血嗜冷杆菌

p 　　卫生部临检中心组织的2018年第一次临床微生物室间质评已经结束，但关于流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的鉴定问题，在微信朋友圈里谈得正热烈 (见文《溶血 or 流感?傻傻分不清?》)[1]。主要是因为在这次质评中，生化鉴定仪和有些品牌的质谱仪的鉴定结果出错了。令小布自豪的是，布鲁克MALDI Biotyper质谱的鉴定结果与标准答案完全相符!所以小布在这里来一段点评。 /p p 　　流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌虽然同属，但属于两个不同的种，致病性和临床意义也大不相同，前者是上呼吸道感染的常见致病菌，而后者是上呼吸道的正常定植菌。小布认为要认真、仔细地把它们区分开，千万不要混淆! /p p 　　可是这两种菌的亲缘关系很近，用传统的形态学和生化方法难以区分。虽然产荚膜的流感嗜血杆菌可以通过荚膜肿胀实验区别于溶血嗜血杆菌，但有些流感嗜血杆菌是不产荚膜的，通常被认为是无法分型的。同样，虽然有的溶血嗜血杆菌能够通过卫星试验观察到溶血环，但不是所有的溶血嗜血杆菌都能观察到明显的溶血环。 /p p 　　难道就没有好办法了吗?当然不是! /p p 　　 span style=" color: rgb(31, 73, 125) " strong 质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的好方法 /strong /span /p p 　　早在2013年中国CDC的研究人员就通过质谱图的聚类分析，发现质谱可以把流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌清楚地分成两类，甚至可以把不同地区来源的菌株进一步细分(见图1)[2]。 /p p style=" text-align: center" strong img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/dfbc448c-6829-4363-bbc8-eb80e5161d6e.jpg" title=" 1.jpg" width=" 450" height=" 409" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 409px " / /strong /p p strong 　　▲图1. 流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的聚类分析树状图(MALDI Biotyper结果) /strong /p p 　　2014年荷兰公共卫生区域实验室、荷兰医学中心与布鲁克微生物研发中心共同发表了MALDI Biotyper能够正确鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的文章 [2]，专家们通过分析不同来源的277个菌株，发现质谱法与测序法鉴定流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的结果几乎完全一致(见表1)。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201805/insimg/5e7cf664-5cee-4464-b1b3-ac63e6d76a51.jpg" title=" 2.jpg" / /p p 　　 strong ▼表1.流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌的MALDI Biotyper质谱法与测序法鉴定结果比较 /strong /p p 　　另外，布鲁克公司在美国FDA注册进行临床试验的结果显示：通过对74个流感嗜血杆菌和31个溶血嗜血杆菌的检测MALDI Biotyper质谱法鉴定100%正确!(结果摘自布鲁克公司提交美国FDA的报告) /p p 　　可见，质谱是区分流感嗜血杆菌和溶血嗜血杆菌可以信赖的方法!有些老师不免心生疑问：既然布鲁克质谱的鉴定结果都是正确的，那为什么其它品牌的质谱鉴定错了呢? /p p 　　 strong span style=" color: rgb(31, 73, 125) " 质谱法的数据库和鉴定结果的算法非常重要 /span /strong /p p 　　原来呀，质谱鉴定微生物时，需要通过软件拿采集到的样品“蛋白指纹图”到数据库里进行逐个比对，因此，数据库建立与比对时所采用的理念与算法，以及数据库的容量，是影响鉴定结果非常重要的因素。 /p p 　　布鲁克MALDI Biotyper的建库理念是以菌株为单位，数据库中每个条目都是一个独立的菌株。