表他克莫司

rAAV腺相关病毒载体表征腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成员之一。其直径约为20-26nm，含有4.7kb左右的线状单链DNA。重组腺相关病毒载体（recombination AAV, rAAV）则是在非致病的野生型AAV基础上改造而成的，因其具有：安全性高、免疫原性低；宿主细胞范围广（对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力）；体内表达时间长；血清型众多，且具有组织特异性等特点被广泛用于基因治疗、疫苗等研究、应用领域[1]。在rAAV的生产工艺中，有无团聚体（aggregate），以及衣壳滴度（titer）的高低是重点考察的关键质量属性（CQAs）[2]，Zetasizer纳米粒度仪通过对rAAV颗粒的粒径及衣壳滴度的表征，快速实现该CQAs的鉴定。纳米粒度电位仪马尔文帕纳科 Zetasizer Ultra01材料和方法将两种不同生产批次的rAAV分别用缓冲液稀释至合适的浓度，利用Zetasizer Ultra-Red （Malvern Panalytical Ltd.）以及小体积石英比色皿（ZEN2112）进行相应的粒径和滴度测定[3]。样品测试体积为20 µL，rAAV折射率、吸收率分别设置为1.45和0.001，缓冲液的散射光强度测定为80 kcps。02结果通过多角度动态光散射（multi-angle DLS, MADLS）技术，我们分别对两种批次的rAAV粒度大小及分布进行表征（图1、3）。可以看到，批次1的rAAV只有一个粒径分布峰，其值大小为28.2 nm，说明体系中没有团聚体产生，而批次2的rAAV则呈现出3个粒径分布峰，分别位于28.2、150.9以及430.6 nm，这说明体系中除了rAAV单体，还有团聚体产生。此外，基于MADLS技术得到的颗粒的准确粒径分布图，我们还能得到对应尺寸的衣壳滴度（图2、4）。图1，批次1 rAA的光强粒径分布图图2，批次1的衣壳滴度图3，批次2 rAA的光强粒径分布图图4，批次2的衣壳滴度参考文献1. Mendell J R, Al-Zaidy S A, Rodino-Klapac L R, et al. Current Clinical Applications of in vivo Gene Therapy with AAVs. Molecular Therapy, 2021, 29 (2), 464-488.2. Gimpel A L, Katsikis G, Sha S, et al. Analytical Methods for Process and Product Characterization of Recombinant Adeno-Associated Virus-based Gene Therapies. Molecular Therapy — Methods & Clinical Development, 2021, 20, 740-754.3. Cole L, Fernandes D, Hussain M T, et al. Characterization of Recombinant Adeno-Associated Viruses (rAAVs) for Gene Therapy Using Orthogonal Techniques. Pharmaceutics, 2021, 13, 586.

NMT历史上的今天2018年8月6日，北京林业大学尹伟伦、孟森利用NMT技术在International journal of molecular sciences 上发表了标题为Distinct Carbon and Nitrogen Metabolism of Two Contrasting Poplar Species in Response to Different N Supply Levels的文章。影响因子为3.687。2012年8月6日，中科院海洋所王广策、林阿朋利用NMT技术在Physiologia Plantarum上发表了标题为Simultaneous measurements of H+and O2 fluxes in Zostera marina and its physiological implications 的文章。影响因子为3.067.期刊：International journal of molecular sciences主题：两种杨树对不同氮素供应水平的碳氮代谢差异标题：Distinct Carbon and Nitrogen Metabolism of Two Contrasting Poplar Species in Response to Different N Supply Levels影响因子：3.687检测指标：NH4+、NO3-、H+流速流速检测部位：杨树根部NH4+、NO3-、H+流实验处理方法：杨树在低中高（0.01,1或10 mM的NH4NO3）的氮浓度下处理4周NH4+、NO3-、H+流实验测试液成份：0.01mM/1mM/10mM NH4NO3，0.1mM KCl，0.1mM CaCl 2，pH 5.5通讯作者：北京林业大学尹伟伦、孟森英文摘要Poplars have evolved various strategies to optimize acclimation responses to environmental conditions. However, how poplars balance growth and nitrogen deficiency remains to be elucidated.In the present study, changes in root development, carbon and nitrogen physiology, and the transcript abundance of associated genes were investigated in slow-growing Populus simonii (Ps) and fast-growing Populus euramericana (Pe) saplings treated with low, medium, and high nitrogen supply. The slow-growing Ps showed a flourishing system, higher δ15N, accelerated C export, lower N uptake and assimilation, and less sensitive transcriptional regulation in response to low N supply.The slow-growing Ps also had greater resistance to N deficiency due to the transport of photosynthate to the roots and the stimulation of root development, which allows survival. To support its rapid metabolism and growth, compared with the slow-growing Ps, the fast-growing Pe showed greater root development, C/N uptake and assimilation capacity, and more responsive transcriptional regulation with greater N supply. These data suggest that poplars can differentially manage C/N metabolism and photosynthate allocation under different N supply conditions.