酸性糖蛋白

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  • 植物糖蛋白

    植物糖蛋白

    提取纯化了一种植物糖蛋白，凝胶电泳之后分别对蛋白和多糖进行染色，在25-35kDa有一条带是糖蛋白，但是多糖的条带有很严重的拖影，是因为物质不纯吗，还是这种电泳的方法不适用于多糖？[img=,690,465]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/07/202207141602541824_6299_5405797_3.jpg!w690x465.jpg[/img][img=,690,470]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/07/202207141603025571_1576_5405797_3.jpg!w690x470.jpg[/img]

  • 【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用项目完成人：桑志红 蔡 耘项目完成单位：国家生物医学分析中心 随着人们对糖蛋白参与生命活动机理的日益深入了解，对天然糖蛋白及重组糖蛋白类药物的分析越来越受到重视。重组糖蛋白类药物的质量控制更是直接关系到药物的疗效及至人类的健康。九十年代以来，随着带有反射功能的基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和纳升电喷雾串联质谱（nano-ESI-Q-TOF）等具有软电离方式的现代质谱 技术的发展，质谱以其高灵敏度和强有力的分析混合物的能力，提供了生物大分子的分子量、序列、一级结构信息以及结构转换、修饰等方面的信息，使糖基化分析有了重要的进展。 通常研究糖蛋白的方法是把蛋白链上的寡糖切下来，分别研究蛋白部分和寡糖部分的结构，因此无法研究与两部分共同相关的结构问题，也不能区分不同糖基化位点上切下来的寡糖。自90年代初，国外有人开始用质谱法研究糖蛋白的结构，同时描述了各个位点的不均一性。我们用建立的现代生物质谱技术研究糖蛋白一级结构的方法，将其应用与基因重组糖蛋白的结构分析。为糖蛋白结构分析及基因重组糖蛋白类药物的质量控制提供新的手段。一、 生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立实验所用仪器为：1.德国BRUKER 公司的REFLEXIII型基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪，N2激光器，波长337nm，线性飞行距离150cm，加速电压2kv。2.英国Micromass 公司Q-TOF型电喷雾串联质谱仪。源温80°C，气体流速40L/h，枪头电压650V，检测频率2.4S，氩气碰撞池压力6*10-5mbar。1. 基质的选择，在MALDI-TOF-MS分析中，基质起着相当重要的作用。不同的基质对不同类的物质响应不同，a-氰基-4-羟基肉桂酸用于测定糖蛋白核糖核酸酶B效果相对较好。2. 糖蛋白分子量的测定，糖蛋白核糖核酸酶B由124个氨基酸组成，在34位Asn处连有一个高甘露糖型N-糖链。由于糖链的微不均一性，与普通蛋白质及核酸不同，其分子离子峰在MALDI-TOF-MS 质谱图上表现为一簇峰，各峰之间约相差一个糖基。正是由于这种微不均一性，使得其分子离子峰变宽，灵敏度降低。糖链分子量越大，峰越宽，灵敏度越低，所以一般只有糖链较短，蛋白的质量不太大的糖蛋白才能测定其平均分子量。用MALDI-TOF可直接测定糖蛋白核糖核酸酶B的平均分子量为 15208.6Da。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211511_284179_1604317_3.jpg3. 糖含量的测定，采用O聚糖酶及内糖苷键酶F分别作用于核糖核酸酶 B，只有内糖苷键酶F能够是其分子量发生变化，表明核糖核酸酶B分子中不存在O-连接糖链存在着N-连接糖链。