康奎明

日前，在第二十届全国色谱学术会议上，中科院院士、中科院大连化物所研究员张玉奎指出，中国的色谱学科队伍已经是世界上最大的，色谱学科论文的数量已有飞跃发展。在蛋白质组学研究中，蛋白质的分离和鉴定依然是目前最基本的任务和目标，“随着蛋白质组学研究的不断深入，蛋白质分离鉴定技术将得到更加广泛的关注”。张玉奎　　张玉奎指出，我国作为目前世界经济增长速度最快的国家之一，面临着资源、环境、人口与健康、社会可持续发展等诸多挑战，“但同时可以看到，色谱科学和技术，在解决这些重大问题中正发挥越来越重要的作用”。　　色谱是一个具有百年历史的分离分析学科，伴随着社会发展和科学发展的需求，在分离分析新理论、新方法、新技术、新仪器等方面不断创新，色谱队伍不断壮大，英才辈出。　　“近两年来，我国色谱学科在色谱理论研究、多维色谱仪器、新型色谱填料和色谱柱、样品前处理方法、应用领域等方面得到了突飞猛进的发展。”张玉奎进一步指出，当前，色谱的应用领域也在不断扩大，尤其是在与生命科学和环境科学密切相关的代谢组学、蛋白质组学、中药分离分析、环境分析等领域发挥越来越重要的作用。　　他还举例说明了色谱方法在蛋白质组学领域的应用。在2014年，来自约翰斯霍普金斯大学的蛋白质组研究员Akhilesh Pandey，与来自印度生物信息学研究所等机构的研究人员合作，分析了30种不同的组织类型，标绘了人类蛋白质组的绝大部分。这项研究识别出17294个蛋白编码基因，并通过表达分析证明了组织和细胞特异性蛋白的存在。同年，德国慕尼黑工业大学的Bernhard Kster等人创新性地推出了一个搜索性公共数据库，公布了18097个基因获得的蛋白，占目前预计人类蛋白总数的92%。　　“这两个研究组都利用了质谱方法来分析人类组织。”张玉奎指出，Pandey研究组分析的是全新的数据，针对多种健康人体组织的数据，其中包括7种胎儿组织和6种血细胞类型。而Kster研究组则采用了稍微有些不同的方法，他们汇集了已有质谱分析数据，同时构建了自己的质谱数据。目前，中科院大连化物所近年来也在蛋白组学研究上取得了一系列进展。　　张玉奎最后表示，在蛋白质组学研究中，蛋白质的分离和鉴定依然是目前最基本的任务和目标。随着蛋白质组学研究的不断深入，蛋白质分离鉴定技术将得到更加广泛的关注。　　“新型的高通量、高灵敏多维分离鉴定技术的发展，例如集成化蛋白分析平台，芯片多维液相色谱等，将为蛋白组研究带来新的革命。”张玉奎说。

仪器信息网特别策划话题：#3i流式大咖说#（点击查看） ，邀请高校、科研院所、临床、生物技术企业等流式技术研发、应用专家分享技术心得和经验，方便生命科学领域研究人员了解相关技术应用进展、学习仪器使用方法。本期，中科蓝华（广州）生物医药技术有限公司的谢简明老师、亢中奎老师带我们了解全光谱流式的那些事儿 。全光谱流式十问十答作者：谢简明、亢中奎 单位：中科蓝华（广州）生物医药技术有限公司 作为大陆第一台第一批全光谱流式使用人员，和大家分享一些其他用户经常问到的问题。本着互相学习交流，共同进步，先知觉后知，先觉觉后觉，如有不妥或者谬误，请各位指教。Q1. 为什么称“她”为全光谱流式？答：全光谱流式是相对传统流式而言，传统流式只检测发射光谱中特定波长的荧光，全光流式检测发射荧光的所有波长。传统是检测最高峰段荧光，全光谱流式是检测整个荧光发射谱图。Q2.全光谱流式需要补偿么？答：全光谱流式一般不需要调补偿，“她”是通过解析算法，分开各荧光。只有当解析出现瑕疵，为追求完美，才会用手动进行补偿微调。Q3.什么是全光谱流式解析？答：从Raw文件到Unmixed文件，就叫做解析。当发射荧光重叠混合在一起（MIX），把特定荧光的量区分开来就叫解析。在特定激发光条件下，荧光素有其特定荧光谱图，整体荧光可看做各荧光谱图的混合，把混合荧光的逐一分开就叫解析。好比一团不同颜色的线团，抽出特定颜色的线条。Q4.全光谱流式仪器参数与单染设置？答：全光谱流式一般不需要调电压，根据每日质控会给出一个最优电压组合；其余参数如FSC、SSC、阈值、流速、圈门、获取数等可根据需要自行设置。整体荧光的解析是根据各个荧光的特征谱图拆解而来，因此想要准确解析，单染就必须准确代表。一般单染设置和样本同等操作条件，即同试剂、同浓度、同操作、同设置、同时间。若低表达或连续表达可以选用补偿微球替代细胞作为单染，单染抗体浓度可大于样本用量。不必每次实验都做单染，但为了准确解析，需要使单染和检测样本状态尽可能一致。Q5.如何查看解析是否正确？答：可查看解析后的单染，解析准确时只有单染荧光有阳性，且单染标记横平无喇叭状；或在样本中看N×N图，是否全部横平竖直。