它的比对算法是采用指纹识别中的“模式识别”算法，就是把样品的“蛋白指纹图”与数据库中所有菌株的“蛋白指纹图”快速自动地进行逐个图逐个峰的比较，看看每对比对的“蛋白指纹图”之间有哪些峰是匹配的，哪些峰是不匹配的，以及匹配的谱峰之间相对强度的相关性，从而得到一个综合的匹配分数，并根据分数值告诉我们鉴定的可信程度。 /p p 　　MALDI Biotyper的算法看上去通俗、简单，正可谓“大道至简”吧，不仅非常实用!而且最大程度上避免了误判!就像警察通过指纹比对来识别罪犯一样，只要数据库里有罪犯的指纹，它就能正确地识别出罪犯 即使数据库里没有罪犯的指纹，它也不会找错，只是告诉我们当前数据库里没有匹配的指纹，只要扩大搜索数据库的范围，定会让罪犯无以循形，不会造成冤假错案! /p p 　　有些老师可能会问：我们是做菌种鉴定，MALDI Biotyper的数据库为什么不以菌种为单位，而是以菌株为单位建立的呢?难道它能鉴定到菌株吗? /p p 　　大家知道，微生物种类繁多，每种微生物又包含丰富多样的不同菌株，而同一菌种内不同菌株之间的差异是天然存在的，并和微生物的种类有关，有的种内差异大，有的种内差异小。所以，布鲁克决定在菌株水平上建库，并在选择每个菌种的建库菌株时，尽可能包含差异大的菌株，而剔除差异小的菌株。MALDI Biotyper在菌株水平建库，具有以下优势： /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 给代表性菌株预留了充分的覆盖范围 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 　　避免了数据库不必要的冗余 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 　　容易实现数据库的扩充和更新 /span /p p span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 　　能快速适应分类学的改变 /span /p p 　　充分发挥了质谱技术分辨能力远远高于传统方法(如生 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " /span 化方法)的特点，不丢失种水平之内菌株之间的差异。 /p p 　　正是由于上述优势，美国CDC、加拿大国家微生物实验室和美国NIH等多家机构也在采用布鲁克的仪器和理念建立数据库并对外开放。 /p p 　　通过以上对布鲁克MALDI Biotyper质谱的数据库与软件算法的简单介绍，相信各位老师就能理解为什么这次卫生部的质评中，布鲁克质谱的鉴定结果是正确的，也就很好理解为什么美国FDA批准Bruker MALDI Biotyper CA系统作为首个鉴定新型致病菌耳念珠菌(C. auris) 的新方法了[4-6]。 /p p 　　参考文献 /p p 　　1. 溶血 or 流感?傻傻分不清? /p p 　　2. B. Q. Zhu, D Xiao et al. MALDI-TOF MS Distinctly Differentiates Nontypable Haemophilus influenzae from Haemophilus haemolyticus.PLoS One. 2013 8(2): e56139 /p p 　　3. J. P. Bruin, M. Kostrzewa et al. Identification of Haemophilus influenzae and Haemophilus haemolyticus by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2014, 33:279–284 /p p 　　4. https://www.fda.gov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm605336.htm /p p 　　5. FDA首次批准质谱方法鉴定新型致病菌耳念珠菌 (Candida auris) /p p 　　6. “布”下天罗地网，防止“耳念”侵袭 /p