内糖苷键酶F切断N-糖链五糖核心最内侧的GlcNAc-GlcNAc糖苷键，得到含一个GlcNAc的肽链，减去GlcNAc，可以计算出准确的肽链分子量T=13695.6，与糖蛋白平均分子量之差为糖链的平均分子量G=1513.4，平均糖含量为：(糖链大小/糖蛋白分子量)×100%=9.95%。4. 糖基化位点的确定，研究糖基化类型及糖基化位点的策略：采用蛋白酶酶解与糖苷内切酶酶解相结合的方法，通过酶切前后含糖肽片的位移，结合网上数据库检索，可以确定糖基化类型和糖基化位点。以不同类型的糖苷内切酶作用于糖蛋白（N-糖苷键酶或O-糖苷键酶），在MALDITOF-MS 上观察其质量的变化，可以直接确定糖蛋白中是否含有响应类型的糖链，这是我们确定糖蛋白中糖苷键类型的基础。我们采用先将核糖核酸酶B还原烷基化，加Glu-C酶切，产物再用内糖苷肩酶F酶切，可观察到含糖肽段出现位移，将核糖核酸酶B的肽质量指纹图进行数据库检索，证实发生位移的肽段中含有N-糖链特异连接位点，由此确定34位Asn为糖基化位点。另外我们采用内糖苷键酶F及肽-N-聚糖酶F两种酶进行差位酶切法对含糖肽段进行验证，两种酶酶切后分子离子峰的差值除以GlcNAc的质量，结果就是N-糖基化位点的个数5. 质谱测定氨基酸序列， 我们对核糖核酸酶B肽质量指纹谱中的含糖肽段进行了串联质谱测定，首先在一级质谱图中选择离子4972.23，在串联质谱的碰撞活化室以氩气与其碰撞产生碎片，从碎片的质荷比推算出此肽片中的一段氨基酸序列，检索结果为核糖核酸酶B，从而判断其理论序列是否一致。6. 糖链结构的研究，凝集素对糖肽的亲和提取，进一步分析糖肽序列及糖链结构的关键是含糖肽段的提取。核糖核酸酶B中糖链为高甘露糖型，我们选用对其有特异性吸附的伴刀豆球蛋白对其进行提取利用这种简捷的亲和质谱的方法，对糖肽段进行了分析。建立了亲和质谱分析糖肽类物质的方法，为今后糖肽序列分析及糖链结构分析奠定了基础。二、基因重组糖蛋白人促红细胞生成素（rhEPO）的结构分析。 利用以上建立的方法，我们对样品重组人促红细胞生成素进行了分析，断定此样品为非完全糖基化，样品中只存在N-连接的糖链，无O-糖链。应用酶切法用肽-N-聚糖酶处理后，得到两个含糖肽段，进行数据库检索，测得38位及83位为N-糖基化位点，与文献报道相符，结果可靠。因此，该项课

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  • 大赛璐酸性糖蛋白手性柱CHIRALPAK AGP使用注意事项
    α-酸糖蛋白（AGP）是一种非常稳定的蛋白质，它不但能耐高浓度的有机溶剂，也耐高温以及较高或较低的PH值。AGP是CHIRAL-AGP柱的手性选择体，它涂敷在5μm的球形硅颗粒之上。CHIRAL-AGP柱适用于反相色谱，用途十分广泛，是所有手性柱中应用范围最广的，可以分离所有类型化合物，胺（伯、仲、叔、季胺）、酸（强和弱）、非光解质（酰胺，酯，醇，亚砜等）。由于CHIRALPAK? AGP是酸性糖蛋白手性柱，蛋白质容易变形失活，所以请在使用前后将柱子置于冰箱中（0℃-4℃）冷藏保存。另外，在使用CHIRALPAK? AGP时还有几点需要特别注意：
  • 人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)检测试剂盒
    人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)检测试剂盒人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)抗原、生物素化的人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
  • 人糖蛋白130(gp130)检测试剂盒
    人糖蛋白130(gp130)检测试剂盒人糖蛋白130(gp130)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖蛋白130(gp130)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖蛋白130(gp130)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖蛋白130(gp130)抗原、生物素化的人糖蛋白130(gp130)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖蛋白130(gp130)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
