巴戟天

为控制以巴戟天寡糖为主要成分的相关中药制剂的质量，对寡糖类成分的分析方法进行研究至关重要。目前对于糖类化合物的检测，多采用化学分析法、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法（ＧＣ）、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法（ＬＣ）及[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]）等方法。但是化学分析法中常用的糖类检测方法如斐林氏法、高锰酸钾法及硫酸-苯酚法等只能测定总还原糖，不能测定其他糖的含量。糖类物质本身不具有挥发性，若采用ＧＣ法则需要进行衍生化处理，操作较为复杂。由于糖类化合物的结构特殊，其在紫外区没有吸收或不产生荧光，这就给检测带来了很大的困难，只能采用示差折光检测器（ＲＩＤ）、蒸发光散射检测器（ＥＬＳＤ）、电雾式检测器（ＣＡＤ）等来进行检测。 对巴戟天寡糖进行含量测定时主要测定四至七聚糖的含量，采用的方法主要有高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]（ＨＰＬＣ）法和亲水作用色谱蒸发光散射检测器（ＨＩＬＩＣ-ＥＬＳＤ）联用法，且在对不同产地的巴戟天粉末进行含量测定时发现五聚糖的含量稳定且回收率较高。但是由于上述研究是以低聚糖四至七聚糖为对照品，操作步骤较为繁琐。因此，通过ＲＩＤ或ＥＬＳＤ，以含有乙腈的水溶液为流动相，采用ＨＰＬＣ法以五聚糖作为对照品来测定（外标法）巴戟天菊淀粉型三至九聚糖（巴戟天寡糖三至九聚糖）的含量，减少了对照品数量，缩短了测定时间且重复性好。 采用ＨＰＬＣ-ＥＬＳＤ法同时定性定量分析巴戟天中的３种寡糖（巴戟天寡糖四聚糖、巴戟天寡糖五聚糖、蔗果三糖），发现不同批次巴戟天药材中巴戟天寡糖五聚糖的含量最高，也从一定程度上说明了以五聚糖作为质量控制的标准可以更好地控制巴戟天药材及产品的质量。此外，使用ＨＰＬＣ-ＣＡＤ法同时测定巴戟天混合寡糖中６个寡糖单体含量。由于ＣＡＤ不依赖化合物的分子结构，所以能对大范围的化学结构和种类进行分析检测，其灵敏度较ＲＩＤ和ＥＬＳＤ高。采用超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联四级杆飞行时间质谱的方法，快速对巴戟天寡糖低聚糖类成分进行鉴别，这些研究为巴戟天寡糖类化合物质量标准的制定提供了新的研究思路。此外，采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]串联三重四极杆质谱仪（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]／ＭＳ）的方法，以格列苯脲为内标，选择ＥＳＩ电离源，在负离子模式下进行多反应检测，建立了在大鼠血浆体内的巴戟天寡糖五聚糖的含量测定方法，用于其后续在大鼠体内的药动学研究。结果表明，大鼠口服巴戟天寡糖（五聚糖）原液后在体内０-６８ｈ达到最大血药浓度，４ｈ后消失，无法进行准确定量；然而可能是由于其在胃内降解迅速，且在肠细胞单层的通透性较差，从而导致大鼠体内的口服生物利用度仅为０.５％。

[b][size=15px][color=#595959]巴戟天（MO）[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是一种中药，用于治疗[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]骨质疏松[/color][/size][size=15px][color=#595959]症[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。M13是一种基于MO的[b]蒽醌化合物[/b]，已知可抑制破骨细胞活性。然而，M13是否促进间[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]充质[/color][/size][size=15px][color=#595959]干细胞[/color][/size][size=15px][color=#595959]（MSCs）成骨分化[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]及其潜在机制仍不清楚。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]研究M13对MSCs增殖和成骨分化的影响，并阐明其潜在机制。[/color][/size][align=center] [/align][size=15px][color=#595959]通过CCK8测定、克隆形成测定、[b]免疫[/b]荧光、RT-q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]和Western blot评估M13暴露对MSCs增殖的影响。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]通过ALP和茜素红S染色、成骨相关基因（Runx2、Col1a1和Opn）表达和胎肢外植体培养，评估M13介导的体外和体外成骨作用。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]分子对接用于靶信号通路筛选。通过引入XAV939（[b]Wnt/β-catenin信号[/b]抑制剂），分析了M13促进MSCs成骨分化的潜在信号机制。 [/color][/size] [b][size=15px][color=#595959]M13对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化有明显的促进作用[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。M13处理增强了MSCs的生存能力和克隆数量。同时，M13促进骨髓间充质干细胞的成骨基因表达，增强ALP强度和茜素红S染色。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]在机制方面，M13与WNT信号复合物的对接位点强烈相互作用，从而激活WNT/β-catenin通路。此外，XAV939在体外和体外均部分抑制了M13介导的成骨作用，这证实了Wnt/β-catenin轴是M13诱导的MSCs成骨分化的关键调节因子。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][size=16px][/size][/color][/size][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]该研究首次阐明了[b]M13在体外通过刺激Wnt/β-catenin途径显著促进MSCs的成骨分化[/b]，为支持基于MO或M13的骨质疏松症治疗提供了新的证据。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]

