肉桂酰氯

植物病毒病严重危害农作物的整个生长发育周期，是农业生产中仅次于真菌的第二大类世界性植物病害。其中马铃薯Y病毒（potato virus Y，PVY）是十大植物病毒病害之一，其主要危害茄科、豆科和藜科等农作物，给农业生产带来了极为严重的损失。PVY在植物体内绝对寄生性，植物体对其又缺乏完整有效的免疫系统，使PVY在实际的生产活动中的防治变得特别困难。目前，田间用于防治PVY的商品化药剂主要有氨基寡糖素、病毒唑和宁南霉素等，但是这些商品化的药剂仍不同程度的存在防治效果不够理想和防治成本高等问题。因此，创制高效、绿色友好和作用机制独特的抗PVY活性药物分子，仍然是现代农业生产中一个亟待解决的科学问题。植物病毒的功能性外壳蛋白（Coat protein, CP）对于病毒生命周期的多个阶段至关重要，参与病毒颗粒组装、病毒基因组保护、宿主细胞间运动和媒介传播等。因此，战略性地靶向PVY CP的抗病毒策略已经备受关注。然而，尽管许多抗病毒药物是基于PVY CP而设计或者是宣称其可能靶向CP，但这些药物具体是如何作用于 CP 来抑制病毒致病性的，在很大程度仍是未知的。2024年3月13日，贵州大学绿色农药全国重点实验室宋润江教授作为通讯作者、博士生韦春乐作为第一作者在Advanced Science（影响因子IF=15.1）发表了题为“Innovative Arylimidazole-Fused Phytovirucides via Carbene-Catalyzed [3+4] Cycloaddition: Locking Viral Cell-To-Cell Movement by Out-Competing Virus Capsid-Host Interactions”的文章，该研究通过氮杂环卡宾催化合成得到的手性苯并咪唑并二氮杂卓衍生物-3j (S)具有较好抗PVY活性，进一步机制研究揭示了小分子-3j (S)与PVY CPR¹⁹¹形成的氢键影响了PVY CP与NtCPIP蛋白之间的互作，进而影响PVY在宿主细胞间的移动从而实现对病毒侵染的抑制。 研究结果1、氮杂环卡宾催化高效合成手性的苯并咪唑并二氮杂卓衍生物作者以具有广泛生物活性的苯并咪唑类衍生物1a和α-溴代肉桂醛2a作为模型反应对反应条件进行筛选，通过N-杂环卡宾（NHC）一步合成苯并咪唑并二氮杂卓衍生物3a。最终以NHC A作催化剂、碳酸钾作碱和THF作溶剂，在室温下反应12h，以优秀的收率和对映选择性得到目标化合物（图1）。在最优条件下对底物普适性进行研究，该反应在不同取代基的苯并咪唑类衍生物1a和不同取代基的α-溴代肉桂醛2a下反应都能以高收率和高对映选择性得到目标化合物（图2）。图1. 反应条件的优化图2. 底物的普适性研究2、苯并咪唑并二氮杂卓衍生物的抗PVY活性测试通过半叶枯斑法测试了所有苯并咪唑并二氮杂卓衍生物的目标化合物的抗PVY活性。测试的结果表明，部分苯并咪唑并二氮杂卓衍生物对PVY表现出了较好的抑制活性。其中，化合物-3j (S)（239、198和98 μg/mL）抗PVY的治疗、保护和钝化活性均优于对照药剂病毒唑（650、627和242 μg/mL），表现出最佳的抗PVY活性。值得注意的是，化合物-3j表现出了与手性构型相关的活性差异。其中，-3j (S)的活性优于其对映异构体-3j (R)以及外消旋体-3j (rac)。这意味着-3j (S) 可能作为一种潜在的手性药物。表1. 