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  • 大会报告：糖蛋白的最新分析技术与研究进展
    仪器信息网讯，2010年5月15日，蛋白质组数据处理暨全国生物质谱学术交流会”在云南省丽江市召开。会议为期两天，主要讨论了蛋白质组学技术和应用、数据挖掘和生物质谱等方面的现状及其进展。在所有的大会报告中，除一些关于蛋白质组学技术最新研究进展的大会特邀报告外，第一天的专家报告集中讨论了糖蛋白组的最新分析技术与研究进展，第二天的报告集中讨论了蛋白质数据处理技术，包括蛋白质组生物数据库及分析平台的构建、数据统计分析方法的研究等方面。 　　作为会议议题的主要内容之一，糖蛋白广泛存在于生物体内，是重要的生物活性物质，具有很多重要功能，关于其的最新研究进展已受到国内外科学家们的高度关注。在本次大会上，南京大学的梁亮博士、美国约翰霍普金斯大学李岩博士、上海交通大学系统生物医学研究院的张延研究员等多位专家学者作了关于糖蛋白最新研究进展的报告，本文对关于糖蛋白研究的部分报告主要内容进行简要报道： 　　报告题目：应用糖蛋白质组学和糖组学的方法筛选癌症分子标记物 　　报告人：美国约翰霍普金斯大学李岩博士 李岩博士 　　李岩博士在报告中表示，目前分子标记物研究主要面临的挑战主要是，样品的复杂性与患者的个体差异性，应对其建立高准确度、高灵敏度、高通读、高重复性的分析检测方法。糖蛋白在分子标志物研究中的重要意义，大部分分泌蛋白、跨膜蛋白、和细胞表面蛋白是糖基化蛋白，他们涉及大量的生物学功能，并且，美国FDA已批准的生物标记物几乎全是糖蛋白。 　　在其报告中，分别通过糖蛋白质组学糖组学的方法对分子标记物进行了分析比较分析。 　　在糖蛋白质组学研究中，其分别采用多维色谱-质谱法(MALDI-TOF/TOF)和SRM-MS对糖蛋白进行了定量检测 在糖组学研究中，其表示，现有的糖组学方法不能用于临床样本检测，而新方法有待确立，李岩博士通过凝集素-抗体反应方法检测了糖的motif在前列腺组织中的表达水平。通过对糖蛋白质组学和糖组学方法的分析比较，其建立了适用于临床的检测方法，对于在前列腺中发现可能的分子标志物选择临床治疗方案有很大的帮助。 　　报告题目：用于糖蛋白富集的团队硼亲和方法研究 　　报告人：南京大学梁亮博士 梁亮博士 　　梁亮博士在报告中首先提到，糖蛋白(包括糖肽)的富集是糖蛋白质组学研究中的一个关键科学问题。目前用于糖蛋白富集的主要方法有凝集素亲和法、肼化学法、亲水作用色谱法和硼亲和色谱法等。和其他些方法比较，硼亲和方法虽具有显著的优点，但也有两个明显的缺点：(1)在中性pH下的亲和能力极弱，必须在碱性pH下才能与顺式二羟基化合物结合，这造成了操作上的不便，增加了样品变性的危险 (2)在碱性pH时取代硼酸带负电，与样品及样品基体间存在静电相互作用，因而导致专一性的下降。 　　为了同时解决以上两个问题，其科研团队提出了“团队硼亲和”的原理以及相应的方法。该方法要求分子团队成员在分子的另一端带上氨基，通过与环氧开环形成多孔整体材料，分子团队固定到整体材料的表面。该方法只需要一步反应即可制备得到所需的整体柱，操作十分简单，对操作者和环境友好。制备得到的整体柱可以直接应用于生理样品中的核苷等生物分子的专一性富集。最近，其科研团队提出了构建团队硼亲和的另一个绿色化学路线：分子自组装法。分子团队成员在分子的另一端带为噻吩或巯基，利用在金表面的分子自组装，一步反应即可得到团队硼亲和材料。利用该方法，制备了团队硼亲和磁性纳米颗粒和团队硼亲和MALDI靶板，其优异的亲和力和专一性得到验证，成功实现了在中性pH条件下对糖蛋白的专一性富集和纯化。利用团队硼亲和磁性纳米颗粒作为微萃取探针，通过MALDI-TOF MS检测，在生理pH条件下，存在于浓度高100倍的非糖蛋白基体中的糖蛋白能被专一性地萃取。 　　