简单panel一般不会出现问题，多色配色N×N图难免出现个别偏斜，若问题不是很严重，可忽略或手动调补偿。样本最后检测结果两两组合即所有N×N图都横平竖直是流式数据优秀的黄金标准，一句话“黑猫白猫，抓住老鼠就是好猫，横平竖直就是好的”。Q6.什么是异质性自发荧光？答：质胜文则野，“质”的本意就是朴素无修饰的意思，理论上单染中的空白对照（Unstained）应该是无荧光（这时叫做质）。实际上却往往出现荧光信号，已经不同于“空白”，所有称异质性自发荧光。自发荧光可归于NADH、叶酸、视黄醇、核黄素等生物大分子受激光激发而产生荧光。为准确解析，应该把他们去除掉或者作为单染荧光参与解析。Q7.全光谱流式如何配色？应该明白，流式虽没有完美配色，但依旧有其规则。强抗原搭配弱荧光，共表达抗原搭配荧光差异最大化（CD3、CD4共表达，CD3-FITC与CD4-BB515组合就不如CD3-FITC与CD4-APC组合。因为FITC和BB515近与APC远，且FITC与BB515为蓝光激发，APC为红光激发。荧光横竖都比较远，横代表最高峰所在检测通道，竖代表所需激发光）。有时按下葫芦起了瓢，有合适荧光素没抗体，有抗体时荧光素已经用了，需要综合考虑，做好风险平衡。Q8.全光谱流式最多测多少个荧光？以三激光38通道为例，目前官方公布实测Panel多达24色，本人测过20色Panel，理论上Panel可含更多荧光（38-2）。在实际应用中，目前主要受制于荧光素及抗体试剂的开发。Q9.最高峰在同一通道的荧光可以测么？可能可以，全光谱流式是通过荧光谱图的差异来区别开，而非简单最高峰。但如果整个荧光谱图极其相似，相似指数大于0.98，则不能区分开来。好比双胞胎太像了，亲妈都分不开。Q10.全光谱流式数据怎么处理？全光谱流式数据和传统流式，依旧是FCS形式文件，只不过有含有两个文件，一个是未解析的Raw文件，另一个是解析后的Unmixed文件，一般选择Unmixed文件分析就好。当流式文件数据量大（几十G），参数维度多（20+）时，可能需要一些技巧。流式数据看到的细胞是虚拟化的点，每个点包含不同维度的信息，一个个点构成了流式数据，因此数据可拆可合，可升维亦可降维。给出以下建议供大家参考：拆开处理：如拆开成单一细胞群体FCS文件，如：NK、CD8+、CD4+单独分析；数据剔除：把记录的碎片、死细胞（计算活率时除外）去除掉，生成新的FCS文件；删除参数：一些参数是机器自带（如时间、体积），可以删除，从而减少文件大小；降维处理：为方便查看结果，降维之后可在二维平面上查看（推荐用T-SNE）。_____________________________________参考文献：1、 Ferrer-Font, L., Pellefigues, C., Mayer, J. U., Small, S. J., Jaimes,M. C., & Price, K. M. (2020). Panel design and optimization for high-dimensional immunophenotyping assays using spectral flow cytometry. Current Protocols in Cytometry, 92, e70.doi: 10.1002/cpcy.702、 Ferrer-Font, L., Small, S. J., Lewer, B., Pilkington, K. R., Johnston, L. K., Park, L. M., Lannigan, J., Jaimes, M. C., & Price, K. M. (2021). Panel optimization for high-dimensional immunophenotyping assays using full-spectrum flow cytometry. Current Protocols, 1, e222. doi: 10.1002/cpz1.2223、 Farrand K, Holz L E, Ferrer‐Font L, et al. Using Full‐Spectrum Flow Cytometry to Phenotype Memory T and NKT Cell Subsets with Optimized Tissue‐Specific Preparation Protocols[J]. Current Protocols, 2022, 2(7): e482.【作者简介】中科蓝华（广州）生物医药技术有限公司流式专员 谢简明谢简明，中科蓝华（广州）生物医药技术有限公司流式专员。