中文摘要（谷歌机翻）杨树已经发展出各种策略来优化对环境条件的适应性反应。然而，杨树如何平衡生长和氮缺乏仍有待阐明。在本研究中，在慢生长的小叶杨（Pops simonii）（Ps）和快速生长的欧洲杨（Populus euramericana（Pe）幼树）中研究了根系发育，碳和氮生理学以及相关基因的转录本丰度的变化。高氮供应。缓慢生长的Ps显示出繁殖系统，更高的δ15N，加速的C输出，更低的N吸收和同化，以及响应于低N供应的较不敏感的转录调节。由于光合产物向根部的转运和根系发育的刺激，缓慢生长的Ps对N缺乏具有更大的抗性，这允许存活。为了支持其快速代谢和生长，与生长缓慢的Ps相比，快速生长的Pe显示出更大的根发育，C / N吸收和同化能力，以及具有更大N供应的更具响应性的转录调节。这些数据表明，杨树可以在不同的氮供应条件下差异化地控制C / N代谢和光合产物分配。Figure 4. Net NH4+ (A), NO3? (B) and H+ (C) fluxes of P. simonii (Ps) and Populus euramericana (Pe) under 0.01, 1 and 10 mM NH4NO3. Bars labelled with different letters indicate significant difference between the treatments. p-Values of the ANOVAs of species, N treatment, and their interaction are indicated. ** p 0.01 *** p 0.001 ns, not significant.期刊：Physiologia Plantarum主题：同时测量H+和O2流速及其生理意义标题：Simultaneous measurements of H+ and O2 fluxes in Zostera marina and its physiological implications影响因子：3.067检测指标：H+、O2流速检测部位：大叶藻叶片H+、O2流实验处理方法：大叶藻叶片瞬时由暗至光（300μmolm-2s-1）处理H+、O2流实验测试液成份：天然海水（NSW）盐浓度30–32‰通讯作者：中科院海洋所王广策、林阿朋英文摘要Zostera marina (eelgrass) is an important ecological component of many shallow, temperate lagoons. Evidence suggests that Z. marina has a high bicarbonate utilization capability, which could be promoted by possible proton extrusion and the consequent formation of an ‘acid zone’ in the apoplastic space (unstirred layer) of its leaves.It has been found that 50?mM of the buffer Tris significantly inhibited the photosynthetic O2 evolution of Z. marina and it was proposed that this was because of Tris' s ability to bond with protons outside the cell wall. To investigate if H+ played an important role in the photosynthetic carbon utilization of Z. marina, it is very important to simultaneously monitor the photosynthesis status and possible H+ fluxes. However, probably because of the lack of suitable techniques, this has never been attempted.In this study, experiments were undertaken on Z. marina by monitoring H+ and O2 fluxes and the relative electron transport rates during light–dark transition. During stable photosynthesis, in addition to an obvious O2 outflow, there was a significant net H+ influx connected to Z. marina photosynthesis. The inhibitory effects of both Tris and respiration inhibitors on apparent O2 evolution of Z. marina were confirmed. However, evidence did not support the proposed Tris inhibition mechanism.中文摘要（谷歌机翻）Zostera marina（eelgrass）是许多浅水温带泻湖的重要生态组成部分。有证据表明，Z。marina具有较高的碳酸氢盐利用能力，可以通过可能的质子挤出促进，并因此在其叶片的非质外体空间（未搅拌层）中形成“酸性区域”。已经发现50mM的缓冲液Tris显着抑制了Z.marina的光合作用O2进化，并且提出这是因为Tris能够与细胞壁外的质子结合。为了研究H +是否在Z. marina的光合碳利用中起重要作用，同时监测光合作用状态和可能的H +通量是非常重要的。然而，可能由于缺乏合适的技术，这从未尝试过。在这项研究中，通过监测H +和O2通量以及在明暗过渡期间的相对电子传输速率对Z.marina进行了实验。在稳定的光合作用期间，除了明显的O2流出外，还有显着的净H +流入与Z. marina光合作用相关。证实了Tris和呼吸抑制剂对Z. marina的表观O2进化的抑制作用。然而，证据不支持所提出的Tris抑制机制。Fig. 1. Typical transient changes in H+ ?ux near Zostera marina leaf segments in response to bright white light. The result of a single measurement is used in this ?gure as multiple results in one graph would result in large ?uctuations and mask the transient responses. The sample was dark adapted for 1 h. After 25 min of measurement, leaf segments were exposed to bright white light (300 μmol m?2 s?1)for 15 min. Measurements were made at intervals of 6.4 s. Each point on the graph represents average data over an interval of three measurements.