报告题目：蛋白质的O-糖基化修饰研究 　　报告人：上海交通大学系统生物医学研究院张延研究员 张延研究员 　　糖链修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰。细胞内50%以上的蛋白质都有糖链修饰。糖链参与了细胞识别、细胞分化、发育、信号传导、免疫应答等各种重要生命活动。按糖链与氨基酸的糖苷键结合方式的不同，真核生物中蛋白质糖基化可分为N-糖基化修饰和O-糖基化修饰，蛋白质的O-糖基化修饰中最主要的O-GalNAc修饰。 　　张延研究员通过对O-GalNAc糖基转移酶的糖基化修饰特性进行研究，利用UDP-GalNAc衍生物糖探针的荧光标记技术，结合质谱及多肽蛋白质芯片技术，建立了一种高通量发现蛋白质O-糖基化的新策略。
    时间： 2010-05-19
    作者： rjzhou
  • 沃特世发布糖蛋白表征分析新技术
    沃特世将通过新型UPLC和UPLC-MS分析工作流程为蛋白糖基分析带来革命性转变 新型RapiFluor-MS标记试剂和样品制备方案将极大提升对蛋白N-糖进行分析和表征的速度、灵敏度以及简便性 华盛顿特区，2015年1月27日 – 沃特世（Waters?）公司（纽约证券交易所代码：WAT）今日隆重发布用于糖蛋白表征分析的开创性新技术。此技术将在WCBP 2015大会上介绍给公众，其内容包括新型GlycoWorks?RapiFluor-MS N-糖分析试剂盒、Waters?ACQUITY UPLC?、ACQUITY? UPLC FLR检测器和ACQUITY QDa?检测器，它们将帮助科学家们准确分析游离N-糖，使分析速度、灵敏度和简便性提升到更高水平，为科学家们提供前所未有的详细结构信息。 此项新型技术系列能够实现快速糖基释放和标记，可将工作流程中的样品制备时间从一天缩短至一小时以内；使表征和研发分析中的质谱检测灵敏度提升至当前方法的100至1000倍；还可为常规实验室提供简便可靠的方案支持，即使没有MS专家，也能顺利完成分析。“我们今天推出的新型技术为蛋白糖基分析带来了开创性的分析方法，它的出现意味着科学家们将能够对游离N-糖进行前所未有的监测和表征分析，”沃特世消耗品业务部门副总裁Mike Yelle说道，“这些全新的工作流程承担了过去专业且复杂的操作，实现了流程一体化，使科学家们和实验室在成功的道路上更近一步。” 大部分的生物治疗性蛋白质都是糖蛋白，且这些蛋白质上的特异性多聚糖群体是关键的品质属性，可对其功能、稳定性和治疗安全性概况产生影响。提交至监管机构的新药申报材料中必须包含其所含糖基侧链的详细结构信息，以及能够证明这些糖蛋白能够在生产过程中保持糖型谱图一致的信息。 支持糖蛋白工艺开发、监测和批量放行 对于从事生物治疗药物工艺开发、监测或批量放行研究的科学家们而言，全新的RapiFluor-MS标记技术与沃特世ACQUITY UPLC H-Class系统和QDa检测器的完美结合将开创游离N-糖谱图监测的新时代。沃特世所提供的试剂和方案在速度和灵敏度方面都具有非常突出的优势，将为用户带来更加简便的常规MS分析，ACQUITY QDa检测器可生成前所未有的详细信息，分析人员通过这些质量数数据即可轻松确认糖型。科学家们无需再依靠质谱专家和高分辨率的LC-MS仪器，即可对糖型分析进行方法开发、转换和执行过程中频频出现的问题作出确切的解答。此套工作流程可帮助生物制药组织更轻松地诊断问题、加快决策制定，更快速地将实验室中的分子变成药物推向临床领域。 对使用荧光检测技术的分析人员而言，将此款新型试剂盒与ACQUITY UPLC和ACQUITY UPLC FLR检测器联用时，样品制备时间可从一天缩短至一小时以内，同时荧光灵敏度也将得到有效提高。 支持蛋白糖基表征分析 蛋白糖基表征包括对连接到糖蛋白的所有多聚糖（无论其浓度有多低）进行鉴别，以及对这些多聚糖的分子结构进行确证。要高效地完成这项工作，需要UPLC-MS-MS仪器能够应对分析中的各项难题。 沃特世UNIFI?蛋白糖基分析应用解决方案于2013年推出，是更广泛的沃特世UNIFI生物制药平台解决方案的一部分，它配有高分辨率的UPLC/QTof-MS系统，可对生物制药研发实验室中以及受高度监管的后期开发和QC组织中的蛋白糖基侧链进行定性和监测。 