人间皮瘤细胞

Invitrogen™ Attune™ CytPix™ 成像型流式细胞仪Attune CytPix是在Attune NxT流式细胞仪的基础上增加了明场成像功能，既保留了传统流式高速、高参数、大数据分析的优势，又增加了明场观察细胞形态、活性等信息，在生命科学研究、细胞治疗和生物技术开发等领域都有广泛的应用前景。其主要技术优势有： 声波聚焦技术，上样速度比传统流式细胞仪快10倍 高速成像功能，6000张图片/秒 专利抗堵设计，大细胞、黏细胞轻松上样 可达4激光16个参数，配置灵活，可现场升级 具备细胞绝对计数功能，同时可配置流式自动化工作站

Quasi Vivo 系统有 3 个不同的腔室可用，每个腔室都旨在满足特定应用的需求。允许浸没式细胞培养，而模块化特性允许互连细胞共培养。与市售的 transwells 和插入物兼容，使用户能够在气液界面培养细胞并创建液/液屏障模型。由标准多孔板占地面积上的 6 个腔室组成，由几乎没有或没有非特异性结合的材料制成。查看 QV500 颠覆传统细胞培养方式，灌流培养系统呼吸道上皮细胞的气液界面培养是研究经空气传播的病原体，如SARS等的常用的模型。传统的培养方式是用TransWell在普通培养箱中静置培养。但是此种培养方式无法模拟培养过程中营养物质和代谢废物在组织内的运输，培养得到的模型通常有各种各样的缺陷，并且所需实验周期较长。呼吸道上皮细胞的常规transwell静止培养方式Quais Vivo（QV600）灌流培养系统（腔室+储液瓶+底座+管道+泵等）而灌流培养系统可为细胞培养提供持久恒定的流动培养环境，最大限度模拟体内环境。研究发现，使用系统进行灌流培养与静态培养相比，气液界面培养的呼吸道上皮细胞（正常人气管上皮细胞 Normal Human BronchialEpithelial Cells，简称NHBE；小气道上皮细胞 Small Airway EpithelialCells，简称SAE），发育分化速度更快，表现为纤毛分化度更高，纤毛运动更强、粘液产生和屏障功能更强。在灌注下加速分化后，将上皮细胞转移到静态条件下，并添加抗原呈递细胞（APC）以研究其在病原体感染后的功能。（ChandorkarP, et al., Fast-track development of an in vitro3D lung/immune cell model to studyAspergillus infections. Sci Rep. 2017 7(1):11644. doi:10.1038/s4-4.）01、人体内所有的细胞都需要营养物质和代谢废物的流动 02、肺部气管/支气管和小气道上皮结构精细，进行体外培养模拟体内环境，对呼吸道病原体的研究至关重要 03、采用全新的灌流培养方式培养呼吸道上皮细胞（采用QV600）相比使用transwell静止培养（StaticConditions),此灌流培养系统（PerfusedConditions）中，呼吸道上皮细胞的生长和分化呈现更好状态04、电镜照片显示，采用灌流培养方式（Perfusedconditions）的呼吸道上皮细胞，分化程度更高 05、使用MUC5B染色可以发现，采用灌流培养方式（Perfusedconditions）的呼吸道上皮细胞，在培养的第7天即可分泌大量粘液。染色可以发现，细胞间的紧密连接发育更完善06、使用WGA染色发现，采用灌流培养方式（Perfusedconditions）的呼吸道上皮细胞，纤毛分化度更高 07、测量TEER（经细胞电阻），采用灌流培养方式（Perfusedconditions）的呼吸道上皮细胞TEER值更大，代表得到的上皮细胞膜状结构更完整Quasi Vivo全球应用全球使用Kirkstall公司灌流培养系统的学术及研究机构已达70+个，遍布美国、英国、法国、瑞典、奥地利、意大利、荷兰、瑞士、日本等。目前灌流培养系统已成功用于以下器官模型的培养：1.呼吸系统（培养热点）2. 肝脏3. 肾脏4.