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用蒽酮比色法测胞外多糖,显色该是绿色的。可是我做的生化水样测胞外多糖显色发黄发棕是怎么回事?水样显黄色不深但是加完硫酸之后一下子变得很深的棕色。
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[align=center][font=DengXian]单糖的测定[/font]--[font=DengXian]蒽酮比色法[/font][/align][font=DengXian]蒽酮比色法[/font]1[font=DengXian].原理[/font] [font=DengXian]单糖类遇浓硫酸时,脱水生成糠醛衍生物,后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物,在[/font]620nm[font=DengXian]处有最大吸收。[/font][font=DengXian]当糖的量在[/font]20[font=DengXian]一[/font]200mg[font=DengXian]范围内时[/font],[font=DengXian]其呈色强度与溶液中糖的含量成正比,故可比色定量。[/font][font=DengXian]蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应[/font].[font=DengXian]本法多用于测定糖原的含量,也可用于测定葡萄糖的含量。[/font][font=DengXian]蒽酮试剂:取[/font]2g[font=DengXian]蒽酮溶解到[/font]80%H2SO4[font=DengXian]中,以[/font]80%H2SO4[font=DengXian]定容到[/font]1000mL[font=DengXian],当日配制使用。[/font]3[font=DengXian],[/font]5-[font=DengXian]二硝基水杨酸([/font]DNS[font=DengXian])[/font][font=DengXian]在碱性条件下还原糖与[/font]DNS[font=DengXian]试剂反应,还原糖被氧化成糖酸及其他物质,[/font]DNS[font=DengXian]被还原为棕红色的[/font]3-[font=DengXian]氨基[/font]-5-[font=DengXian]硝基水杨酸。[/font]540nm[font=DengXian]比色[/font][font=DengXian]多糖水解为单糖时每断裂一个糖苷键就需要一分子水,因此单糖换算多糖时要乘系数[/font]0.9