现在，凭借RapiFluor-MS标记提供的高灵敏度，研究人员将获得更大的光谱和质谱响应值，这将有力促进低含量峰的准确质量数确认，提高MS/MS多聚糖碎裂性能，实现确定性更高的糖型指认。 此外，我们还推出了RapiFluor-MS葡聚糖校准曲线标准品和多聚糖性能测试标准品（基于混合IgG），用以支持系统性能的基准测试和执行基于葡聚糖单元数(GU)的蛋白游离糖基分析研究。沃特世公司率先将基于GU的葡聚糖校准曲线标准品保留时间归一化方法实现了商业化，此方法最初由来自爱尔兰国家生物工艺研究培训所(NIBRT)的Pauline Rudd教授提出。这种基于GU的方法使多聚糖的分析更加稳定，可以更轻松地在仪器之间和实验室之间实现UPLC-MS检测分析的转换。沃特世正在与Rudd教授及其在NIBRT的团队合作，开发全新的GU数据库，期望能够促进GU和GU+准确质量数多聚糖分配，这项工作将作为联合海报的主题于本年度的WCBP会议上展示。 更多信息： 有关GlycoWorksRapiFluor-MS N-多聚糖试剂盒的更多信息，请访问www.waters.com/glycans。 关于沃特世公司 (www.waters.com) 50多年来，沃特世公司通过提供实用、可持续的创新，使全球范围内的医疗服务、环境管理、食品安全、水质监测、消费品和高附加值化学品领域有了显著进步，从而为实验室相关机构创造了业务优势。 作为一系列分离科学、实验室信息管理、质谱分析和热分析技术的开创者，沃特世技术的重大突破和实验室解决方案为客户的成功创造了持久的平台。 2014年沃特世拥有19.9亿美元的收入，它将继续带领全世界的客户探索科学并取得卓越成就。 ### Waters、RapiFluor-MS、ACQUITY、ACQUITY UPLC、UNIFI、QDa和UPLC是沃特世公司的商标。
    时间： 2015-01-30
    作者： Waters
  • 了解糖蛋白结构异质性和相互作用：来自native Mass的见解
    大家好，本周为大家分享一篇发表在Current Opinion in Structural Biology上的文章，Understanding glycoprotein structural heterogeneity and interactions: insights from native mass spectrometry，通讯作者是英国牛津大学化学系的Carol V . Robinson教授。　　蛋白质糖基化的过程会产生具有多种组成、连接和结构的聚糖，这些聚糖具有多种生物学功能。哺乳动物的主要两类糖基化修饰为 N糖和粘蛋白型O糖(图1 a,b)。N-聚糖的分支结构、单糖延伸、岩藻糖基化和唾液酸化是主要特征 粘蛋白型O-聚糖根据其核心结构分为四类。解读聚糖异质性对于了解糖蛋白的结构和功能至关重要。高分辨率nMS在完整水平上提供聚糖组成的全景图，并且将糖蛋白结构的异质性与相互作用的化学计量和功能联系起来。这篇文章集中讨论了利用nMS阐明糖蛋白结构异质性和生物分子功能的最新进展。　　图1 糖基化特征可以用native MS方法表征　　一、描绘糖型组成异质性　　糖蛋白的主要特征包括聚糖占据、N-聚糖分支/延伸、岩藻糖基化和唾液酸化。通过native MS 和糖蛋白组学的方法表征人胎球蛋白糖型，native MS确定全局宏观和微观异质性，而糖蛋白组学描述了位点特异性糖基化信息，可以根据特定于位点的信息对蛋白native MS谱中每种糖型的详细组成进行注释(图1c)。　　使用凝集素的亲和纯化质谱(AP-MS)有助于靶向分析糖蛋白上具有感兴趣结构的糖型。例如，特异性识别α1-3岩藻糖残基的凝集素 (AAL)，揭示了人类α1-酸糖蛋白(AGP)上的 α1-3岩藻糖残基的化学计量 使用与糖基β1-6分支相互作用的凝集素PHA-L，表明 β1-6 分支在所有 AGP 糖型上的普遍存在。　　外切糖苷酶处理在糖组学中广泛用于区分具有不同键的单糖残基。