目标化合物抗PVY活性的EC₅₀值 (μg/mL)3、潜在靶标位点的筛选和功能验证PVY CP是一个多功能的关键靶标蛋白，与病毒的细胞间移动、长距离移动和蚜虫的传播等密切相关，常常被作为潜在的靶标蛋白进行研究。活性小分子-3j (S)与PVY CP进行的分子对接表明，PVY CPR¹⁹¹和PVY CPN¹⁵¹可能是小分子-3j (S)作用于PVY CP的潜在靶标位点。作者通过原核表达分别纯化了野生型和突变型的PVY CP，并通过微量热涌动法测试了突变前后与小分子-3j (S)结合力的差异，验证了潜在的靶标位点。通过定点突变策略构建了突变的PVY CPR¹⁹¹A-GFP和PVY CPN¹⁵¹A-GFP侵染性克隆，在活体上对潜在的靶标位点进行验证和功能分析。结果表明PVY CPN¹⁵¹位点对病毒的系统侵染几乎没有影响，而PVY CPR¹⁹¹位点病毒的系统侵染至关重要。图3. 潜在靶标位点的筛选与验证图4. 潜在的靶标位点的验证与功能分析为进一步解释PVY CPR¹⁹¹和PVY CPN¹⁵¹结合位点对PVY系统侵染的影响，作者通过激光共聚焦显微镜观察了不同处理组浸润烟草后的胞间移动现象。结果表明，突变型PVY CPN¹⁵¹A-GFP的胞间移动效率与野生型PVY-GFP相当，而将PVY CPR¹⁹¹突变后，能破坏病毒的胞间移动。进一步验证小分子-3j (S)对病毒侵染影响的实验表明，与DMSO处理组后相比，经小分子-3j (S)处理后，PVY-GFP在本氏烟中的胞间移动效率和系统侵染显著受到抑制。图5. 潜在的靶标位点的验证与功能分析4、寄主关键蛋白的筛选和功能验证植物寄主因子对植物病毒的有效侵染至关重要，参与马铃薯Y病毒属的胞间移动同时与CP相互作用的寄主因子也被逐渐揭示。其中来自烟草的DnaJ样蛋白NtCPIPs，主要参与病毒的细胞间运动，并在与CP相互作用后导致PVY在宿主植物中的有效扩散。作者通过共免疫沉淀实验验证了寄主因子NtCPIP与野生型GFP-PVY CP和突变型GFP-PVY CPR¹⁹¹A蛋白的互作差异。同时，在烟草植株上过表达NtCPIP后，促进了PVY在烟草中的侵染。总的来说，实验的数据表明PVYR191A-GFP的胞间移动受阻可能是由于PVY CPR¹⁹¹A和NtCPIP之间的相互作用中断，并且NtCPIP能有效促进病毒的胞间移动和系统侵染。图6. 潜在的靶标位点的验证与功能分析总结研究团队通过NHC催化[3+4]七元氮杂环化合物的不对称合成，实现了手性苯并咪唑并二氮杂卓类化合物的高效合成。以PVY为研究对象，通过半叶枯斑法从75个目标化合物中筛选出最佳抗PVY活性的苯并咪唑并二氮杂卓衍生物-3j (S)，化合物-3j (S)抗PVY的治疗、保护和钝化活性均优于市售的对照药剂病毒唑，表现出良好的应用前景。初步的作用机制研究揭示了手性的活性小分子-3j (S)与PVY CPR¹⁹¹形成的氢键竞争性地阻碍了PVY CP与NtCPIP蛋白之间的正常互作，进而影响PVY病毒粒子在宿主植物细胞间的移动，导致植物中病毒的积累水平下降，从而实现对病毒侵染的抑制。总之，这项工作通过不对称催化与生物活性测试相结合发现了具有良好抗PVY活性的手性小分子，并利用分子生物学技术深入揭示其分子机制，为促进交叉学科发展提供了研究基础。此工作部分结果近期发表于Advanced Science。贵州大学绿色农药全国重点实验室博士生韦春乐为论文第一作者。图7. 活性分子抑制PVY侵染可能的作用机制模式图

