦楝、白蜡、杜仲、厚皮香、桑树、柳树、枸杞等。 ②敏感的植物:池柏、薄壳山核桃、枫杨、小锦、樟子松、紫椴、赤杨等。 3.氟化氢: ①抗性强的植物:大叶黄杨、海桐、蚊母、山茶、凤尾兰、瓜子黄杨、龙柏、构树、朴树、花石榴、石榴、桑树、香椿、丝棉木、青冈栎、侧柏、皂荚、国槐、柽柳、木麻黄、白榆、正木、沙枣、夹竹桃、棕榈、红茴香、杜仲、细叶香桂、红花油茶、厚皮香等。 ②敏感的植物:葡萄、杏、山桃、榆叶梅、紫荆、梓树、金丝桃、慈竹、池柏、白千层等。 4.乙稀: ①抗性强的植物:夹竹桃、棕榈、悬铃木、凤尾兰、女贞、榆树、枫杨、重阳木、乌桕、红叶李等。 ②敏感的植物:月季、十姐妹、大叶黄杨、苦栎、刺槐、臭椿、合欢、玉兰等。 5.氨气: ①抗性强的植物:女贞、樟树、丝棉木、腊梅、柳杉、银杏、紫荆、杉木、石楠、石榴、朴树、无花果、皂荚、木槿、紫薇、玉兰、广玉兰等。 ②敏感的植物:紫藤、小叶女贞、杨树、虎杖、悬铃木、薄壳山核桃、杜仲、珊瑚树、枫杨、芙蓉、栎树、刺槐等。