心血管5.成纤维细胞6.糖尿病模型7.血脑屏障8.脑组织类器官一、不同细胞，型号怎么选？01、单一细胞QV500：所有腔室培养相同的细胞。02、细胞共培养QV600：每个腔室培养2种或以上细胞。QV900：使管路上游的细胞培养基成为下游细胞的条件培养基。流动培养形成含血管的3D心脏组织 | 再生医学在再生医学领域，怎样培养出含血管的组织，是未来应用能否成功的关键之一。早期的临床试验采用生长因子或细胞注射的方法来修补损伤的心脏，但由于注射细胞造成的炎症反应和局部缺血会在体内造成低氧环境，使得注射的细胞定植率低而死亡率高，不能有效地修复损伤的心脏功能。Quasi VivoQV500流动培养系统为接种在明胶支架上的人间充质干细胞（hMSCs）和人心肌祖细胞（hCMPC）提供充足的氧气，促进细胞和营养物质向支架核心内扩散，并能快速有效地排除组织内的代谢废物，促进血管生成，从而形成由血管样和心脏样细胞组成的组织结构密集的适于体内移植的原组织。（PagliariS, et al. A multistep procedure to prepare pre-vascularized cardiactissue constructs using adult stem cells, dynamic cell cultures,and porous scaffolds. Frontiers in Physiology. 2014 5:210）流动培养系统(QV500型)的蠕动泵将培养基从储液瓶泵到两个串联的培养腔室内，并能保持恒定流速（200μl/min），保证多孔明胶支架内层的培养基流动。构建含血管的3D心脏的实验方案示意图。明胶多孔支架被浸入稀释的Matrigel中，然后转移至内皮分化培养基中。之后将人间充质干细胞接种在支架上，使人间充质干细胞定植在支架培养上并向内皮进行分化，96小时后，将在聚苯乙烯细胞培养板用心脏分化培养基预先定型2周的心脏TNT-GFP人心肌祖细胞接种于血管化的支架上，用QV500流动培养系统在心脏分化培养基中培养7天。采用上述实验方案，对用QV500培养一周后的共培养结构进行检测，发现在支架上有大量细胞定殖。 QV500流动培养条件下支架内部浸润了大量的血管样细胞（红色）和人心肌前体细胞（hCMPC）衍生的心肌细胞（绿色），而静态培养条件下，细胞大部分分布在支架表面。免疫组化结果显示通过QV500动态培养可以促进心肌样细胞（GFP，绿色）和内皮样细胞（VCAM-1阳性细胞，红色）向支架内部浸润。 (A)切片显示QV500流动培养的内皮样细胞（VCAM-1阳性细胞，红色）排列成孔状，形成管状结构，并与心肌样细胞（GFP，绿色）接触。 （B）QV500流动培养条件下，支架内广泛的细胞分布导致形成密集组装的多细胞组织，该组织衍生自所用的人间充质干细胞（hMSCs）和人心肌前体细胞（hCMPC）。总结：在本文中使用的QV500流动培养系统，能增强氧气与营养物质的运输，进而增强工程化心血管组织的活性和功能。与众不同的流动培养系统，让日、美、英、法、瑞士、瑞典等全球70多个研究机构获得了更强大的细胞培养工具，在包括呼吸系统、心血管系统、肝脏、肾脏、肠道、脑组织类器官，以及糖尿病的研究上更进一步。流动培养实现血脑屏障三种细胞共培养 | 阿尔茨海默病新模型血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)在中枢神经系统（CNS）的生理和病理中都起着重要的作用。血脑屏障功能异常会引起包括阿尔茨海默症(AD)等许多神经退行性疾病。组成血脑屏障的毛细血管内皮细胞（capillaryendothelialcells）、周细胞（pericytes）以及星形胶质细胞（astrocytes）间的复杂的相互作用使得很难在体内确定这三种细胞对神经毒性各自的贡献。而流动培养系统可为体外培养这三种细胞提供在不形成屏障的情况下维持细胞间通讯的最佳培养环境。