日前，北京市民胡先生在华联精品超市(BHG)三里屯店，购买了一盒瘦肉馅。回家做丸子汤时发现，整锅汤以及丸子都变成红色，他怀疑瘦肉馅里被添加了染色剂，使生肉看起来更鲜嫩。 　　10月22日，该超市相关负责人承认，员工违规在瘦肉馅里添加了“日落黄”，初步查明该瓶“日落黄”是10月18日被带进超市，19日开始被添加到鲜肉里。“日落黄”是我国批准使用的食品添加剂，是一种着色剂，但未被允许添加至生鲜肉中。 　　肉丸子做汤成一锅红汤 　　市民胡先生说，前日下午4时许，他在华联精品超市(BHG)三里屯店，选购了价格为39.8元/千克的瘦肉馅。一盒价格为10元左右，“瘦肉馅红红的，看起来很新鲜”。 　　胡先生回家后，用瘦肉馅做了丸子豆腐汤。“做好的汤变成了一锅红汤。”胡先生说，起初还以为酱油放多了，但吃了几口后发现，就连丸子也变成了红色，连锅里的豆腐都被染上红色。“肯定加什么东西了。”胡先生随后把部分丸子汤打包，带回超市询问。 　　顾客拒绝“假一罚十”赔偿 　　“超市经理承认说肉里加了添加剂。”胡先生说，在他要求下，超市经理出示了一瓶装有橙红色粉末的瓶子，称肉里添加的是这种粉末。该经理提出以“假一罚十”来赔偿胡先生，胡先生拒绝接受。“关键是要弄清楚，里面添加的是什么，对人体有没有危害，添加了多少量”。 　　前晚，胡先生又在该超市购买了一份瘦肉馅，“看起来还是红彤彤的”，胡先生把这份瘦肉馅留存在冰箱，以作证据。 　　同时，他把部分丸子汤也作为证据，保存在冰箱。昨日，胡先生留存的丸子汤，丸子通体已变成红色小圆球，豆腐也被部分染上红色。 　　超市称“刀手”添加染色剂 　　10月22日，华联精品超市(BHG)三里屯店猪肉档前，胡先生购买的鲜红的猪肉馅已经不见，正在出售的猪肉馅，颜色较胡先生购买的，要浅很多。 　　该超市朱经理以及食品部白经理均证实，出售给胡先生的瘦肉馅里，添加了一种名为“日落黄”的添加剂，并表示“日落黄”是在超市内被员工加入。“是我们超市违规了，这是不允许的。”朱经理说。 　　初步调查，“日落黄”是10月18日被员工带进超市，10月19日被添加进瘦肉馅里。“是(猪肉档)刀手做的”，该员工在店内工作了几个月。白经理说，他作为食品部经理，在管理以及员工培训上做得不到位。 　　至于超市以前是否就在鲜肉中添加“日落黄”，两名经理都表示“不会的，不然消费者早就发现了”。 　　但胡先生对此并不相信，他认为可能此次添加“日落黄”的员工是新手，“抖多了”。 　　■ 专家说法 　　鲜肉添加“日落黄”属违规 　　中国《食品添加剂使用卫生标准》规定，“日落黄”的使用范围，限于调制乳、调制炼乳、冷冻饮品、西瓜酱罐头、可可和巧克力制品、糖果、面糊、虾味片、面糊、谷类和淀粉类甜品、糕点、水果调味糖浆、饮料、调制酒、果冻、膨化食品等食品，并且都有相应的最大使用量。比如，每公斤的调制乳内，日落黄的最大使用量为0.05克。在这份规定中，“日落黄”的添加使用范围，不包括生、鲜肉，熟肉制品。 　　中国农业大学食品学院营养与食品安全系副教授、食品科学博士范志红表示，在添加剂使用范围之外，都是违规使用添加剂。

“出售貉子肉，用途很广，看您有头脑没头脑。” 　　这是《第一财经(微博)日报》记者在河北秦皇岛“立海貉子肉厂”的公司网站上看到的一句话。 　　据该公司网站介绍，“大量出售貉子肉、白条(扒皮去内脏)、混肉(肋排和胸脯肉腿肉的混肉)、全腿肉，跟狗肉一样全瘦肉，是猪牛羊肉、狗肉的最佳的替代品，可做肉松、肉丸子、香肠、腌制品等等。” 　　位于山东省的临沂信通特种肉加工厂在其公司网站“貉子肉产品详情”中也介绍，主营产品有狐狸肉、貉子肉、水貂肉，产品可做香肠、肉干、肉串、罐头、熟食等。 　　2013年12月28日，山东省禹城市公安部门对外宣布，经检测，涉嫌五香驴肉掺假的德州福聚德食品有限公司产品检出狐狸肉成分，目前厂家老板已被警方刑拘。 　　