现在我在做巴戟口服液的质量标准（提高）的制定，要求对其巴戟天和何首乌及其他一些成分进行鉴别。在实验过程中，我们遇到了一些问题：巴戟口服液【处方】 巴戟天 20g 何首乌 16g 杜仲 12g 肉苁蓉 8g 续断 10g 仙茅 6g 金樱子 20g 淫羊藿（叶）12g 覆盆子 10g 当归 8g 党参 4g 熟地黄 10g 枸杞子 8g 甘草 16g 黄芪 6g 狗脊 16g我们以以下方法对其进行鉴别：（1）取本品50ml，加石油醚（60-90℃）70ml,分次振摇提取，弃去石油醚液，加氯仿70ml,振摇提取，提取液浓缩至1ml,作为供试品溶液。另取巴戟天对照药材、何首乌对照药材各1g，分别加40%乙醇溶液20ml ,加热回流20分钟，放冷，滤过，滤液浓缩成稠膏，加水50ml使溶解，照供试品溶液，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60-90℃）-醋酸乙酯-甲醇（12：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，以氨蒸汽熏5分钟，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中 ，分别在与两种对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。在实验中，我们的阴性样品的制备是按照其产品的生产方法制备的，同时做的巴戟天和何首乌的双阴性对照，按2倍处方量进行制备。然后我们按照上述方法进行鉴别，但是其结果却有点不如意，其阴性中也出现与供试品和对照药材出现的巴戟天主斑点，且位置和颜色一致，即阴性干扰很明显。而何首乌的主斑点未出现。我们从以下几个方面进行了讨论：首先，考虑是阴性样品出现了问题，在阴性制备过程中，我们开始忽略了一个步骤（巴戟口服液【制法】 处方中的十六味，金樱子加水煎煮二次，第一次加水10倍量，第二次加水8倍量，每次两小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10-1.20（50℃），冷却，加等量乙醇，搅拌，静置24小时，滤过，滤液备用，其余巴戟天等十五味照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，以40%乙醇为溶剂，浸渍24小时后，进行渗漉，收集渗漉液600ml,与上述滤液合并，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.03(50℃),加蔗糖212.5g,煮沸使溶解，加水调整总量至1000ml,搅匀，滤过，灌封，灭菌，即得。）我们在制备阴性样品时，渗漉由于某些原因改为了温浸。这有可能是问题出现的一个地方。其次，我们考虑我们的操作问题，在整个过程中，前面基本上没有问题，后来考虑到薄层差异性很大，于是我们制了三张薄层板以作平行对照，其结果基本一致，分离效果相当好，就是巴戟天阴性有干扰。于是我们予以排除。再次，考虑到所用药品试液等出现问题，椐原始数据，所用的药品试液均合格，没有问题。予以排除。最后，考虑到其他药材中可能含有和巴戟天相同或相似结构的化学成分。但经过我们查阅相关资料后，没有发现其他药材中有类似或相同的成分（可能是资料有限，没有做得很好）。还有，我们考虑到有可能是原料药出现了问题，我们对其原料药也按药典作了一些鉴别，均合格。鉴于上述一些讨论，我们最后下结论是阴性样品出了问题，于是我们就按标准的方法从新制备阴性样品，本以为可以……可结果却依旧。 请大家给予理论和技术上的指导!谢谢了!