流动培养系统为未来研究不同类型的血脑屏障细胞在中枢神经系统疾病和细胞毒性试验中的特殊作用提供一个有价值的工具。（Miranda-AzpiazuP, et al. A novel dynamic multicellular co-culture system forstudying individual blood-brain barrier cell types in braindiseases and cytotoxicity testing. Sci Rep. 2018 8(1):1-10.）图 1.单独培养的人星形胶质细胞（A，GFAP阳性）、周细胞（B，α-actin阳性）、血管内皮细胞（C，CD31阳性）以及血管内皮细胞形成的紧密连接（D，ZO1阳性）。图 2用QV500培养共享相同的培养基的星形胶质细胞、周细胞和血管内皮细胞的示意图（A），R为储液瓶，P为蠕动泵。连接培养基存储瓶的一个QV500流动培养系统的细胞培养腔室（B）。图 3 QV500流动培养系统建立的能同时培养三种不同细胞的多细胞共培养体系。图4几种流动培养方式示意图：A图为单独星形角质细胞流动培养，B图为单独周细胞流动培养，C图为单独血管内皮细胞流动培养，D图为三种细胞组合后一起流动培养。图5用MTT法测细胞活力，与静态培养相比，采用QV500流动培养系统对单独培养血管内皮细胞（HBECs）、周细胞（HBVPs）、星形角质细胞（HAs）（A）或三种细胞共培养（B）的血管内皮细胞的细胞活力有明显升高。图6用MTT法测细胞活力，与静态培养（Static）相比，流动培养（Dynamic）的周细胞（HBVPs）会更早受到Aβ25-35（淀粉样蛋白β肽的Aβ25-35片段，用于阿尔茨海默病的造模）的毒害。总结：本文中研究者利用QV500流动培养系统建立了三种细胞的共培养。这些细胞不接触，通过共享培养基实现细胞间的通信，不形成屏障能更好的研究这些细胞类型单独对不同化合物的响应情况。并且研究者还发现共享相同培养基的星形胶质细胞、周细胞和血管内皮细胞的最适流速为50µ l/min。作为创新的细胞培养方法，Quasi Vivo流动培养已经全球70余家zhuanye机构使用验证，获得了令人侧目的培养效果，在美、英、法、日等多国开展了颇具新意的细胞研究，涉及呼吸系统、肝脏、肾脏、心血管、成纤维细胞、糖尿病模型、脑组织类器官等。

Quasi Vivo 系统有 3 个不同的腔室可用，每个腔室都旨在满足特定应用的需求。允许浸没式细胞培养，而模块化特性允许互连细胞共培养。与市售的 transwells 和插入物兼容，使用户能够在气液界面培养细胞并创建液/液屏障模型。由标准多孔板占地面积上的 6 个腔室组成，由几乎没有或没有非特异性结合的材料制成。查看 QV500‍‍‍‍‍颠覆传统细胞培养方式，灌流培养系统呼吸道上皮细胞的气液界面培养是研究经空气传播的病原体，如SARS等的常用的模型。传统的培养方式是用TransWell在普通培养箱中静置培养。但是此种培养方式无法模拟培养过程中营养物质和代谢废物在组织内的运输，培养得到的模型通常有各种各样的缺陷，并且所需实验周期较长。呼吸道上皮细胞的常规transwell静止培养方式Quais Vivo（QV600）灌流培养系统（腔室+储液瓶+底座+管道+泵等）而灌流培养系统可为细胞培养提供持久恒定的流动培养环境，最大限度模拟体内环境。研究发现，使用系统进行灌流培养与静态培养相比，气液界面培养的呼吸道上皮细胞（正常人气管上皮细胞 Normal Human BronchialEpithelial Cells，简称NHBE；小气道上皮细胞 Small Airway EpithelialCells，简称SAE），发育分化速度更快，表现为纤毛分化度更高，纤毛运动更强、粘液产生和屏障功能更强。在灌注下加速分化后，将上皮细胞转移到静态条件下，并添加抗原呈递细胞（APC）以研究其在病原体感染后的功能。