12月30日，山东省食品药品监督管理局发出紧急通知，停止销售德州福聚德食品有限公司五香驴肉产品。这个问题驴肉最早是在济南市沃尔玛超市发现的。 　　记者从一家毛皮协会了解到，尽管在养殖、肉类加工和餐饮行业，貂肉、貉肉、狐狸肉充当其它的肉类来卖早已是行业的秘密，但大家对此都讳莫如深，很是默契。 　　“这事你就不要再继续追了。”一家毛皮协会的负责人对记者说。 　　目前，销售貂肉、貉肉、狐狸肉等“特种肉类”的厂家多集中的山东、河北、吉林等毛皮动物养殖区。 　　“这些肉大多进了肉联厂和大小餐馆，充当其它的肉卖。”记者在河北省昌黎县采访时，一家养殖场的负责人对记者说。 　　记者查询多个厂家的信息发现，每吨貉子肉的销售价格在4000元上下，而市场上每吨猪肉的销售价格约8000元，每吨牛肉、羊肉的销售价格分别约16000元、18000元。也就是说，用貉子肉充当猪牛羊肉，利润空间十分可观。 　　这位养殖场的负责人告诉记者，“每只貉子养殖成本约200元。貉子剥了皮之后，一张貉子皮可卖500元左右。剩下的肉要么打碎做饲料再喂给貉子吃，要么就等着人来收，送肉联厂。”2013年，这家养殖场出栏了10万只狐狸和貉子。 　　而在素有“中国养貉之乡”的整个昌黎县，每年狐狸、貉子、水貂的养殖数量都在1200万只以上，其中，很大部分的貂肉、貉肉、狐狸肉，或保鲜、或冷冻、或加工成熟食后，被销往全国各地。 　　据中国食品土畜进出口商会此前发布的《中国毛皮产业现状与发展趋势报告》介绍，目前，我国的毛皮动物养殖区分散、地域跨度大。养殖区分布在山东、辽宁、河北、黑龙江、吉林、江苏、内蒙古等14个省(自治区、直辖市)，主要养殖区集中在山东、辽宁、河北、黑龙江和吉林境内。 　　截至2011年8月，全国养殖水貂3455.79万只、狐狸1309.4万只、貉子1990.81万只、獭兔500万只。 　　据记者了解，从毛皮动物养殖、毛皮生产加工、毛皮贸易和零售，以及由此带动的饲料、兽药、机械、加工等行业，在许多地方已经形成了完整的产业链和利益链。 　　从1956年到2008年，中国的毛皮动物养殖产业共创造价值2500亿元。2010年，中国毛皮行业总产值426.8亿元人民币，其中出口额为128亿元人民币，国内零售额为300亿元人民币，整个毛皮产业从业人员近700万人。中国一跃成为毛皮动物(狐、貉、貂、獭兔等)养殖与裘皮加工大国。 　　当然，上述的统计并没有将“特种肉类”的销售、加工人员和产值计算在内。 　　据记者了解，沃尔玛“五香驴肉”事件发生后，沃尔玛表示将在济南市全面召回所售商品。为了表示对顾客的歉意，沃尔玛对购买过该商品的顾客给予合理的补偿，同时表示将积极配合工商及食药监部门对此事的进一步调查，并将采取法律行动追究相关责任方的法律责任。 　　事件发生后，沃尔玛中国立即成立了由沃尔玛中国总裁兼首席执行官高福澜(Greg Foran)领导，由沃尔玛中国首席合规官骆启德(Rob Chester)牵头负责，由合规、法律、采购等多个部门组成的工作小组。 　　高福澜对记者表示，此事对沃尔玛来说是“深刻的教训”。12月31日，沃尔玛宣布将尚未列入国家相关标准要求的DNA的检测正式纳入易掺假的肉制品抽检，包括牛肉、羊肉、驴肉、鹿肉等肉制品。 　　中国连锁经营协会此前发布的《食品安全责任溯源制度研究报告》也建议，建立“尽职免责”的“责任溯源”司法体制，改变目前行政追责分段管理的模式，真正形成从终端到源头的倒逼机制，提高我国的食品安全管理水平。 文章转载自：一财网