一项最近的工作使用了α-神经氨酸酶、β-半乳糖苷酶、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶和α-岩藻糖苷酶的组合外切糖苷酶，揭示了 AGP 在完整糖蛋白水平上核心和触角岩藻糖基化的化学计量。对于同时具有 N-连接和 O-连接聚糖的高度糖基化生物治疗药物，例如依那西普、使用外切糖苷酶、内切糖苷酶和蛋白酶的综合酶处理对于全面了解糖蛋白的整体异质性至关重要(图2)。　　图2 (a) 依那西普的结构 (b) 唾液酸酶(一种外糖苷酶)和PNGase F(一种内糖苷酶)处理的依那西普的native MS。　　2、描绘结构异质性　　蛋白质O-糖基化在许多细胞表面蛋白质中普遍存在，如 SARS-CoV-2 刺突蛋白受体结合域 (S-RBD)，该蛋白具有核心 1 和核心 2 粘蛋白型O糖。最近的一项突破将软着陆 MS 和扫描隧道显微镜 (STM) 相结合，能够对单个聚糖的构象和结构进行成像。　　以前的报告表明，N-聚糖分支和核心岩藻糖基化受到糖基化位点局部构象的限制，远离蛋白质表面的唾液酸化和末梢岩藻糖基化被认为受蛋白质骨架结构的影响较小。随着 nMS 分辨率的进步，通过比较位点特异性和全局异质性直接重新审视这一假设是可行的。如果每个位点上的糖基化事件是独立的，那么全局异质性应该与位点特异性信息一致。对于核心岩藻糖基化IgG和携带简单 N糖的人胎球蛋白，位点特异性糖基化完美地解释了整体异质性。然而，最近对高度分支和唾液酸化的 rhEPO 和 S-RBD 的研究表明，糖基分支上唾液酸化打破了native MS 和糖蛋白组学数据之间的这种相关性。因此，这些情况表明唾液酸化并非完全独立于所有糖基化位点。　　3、破译N聚糖生物合成途径 监测N-聚糖宏观和微观异质性提供了对其生物合成途径的见解。N-聚糖分支由一系列N-乙酰胺基葡萄糖转移酶催化，它们将单糖依次连接到糖基的不同分支上。对敲除了个别N-乙酰胺基葡萄糖转移酶基因的细胞表达的糖蛋白进行分析，可以揭示糖基的生物合成偏好。除了N聚糖的分支合成以外，岩藻糖基化过程也可以通过native MS揭示。人类AGP最多能携带11个岩藻糖, 用连续的外切糖苷酶消化和native MS来区分 AGP 上的核心和分支岩藻糖基化N-聚糖，揭示了岩藻糖基化在完整糖蛋白水平上的联系和化学计量(图3)。　　图3 (a)人AGP结构。(b)外切糖苷酶处理可区分AGP上N糖的核心和分支岩藻糖基化。(c) 外糖苷酶消化的AGP的native MS揭示了在完整糖蛋白水平上岩藻糖基化的联系和化学计量学。　　四、将糖的异质性与糖蛋白相互作用联系起来　　通过保留完整的蛋白质与配体/药物的复合物，nMS 为蛋白质相互作用的化学计量和动力学提供了信息。AGP 与抗凝药物华法林的研究表明，单岩藻糖基化可减弱蛋白质-药物相互作用(图4)。　　图4 (a)人 AGP在其疏水袋中特异性结合抗凝药物(华法林)。 (b) 将 AGP-华法林复合物的native MS绘制为华法林浓度的函数 (c)华法林浓度和与华法林结合的非岩藻糖基化AGP或单岩藻糖基化AGP的百分数的对应曲线。非岩藻糖基化为蓝色，单岩藻糖基化为红色。 (d) 不同糖型解离常数的比较表明，N-聚糖分支和岩藻糖基化降低了 AGP 对华法林的亲和力。　　native MS的分辨率革命已经使糖组学、糖蛋白组学和top-down MS之间建立了联系，以揭示糖基的宏观异质性。未来，蛋白质糖基化的数学模型和多组学方法的整合将为我们理解“不可解析”的糖蛋白复合物提供新的思路。
    时间： 2022-11-17
    作者： ONE
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  • 安捷伦ProteoAnalyzer毛细管蛋白电泳系统 宽范围蛋白质 P240 试剂盒 400-629-8889