组织参与多个流式实验设计及实验操作、临床流式样本数据收集、免疫检测流式数据整理分析，擅长流式高维数据的降维分析。2020年受仪器信息网邀请，作“基于全光谱流式高维数据的降维聚类分析”报告，受到广泛好评（B站浏览量3000多人次）。自2018年公司购入大陆第一台Cytek Aurora，公司流式平台已发表多篇论文。中科蓝华（广州）生物医药技术有限公司流式仪器平台负责人 亢中奎亢中奎，中科蓝华（广州）生物医药技术有限公司流式仪器平台负责人，有多年的流式细胞术实践经验，对大型全光谱流式多色实验实验设计和实施有比较丰富的经验，对Flowjo软件对高维流式数据进行tSNE降维分析、FlowSOM、Phenograph自动分群算法有比较深入的理解，善于发现未知细胞群体。因采购调研，对各主流厂家的流式细胞分析仪均有所了解。（本文编辑：刘立东 KOL ） 相关推荐：流式大咖说|量化成像分析流式在水生生物研究中应用——中国科学院水生生物研究所高级工程师 汪艳流式大咖说|FSC与SSC在流式细胞术中的应用——西南医院马清华副研究员流式大咖说|流式检测中最易忽视的时间参数——首都医科大学中心实验室副主任技师 徐晓雪  流式大咖说|技术干货|如何去黏连？流式新手绕不开的数据处理难题  流式大咖说|流式细胞技术平台发展与使用心得分享中科院分子细胞卓越中心 俞珺璟博士 流式大咖说|流式、免疫组化、免疫荧光的抗体区别 流式大咖说|流式荧光技术检测与化学发光技术检测那些事儿【行业征稿】若您有生命科学、医药、临床等行业相关研究、技术、应用、管理经验等愿意以约稿形式共享，欢迎自荐或引荐投稿联系人：刘编辑word图文投稿邮箱：liuld @instrument.com.cn微信：JaysonXY（备注来意：投稿）

喹诺酮类(Quinolones)是一类含有4-喹诺酮母核的化学合成抗菌药，它的抗菌谱广、抗菌活性强，广泛应用于畜牧、水产等养殖业中。然而，喹诺酮类药物有潜在的致癌性和遗传毒性，同时还容易使病菌产生耐药性。因此，喹诺酮类药物残留问题越来越引起人们的关注。美国FDA已于2005年宣布禁止用于治疗家禽细菌感染的抗菌药物恩诺沙星的销售和使用。联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂专家联席委员会、欧盟都已制定了多种喹诺酮类药物在动物组织中的最高残留限量。 高效液相色谱-串联质谱联用技术是近些年来发展很快的分析技术，具有很高的选择性和灵敏度，对复杂基质中的抗生素类残留具有很强的定性能力，准确度高，是目前超痕量残留分析的首选方法。 岛津公司建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪联用测定动物源性食品中14种喹诺酮类抗生素的方法。样品经处理后，用超高效液相色谱LC-30A在7 min内实现快速分离，三重四极杆质谱仪LCMS-8040进行定量分析。使用外标法内绘制14种喹诺酮类抗生素的校准曲线，线性良好，相关系数为0.999以上；对不同浓度的标准溶液进行精密度实验，连续6次进样保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.437 %和4.937%以下，表明仪器精密度良好。 了解详情，请点击&ldquo 超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法测定牛奶中的喹诺酮类抗生素残留&rdquo 。 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所为扩大中国事业的规模，于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司。 目前，岛津企业管理（中国）有限公司在中国全境拥有13个分公司，事业规模正在不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳及成都5个分析中心；覆盖全国30个省的销售代理商网络；60多个技术服务站，构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。 岛津作为全球化的生产基地，已构筑起了不仅面向中国客户，同时也面向全世界的产品生产、供应体系，并力图构建起一个符合中国市场要求的产品生产体制。 以&ldquo 为了人类和地球的健康&rdquo 为目标，岛津人将始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务。 更多信息请关注岛津公司网站www.shimadzu.com.cn。