2019年9月20日，莫道克大学（Murdoch University）和布鲁克（Nasdaq: BRKR）联合宣布了一项战略合作计划。据悉，此次合作将为澳大利亚国家表型组研究中心（Australian National Phenome Centre，以下简称ANPC）的代谢表型组学研究，乃至世界各地的疾病预防、诊断以及个性化健康的研究发挥重要积极作用。ANPC在2018年由莫道克大学负责健康科学的副校长和国际表型组学先驱Jeremy Nicholson教授，以及以及于2018年在表型组学研究领域被授予西澳大利亚杰出研究员的Elaine Holmes教授的领导下成立。图：ANPC拥有南半球最多的布鲁克质谱仪目前，ANPC配备了多种布鲁克核磁共振(NMR)和质谱(MS)，布鲁克先进的仪器和全面的解决方案为研究人员探索人类代谢健康中基因、环境和生活方式之间复杂的相互作用带来了极大便利。ANPC将成为西澳大利亚卫生转化网络（WAHTN）的关键平台，并且与各大医院、高校、医学研究机构密切合作，同时也是由Nicholson教授领导的国际表型组中心全球网络（IPCN）的重要分支机构。莫道克大学负责研究和创新工作的副校长David Morrison教授表示：“我们对莫道克大学与布鲁克结成联盟感到非常高兴。ANPC的成立是多年来努力的成果，我们认为在表型组学领域建立一个国际专业中心是非常重要的，同时这也是莫道克大学领导人的战略远见。” Nicholson教授补充说：“布鲁克作为世界领先的仪器设备制造商，我们很高兴布鲁克能利用其先进技术和专业知识来帮助我们改善世界各地人群的健康状况。表型组学的研究将大大拓展我们对人类健康、疾病起因和预防的认识。通过布鲁克与莫道克大学全面的战略合作，我们可以将业内最为先进的仪器和经验丰富的研究人员带来西澳大利亚并增加ANPC的相关经验。双方的合作不仅反映了亚太地区对精准医学研究日益增长的关注和投入，同时将帮助我们改变人们的寿命和生活水平，这不仅仅限于澳大利亚，而是面向全世界的。”莫道克大学目前拥有多种布鲁克在表型组学领域最先进的系统和解决方案，包括7台AVANCE® IVDr 600 MHz NMR、1台NMR FoodScreener™ 、1台用于高通量流动注射分析(FIA)的ESI & MALDI MRMS(磁共振质谱)系统、12台impact-II QTOF质谱和2套timsTOF™ 质谱系统。布鲁克为ANPC提供广泛的应用、服务和研发支持，以帮助其进行分析方法和工具的开发、培训、beta测试和验证。图：莫道克大学基于核磁共振的表型组学AVANCE IVD系统AVANCE IVDr系统是应用于血浆和尿液定量分析的临床研究软件。利用该系统，莫道克大学可以用布鲁克标准的自动化流程进行液体质控、定量和定性分析，这对大规模流行病学研究至关重要。此外，布鲁克的IVDr脂蛋白亚类分析(B.I.LISA)和B.I. Quant-PS 2.0将在区分健康和疾病状态、监测各种治疗或饮食干预影响研究方面发挥重要作用。布鲁克的核磁共振FoodScreener可用于检测食品质量、真伪和营养稳定性。它配有参考数据库，涵盖了各种食物基质的靶标、非靶标测试，这些将作为与ANPC合作的一部分再次进行扩展。质谱获得的数据将使用MetaboScape™ 客户端软件进行分析，该软件无缝集成了流动注射分析(FIA)的超高分辨率MRMS工作流程，以及impact-II QTOF质谱上的定量分析。此外，建立在timsTOF平台上，利用机器学习算法预测分子特异性的碰撞截面积的功能（CCSPridictTM）,适用于4D脂质组学，也被整合在MetaboScape软件中。布鲁克负责应用、工业及临床的磁共振部首席技术官Manfred Spraul博士表示：“表型组学研究的持续发展，为疾病的检测提供了更完善的见解。凭借布鲁克在质谱和核磁共振领域的专业知识，我们能够利用每种技术的独特、差异化潜力，开发出适合代谢组学研究人员所需的最佳工具。”布鲁克生命科学质谱执行副总裁Rohan Thakur博士补充说:“将高通量质谱数据与最新的碰撞截面数据（CCS）结合在一起，在timsTOF Pro平台上进行4D脂质组学和4D代谢组学研究，为表型组学的研究和发展带来积极作用，我们很高兴ANPC评估了我们的‘表型组学workhorse’-- impact II QTOF质谱系统，并证明了它在大队列研究中的超高灵敏度和稳定的定量能力。最后，我们非常高兴，莫道克大学将进一步开发高通量的FIA-MRMS分析方法，我们可以期待未来FIA-MRMS可以不借助色谱的帮助，在短短几分钟内就能识别一千多种代谢物。