    安捷伦宽范围蛋白质 P240 试剂盒旨在为包括单克隆抗体、可溶性组分、膜组分和粗裂解物（分子量最高可达 240 kDa）在内的多种蛋白质提供解决方案。 两次运行之间可完全恢复毛细管电泳环境，确保了蛋白质分析的高度一致性。宽范围蛋白质 P240 试剂盒可在 30 min 内为 10 至 240 kDa 的蛋白的分离提供高分辨率结果。这样可以在单次自动电泳运行中分析宽分子量范围的复杂样品。 快速共价标记法避免了分析区域出现系统峰，同时提供了 3 个数量级的动态范围，能够检测低至 0.1% 的杂质。特性：快速分析 — 在大约 30 min 内平行分离 12 个样品准备时间短 — 只需 10 分钟的手动操作时间即可准备好样品广泛的定量范围 — 支持 2-2000 ng/µ L 的起始样品浓度支持各种样品类型 — 能够可靠地分离各种难分离的蛋白质样品，如膜蛋白和粗裂解物高分辨率 — 明确分离糖基化和非糖基化亚型无系统峰干扰 — 共价标记法可消除分离中的共迁移系统峰适用于多种应用 — 能够在还原和非还原条件下分析样品性能指标：保质期4 个月分子量测定范围LM only: 10 - 240 kDa LM and UM: 10 - 200 kDa bp分析时间30 min / 11 samples + 1 ladder min定量精度 25 % CV定量范围2 - 2,000 ng/µ L for BSA in PBS定量重现性20 - 2,000 ng/µ L BSA: 15% CV, 2 - 20 ng/µ L BSA: 25 % CV样品量1 µ L每个试剂盒的使用次数275灵敏度1 ng/µ L (BSA)，CAII 的 PBS 溶液片段大小测定准确度LM only: 15% for BSA, CAII LM and UM: 10% for BSA, CAII片段大小测定分辨率 10% molecular weight resolution between 15 to 150 kDa (based upon ladder) R≥1 NIST mAb NGHC/HC (using reduced conditions) %片段大小测定精度LM only: 8% CV for BSA, CAII, GREMLIN-1, and NIST mAb (using reduced conditions), 10% CV for intact NIST mAb (using non-reduced conditions) LM and UM: 5% CV for BSA, CAII, GREMLIN-1 and NIST mAb (using reduced conditions) % CV
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    厂商： 安捷伦科技(中国)有限公司
    品牌： 安捷伦/Agilent Technologies
    型号： P240 试剂盒
    价格： 面议
  • 安捷伦ProteoAnalyzer毛细管蛋白电泳系统 400-629-8889
    Agilent ProteoAnalyzer 系统是一种平行毛细管电泳仪器，可自动进行还原型和非还原型蛋白质样品的毛细管电泳-十二烷基硫酸钠 (CE-SDS) 分析。 该系统能够在短短 30 min 内对 12 个样品进行分离，省去了 SDS-PAGE 凝胶制备、染色/脱色和分析的繁琐过程，让您专注于结果。ProteoAnalyzer 系统可分离 10 kDa 至 240 kDa 的蛋白质，能够在单次运行中分析宽分子量范围的蛋白质。 在每次分离之间可恢复各个毛细管的性能，因此可以分析不同的样品，包括单克隆抗体、生物仿制药、蛋白质纯化组分和粗裂解物。特性：分析时间短 — 只需 30 min 即可平行分析 12 个蛋白质样品支持各种样品类型 — 可靠地分离具有挑战性的蛋白质样品，如膜蛋白和粗裂解物高分离分辨率 — 分离糖基化和非糖基化亚型宽分子量范围 — 安捷伦宽范围蛋白质 P240 试剂盒可测量 10 至 240 kDa 的蛋白质高灵敏度 — 可检测 PBS 中浓度低至1 ng/µ L 的 BSA 蛋白更宽的样品浓度范围 — PBS 中 BSA 样品的线性动态范围为 2-2000 ng/µ L提高实验室效率 — 在当前正在进行分离的情况下，上样并设置下一次运行灵活的上样方式 — 可以在队列中上下移动样品以调整运行顺序仪器准备时间非常短 — 无需进行日常阵列处理，并使用室温下稳定的试剂性能指标：功耗150 VA宽度35 cm尺寸（宽 x 深 x 高）35 cm x 51 cm x 61 cm操作环境的相对湿度20 - 80 %每次运行的样品数12深度51 cm电源电压100 - 240 VAC电源频率47 - 63 Hz重量38.5 kg高度61 cm