（ChandorkarP, et al., Fast-track development of an in vitro3D lung/immune cell model to studyAspergillus infections. Sci Rep. 2017 7(1):11644. doi:10.1038/s4-4.）01、人体内所有的细胞都需要营养物质和代谢废物的流动 02、肺部气管/支气管和小气道上皮结构精细，进行体外培养模拟体内环境，对呼吸道病原体的研究至关重要 03、采用全新的灌流培养方式培养呼吸道上皮细胞（采用QV600）相比使用transwell静止培养（StaticConditions),此灌流培养系统（PerfusedConditions）中，呼吸道上皮细胞的生长和分化呈现更好状态04、电镜照片显示，采用灌流培养方式（Perfusedconditions）的呼吸道上皮细胞，分化程度更高 05、使用MUC5B染色可以发现，采用灌流培养方式（Perfusedconditions）的呼吸道上皮细胞，在培养的第7天即可分泌大量粘液。染色可以发现，细胞间的紧密连接发育更完善06、使用WGA染色发现，采用灌流培养方式（Perfusedconditions）的呼吸道上皮细胞，纤毛分化度更高 07、测量TEER（经细胞电阻），采用灌流培养方式（Perfusedconditions）的呼吸道上皮细胞TEER值更大，代表得到的上皮细胞膜状结构更完整Quasi Vivo全球应用全球使用Kirkstall公司灌流培养系统的学术及研究机构已达70+个，遍布美国、英国、法国、瑞典、奥地利、意大利、荷兰、瑞士、日本等。目前灌流培养系统已成功用于以下器官模型的培养：1.呼吸系统（培养热点）2. 肝脏3. 肾脏4.心血管5.成纤维细胞6.糖尿病模型7.血脑屏障8.脑组织类器官一、不同细胞，型号怎么选？01、单一细胞QV500：所有腔室培养相同的细胞。02、细胞共培养QV600：每个腔室培养2种或以上细胞。QV900：使管路上游的细胞培养基成为下游细胞的条件培养基。流动培养形成含血管的3D心脏组织 | 再生医学在再生医学领域，怎样培养出含血管的组织，是未来应用能否成功的关键之一。早期的临床试验采用生长因子或细胞注射的方法来修补损伤的心脏，但由于注射细胞造成的炎症反应和局部缺血会在体内造成低氧环境，使得注射的细胞定植率低而死亡率高，不能有效地修复损伤的心脏功能。Quasi VivoQV500流动培养系统为接种在明胶支架上的人间充质干细胞（hMSCs）和人心肌祖细胞（hCMPC）提供充足的氧气，促进细胞和营养物质向支架核心内扩散，并能快速有效地排除组织内的代谢废物，促进血管生成，从而形成由血管样和心脏样细胞组成的组织结构密集的适于体内移植的原组织。（PagliariS, et al. A multistep procedure to prepare pre-vascularized cardiactissue constructs using adult stem cells, dynamic cell cultures,and porous scaffolds. Frontiers in Physiology. 2014 5:210）流动培养系统(QV500型)的蠕动泵将培养基从储液瓶泵到两个串联的培养腔室内，并能保持恒定流速（200μl/min），保证多孔明胶支架内层的培养基流动。构建含血管的3D心脏的实验方案示意图。明胶多孔支架被浸入稀释的Matrigel中，然后转移至内皮分化培养基中。之后将人间充质干细胞接种在支架上，使人间充质干细胞定植在支架培养上并向内皮进行分化，96小时后，将在聚苯乙烯细胞培养板用心脏分化培养基预先定型2周的心脏TNT-GFP人心肌祖细胞接种于血管化的支架上，用QV500流动培养系统在心脏分化培养基中培养7天。采用上述实验方案，对用QV500培养一周后的共培养结构进行检测，发现在支架上有大量细胞定殖。 QV500流动培养条件下支架内部浸润了大量的血管样细胞（红色）和人心肌前体细胞（hCMPC）衍生的心肌细胞（绿色），而静态培养条件下，细胞大部分分布在支架表面。