据中国新闻网报道，针对近日连发的肉毒杆菌中毒案件，台“卫生署”初步怀疑可能是真空即食豆制品惹祸。对此，台“卫生署”今日表示：根据调查，全台仅有3家厂商符合灭菌标准，可以在常温下贩售，提醒民众购买时要小心。 　　针对“真空包装即食豆干”可引发肉毒杆菌中毒的说法，“卫生署食品药物管理局食品组组长”蔡淑贞表示，经“食品工业发展研究所”调查市售的真空包豆干发现，真正符合灭菌标准，且可以在常温下贩售的产品，只有3家：得意中华食品有限公司、福记冷冻食品公司、大房食品有限公司。对台湾市场上，不符合灭菌标准，也无法达到冷藏条件的生产者，建议暂时不要大规模生产真空包装的黄豆制品。同时，蔡淑贞还表示，为确保民众健康，“卫生署”将订定《真空包装即食食品良好卫生规范》，最快下个星期发布公告，若20天后，各界对该规范无异议表示，公告后3个月后，最快11月便可实施。 　　消息传来，网友不禁要问，在传统认知里，真空包装不就是无菌抑菌的代名词吗?对此，专家解释：一般消费大众认为的“真空”即代表“无菌”、开封后立即食用的“绝对安全”，并不完全正确。 　　有些真空包装的食品，入卤豆干、卤素肚等，因为具有低酸性(酸碱值高于4.6)、高水活性的特性，如果在不符合食品良好卫生规范环境下，生产制造过程受到肉毒杆菌的污染时，真空包装的无氧条件，便成为肉毒杆菌适合生长的“温床”。 　　据了解，肉毒杆菌的理想生长温度在摄氏35至40度或28至30度之间。因此，单凭冷藏这项措施不能有效消除容易腐坏的密封包装食物的肉毒杆菌风险。肉毒杆菌，作为毒性极强的神经毒素，极小量便已足以引致肉毒中毒。食用者在进食毒素后约18至36小时内，产生疲倦、虚弱无力、眩晕、视力模糊、言语障碍和吞咽困难等症状，严重者可令患者的呼吸肌肉瘫痪，引致死亡。作为美容中常见的“瘦脸针”便是以肉毒杆菌的医疗使用。但肉毒杆菌也不是不可预防的，当食物加热至摄氏80度并维持至少10分钟，就可破坏这种毒素。在治疗方面，应尽快注射肉毒中毒抗毒素，也可影响肉毒杆菌的发病。 　　对于食品中肉毒杆菌的卫生规定，国家标准中规定：为防止肉毒杆菌生长或毒素形成，真空包装食品，在包装前必须把食物加热至摄氏90度，并维持10分钟，或进行其他可同样有效杀死肉毒杆菌的加热程序 提高食品含盐量，并将食物的酸碱度保持在5或以下 降低食物的水活性至0.97或更低水平 使用适当分量的防腐剂，例如亚硝酸盐等。 　　在此，国家标准频道要提醒众位消费者，请谨慎食用真空包装的食品，一定要注意购买保质期内的真空包装食品。购买后，必须依标识采用冷藏或冷冻，且食用前必须煮沸(100℃加热10分钟以上)。为了家人的身体健康，请一定要在保存期限内食用。如果出现不适症状，请及时就医。

国家卫健委日前发布2020年第9号公告，其中“马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种”乳杆菌被列为新食品原料。据悉，这是天津科技大学王艳萍教授科研攻关的成果，是我国首次分离得到、全球首株完成全基因组测序、具有自主知识产权的新乳杆菌，对酸奶及益生菌等发酵食品升级品质、改善口感、清洁标签等将起到提升作用。　　原料天然化、黏稠度和细腻口感是酸奶品质的高地。在欧洲，酸奶生产商通常使用特殊功能的乳酸菌来提高酸奶质地的“黏性”，同时，许多国家禁止在发酵乳中添加增稠剂、稳定剂，对天然酸奶的追求已成为未来市场趋势。　　酸奶等益生菌发酵食品以其较高的营养价值和容易被人体吸收等特点受到人们青睐，我国每年包括酸奶在内的益生菌类食品市场都保持了两位数的增长，高品质酸奶成为乳品新消费需求。“挖掘中国微生物宝库资源，研发胞外多糖乳杆菌，解决酸奶不添加增稠剂而获得味蕾舒适的黏性及口感，使中国益生菌食品行业与国际接轨，助推产业优质化发展。”王艳萍把酸奶新型乳杆菌目标定位为对胞外多糖乳酸菌的研究和开发，利用微生物的筛选技术，获得高产胞外多糖的乳酸菌，通过对其产糖分子机制的研究，最终发现了马奶酒样乳杆菌ZW3胞外多糖合成的途径及其关键基因的作用。　　经过近20年科学研究，在4次国家自然基金及多项省部级科研基金支持下，研发获得成功，在国内外学术期刊上发表文章论文30余篇。王艳萍通过收集、分离、功能确认菌株，到菌粉生产工艺、菌粉的稳定性、菌粉产品应用等一系列研究，对ZW3菌株高产胞外多糖的分子学机制、结构、性能及功能等方面进行了全面深入的研究，为该菌株在发酵食品、乳品、功能性食品、保健食品、化妆品以及微生态药物等领域的广泛应用奠定了坚实的基础。　　马奶酒样乳杆菌ZW3是全球研究最深入和最全面、首株完成全基因组测序的马乳酒样乳杆菌，通过其自身代谢产物实现酸奶黏度增稠，可以避免因添加增稠剂和稳定剂影响发酵乳制品的口感及质量，使酸奶更美味和优质。　　王艳萍介绍，乳酸菌胞外多糖具有独特的物理学和流变学特性以及公认的食用安全性，是天然的生物增稠剂，可以替代目前正在应用的、来源于非食品级细菌的稳定剂或增稠剂，在发酵乳品加工中具有重要用途，能提高干酪得率、降低酸奶凝胶脱水收缩现象，解决酸奶生产中常出现的凝胶易断裂、黏稠度低、乳清易析出等质量问题。　　据该菌种申报单位诺佰克（武汉）生物科技有限公司的专家介绍，该乳杆菌是具有优异食品加工性能与调节肠道、精神健康等多种益生功能于一体的多功能菌株，有高产胞外多糖的特性，在食品中应用能减少稳定剂、增稠剂的使用，打造清洁标签，升级产品；可去除或减少发酵过程中产生的亚硝酸盐，提高产品安全性；还在调节肠道健康、提高免疫、抗氧化等方面具有多种功能。许多乳品行业专家都认为此乳杆菌是“小菌种，大作为”。