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    厂商： 安捷伦科技(中国)有限公司
    品牌： 安捷伦/Agilent Technologies
    型号： ProteoAnalyzer 系统
    价格： 面议
  • 布鲁克ultrafleXtreme MALDI TOF/TOF质谱 400-860-5168转0230
    ultrafleXtremeTM MALDI-TOF/TOF充分体现了MALDI-TOF技术的巨大突破，开辟了其在科研和工业等领域的新应用。一系列新技术和专业软件的应用，使ultrafleXtreme的应用范围不仅超越了常规蛋白质组学研究，而且拓展到生物药品的深入解析、基于快速组织成像技术的生物标志物发现和糖蛋白质组学等多种研究领域。MALDI分子成像：来自技术引领者的完整分子组织学解决方案 从上至下(Top-Down)生物标志物发现全新的从下至上ImageID工作流程，即能对蛋白定位，又能鉴定蛋白，并且扩展到FFPE组织和大蛋白分析增强的数据采集速率和仪器稳定性，适合于大规模高通量研究分析。蛋白质组学和糖蛋白质组学：扩展研究领域的超强能力 一体化的液质联用和二维凝胶电泳工作流程标记和非标记的从上至下以及从下至上定量技术糖蛋白质组：GlycoQuestTM高通量自动分析蛋白糖链结构生物医药：MALDI-TOF技术直接确定完整蛋白分子量和蛋白序列 多价态分析，准确测定完整蛋白分子量信息量丰富的快速蛋白测序副产物及末端多样性分析聚乙二醇化蛋白的分析 糖蛋白分析 完全糖链分析解决方案确定混合样品中的N-糖肽通过糖肽在MALDI-TOF/TOF谱图中呈现的独具特征的MS/MS二级碎片离子谱峰，结合GlycoQuest自动化糖链数据库搜索，完美实现糖肽结构解析。
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    厂商： 布鲁克道尔顿(Bruker Daltonics)
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    型号： ultrafleXtreme
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    MassPREP糖蛋白分析包1、使用RapiGest SF表面活性剂优化蛋白质的去糖基化反应2、使样品操作最少化3、有效的脱盐／样品净化方法4、与MALDI质谱分析和其它糖苷分析技术兼容5、有助于分离2-AB标记糖苷糖基化(Glycosylation)是真核蛋白质最重要的翻译后修饰(PTM：post-translational modification)类型之一。执行有效的样品去糖基化和样品制备是成功进行高灵敏的糖苷分析的关键点。此外，对糖蛋白释放的2-AB标记糖苷进行制备和纯化也是成功分析的一个重要步骤。MassPREP糖蛋白分析包，提供简单而耐用的样品制备方法，且并不牺牲样品回收率。如下图所示，在使用了MassPREP糖蛋白分析包之后，未标记的糖苷或2-AB标记糖苷能够用MALDI-MS或配备荧光检测器的LC进行成功分析。对来自糖蛋白的组分进行样品制备获得纯化的2-AB标记糖苷对天然和2-AB标记IgG糖苷进行MALDI质谱分析所得的质量轮廓图MassPREP糖蛋白分析包及配件产品描述 规格/数量 部件号MassPREP糖蛋白分析包(包括：MassPREP HILIC uElution样品处理板、RapiGest SF，以及MassPREP MALDI Matrix DHB) — 186002817MassPREP HILIC μElution样品处理板 96孔板 186002780RapiGest SF 1mg样品瓶 186001860
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