免疫组化结果显示通过QV500动态培养可以促进心肌样细胞（GFP，绿色）和内皮样细胞（VCAM-1阳性细胞，红色）向支架内部浸润。 (A)切片显示QV500流动培养的内皮样细胞（VCAM-1阳性细胞，红色）排列成孔状，形成管状结构，并与心肌样细胞（GFP，绿色）接触。 （B）QV500流动培养条件下，支架内广泛的细胞分布导致形成密集组装的多细胞组织，该组织衍生自所用的人间充质干细胞（hMSCs）和人心肌前体细胞（hCMPC）。总结：在本文中使用的QV500流动培养系统，能增强氧气与营养物质的运输，进而增强工程化心血管组织的活性和功能。与众不同的流动培养系统，让日、美、英、法、瑞士、瑞典等全球70多个研究机构获得了更强大的细胞培养工具，在包括呼吸系统、心血管系统、肝脏、肾脏、肠道、脑组织类器官，以及糖尿病的研究上更进一步。流动培养实现血脑屏障三种细胞共培养 | 阿尔茨海默病新模型血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)在中枢神经系统（CNS）的生理和病理中都起着重要的作用。血脑屏障功能异常会引起包括阿尔茨海默症(AD)等许多神经退行性疾病。组成血脑屏障的毛细血管内皮细胞（capillaryendothelialcells）、周细胞（pericytes）以及星形胶质细胞（astrocytes）间的复杂的相互作用使得很难在体内确定这三种细胞对神经毒性各自的贡献。而流动培养系统可为体外培养这三种细胞提供在不形成屏障的情况下维持细胞间通讯的最佳培养环境。流动培养系统为未来研究不同类型的血脑屏障细胞在中枢神经系统疾病和细胞毒性试验中的特殊作用提供一个有价值的工具。（Miranda-AzpiazuP, et al. A novel dynamic multicellular co-culture system forstudying individual blood-brain barrier cell types in braindiseases and cytotoxicity testing. Sci Rep. 2018 8(1):1-10.）图 1.单独培养的人星形胶质细胞（A，GFAP阳性）、周细胞（B，α-actin阳性）、血管内皮细胞（C，CD31阳性）以及血管内皮细胞形成的紧密连接（D，ZO1阳性）。图 2用QV500培养共享相同的培养基的星形胶质细胞、周细胞和血管内皮细胞的示意图（A），R为储液瓶，P为蠕动泵。连接培养基存储瓶的一个QV500流动培养系统的细胞培养腔室（B）。图 3 QV500流动培养系统建立的能同时培养三种不同细胞的多细胞共培养体系。图4几种流动培养方式示意图：A图为单独星形角质细胞流动培养，B图为单独周细胞流动培养，C图为单独血管内皮细胞流动培养，D图为三种细胞组合后一起流动培养。图5用MTT法测细胞活力，与静态培养相比，采用QV500流动培养系统对单独培养血管内皮细胞（HBECs）、周细胞（HBVPs）、星形角质细胞（HAs）（A）或三种细胞共培养（B）的血管内皮细胞的细胞活力有明显升高。图6用MTT法测细胞活力，与静态培养（Static）相比，流动培养（Dynamic）的周细胞（HBVPs）会更早受到Aβ25-35（淀粉样蛋白β肽的Aβ25-35片段，用于阿尔茨海默病的造模）的毒害。总结：本文中研究者利用QV500流动培养系统建立了三种细胞的共培养。这些细胞不接触，通过共享培养基实现细胞间的通信，不形成屏障能更好的研究这些细胞类型单独对不同化合物的响应情况。并且研究者还发现共享相同培养基的星形胶质细胞、周细胞和血管内皮细胞的最适流速为50µl/min。作为创新的细胞培养方法，Quasi Vivo流动培养已经全球70余家zhuanye机构使用验证，获得了令人侧目的培养效果，在美、英、法、日等多国开展了颇具新意的细胞研究，涉及呼吸系统、肝脏、肾脏、心血管、成纤维细胞、糖尿病模型、脑组织类器官等。