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使用MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱检测调味料油辣椒中的苏丹红I实验目的 采用《GBT 19681-2005 食品中苏丹红染料的检验方法 高效液相色谱法》,适用于食品中苏丹红染料的检测。样品经溶剂提取、固相萃取净化后,用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析,采用外标法定量。国标中提及氧化铝层析柱需自制,中性氧化铝105℃干燥 2h,于干燥器中冷至室温,每100g 中加入2mL 水降活,混匀后密封,放置12h 后使用。活度的调整采用标准溶液过柱,将1ug/mL 的苏丹红的混合标准溶液1mL 加到柱中,用5%丙酮正己烷溶液60mL 完全洗脱为准,4 种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ,可根据每种苏丹红的回收率作出判断。苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低表明氧化铝活性偏低,苏丹红Ⅲ的回收率偏低时表明活性偏高。操作相当繁琐,我们运用安谱公司MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱处理,洗脱液浓缩定容后经0.22微米滤头后,进行液相色谱分析。1. 仪器设备高效液相色谱仪(岛津LC-20A),荧光检测器(岛津RF-20A),色谱柱(Inertsustain- C18 250mm*4.6mm/5um),MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱(CNW)2. 试剂丙酮(分析纯);正己烷(色谱纯);甲醇(色谱纯);无水硫酸钠3. 分析步骤称取试样10.0g于离心管中,向离心管中加入10ml水再加入30ml正己烷,高速均质5min, 3000r/min,离心10min,(在离心过程中若取样量加大,可使用100mL离心管)吸出正己烷层,过无水硫酸钠至鸡心瓶中,再向离心管中加入20ml*2正己烷,高速均质、离心,合并正己烷层,无水硫酸钠过滤到鸡心瓶中,最后氮吹蒸发干在保持5min,用5mL正己烷溶解残渣。SPE柱先活化:先用5ml二氯甲烷,再用5ml正己烷,进行活化。上样:样液到小柱子里面,用2ml正己烷润洗鸡心瓶倒入小柱子淋洗:用5ml正己烷淋洗小柱子洗脱:用5ml二氯甲烷,并收集洗脱液浓缩定容:40℃氮吹干,用1ml乙腈定容,超声1min,漩涡20s,过0.22um的膜,上机。http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif4.仪器条件4.1色谱柱: C18 250mm*4.6mm/5um (或相当型号色谱柱)4.2流动相: 溶剂 A 0.1%甲酸的水溶液:乙腈 = 85:15 溶剂 B 0.1%甲酸的乙腈溶液:丙酮=80:204.3梯度洗脱(梯度见图1):流速:1mL/min 柱温:30℃4.4检测波长:苏丹红Ⅰ 478nm 13min后波长变成520nmhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif图1 梯度5. 结果分析样品中苏丹红的测定 按照上述方法进行苏丹红标液0.2mg/L检测,见图2,样品中苏丹红的色谱图如图3所示,未检出,基线波动较小,同时做了苏丹红I单标定性、苏丹红I加标实验,见图4、5,保留时间11.3min,并无杂质干扰。加标浓度为5.0mg/L,加标回收率为91.48%。http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif 图2 0.02mg/L苏丹红标液的色谱图http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif 图3 样品苏丹红的色谱图http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif图4苏丹红I单标的色谱图http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif图5苏丹红I加标的色谱图3. 结论本试验利用MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱类似分子印迹技术吸附苏丹红,使用溶剂少,建立了一种快速,高效,可靠的检测技术。具有较高回收率,可达91.48%,适用食品苏丹红的检测。但后期做了基质更为复杂的辣椒酱,测其苏丹红,出现杂峰较多,造成基线不够平稳,淋洗液可尝试改为用3% 异丙醇-正己烷溶液淋洗,希望安谱公司进一步解决。
食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法1 范围本标准适用于食品中苏丹红染料的检测。本标准规定了食品中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ的高效液相测定方法。方法最低检测限:苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ均为10ug/kg.2 术语和定义2.1 苏丹红属偶氮系列化工合成染料。3 方法要点样品经溶剂提取、固相萃取净化后,用反相高效液相色谱——紫外可见光检测器进行分析,采用外标法定量。4 试剂与标准品4.1 乙腈色谱纯4.2 丙酮 色谱纯、分析纯4.3 甲酸 分析纯4.4 乙醚 分析纯4.5 正己烷 分析纯4.6 无水硫酸钠 分析纯4.7 层析柱管:1cm(内径)×5cm(高)的注射器管。4.8 层析用氧化铝(中性100目~200目):105℃干燥2h,与干燥器中冷至室温,每100g中加入2mL水降活,混匀后密封,放置12h后使用。 注:不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异,须根据具体购置的氧化铝产品略做调整,活度的调整采用标准溶液过柱,将1ug/mL的苏丹红的混合标准溶液1mL加到柱中,用5%丙酮正己烷溶液60mL完全洗脱为准,4种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ,可根据每种苏丹红的回收率作出判断。苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低表明氧化铝活性偏低,苏丹红Ⅲ的回收率偏低时表明活性偏高。4.9 氧化铝层析柱:在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉,干法装入处理过的氧化铝至3cm高,轻敲实后加一薄层脱脂棉,用10mL正己烷预淋洗,洗净柱中杂质后,备用。4.10 5%丙酮的正己烷液:吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。4.11 标准物质:苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏丹红;纯度≧95%/4.12 标准储备液:分别称取苏丹红、苏丹红、苏丹红及苏丹红各10mg(按实际含量折算),用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。4 仪器与设备5.1高效液相色谱仪5.2分析天平5.3旋转蒸发仪[
一、案例2005年2月18日,英国最大的食品制造商第一食品公司生产的沙司中发现了被欧盟禁用的“苏丹红一号’’色素。而这些沙司又卖给了大量食品厂商和超市卖场。从此,苏丹红成为全世界食品安全问题的代名词。苏丹红事件已过去几年了,但随后与苏丹红相关联的食品安全事件还时有发生,如红心鸭蛋等,有效的预防措施是随时进行检查,将可能受到苏丹红污染的食品杜绝在人们的消费前,才能保证食品消费的安全。二、选用的国家标准GB/T 1968l一2005食品中苏丹红染料的检测方法——高效液相色谱法。三、测定方法1.样品处理(1)粉状样品(如辣椒粉等) 准确称取样品1.000~5.000g于锥形瓶中,加入10~30mL正己烷,超声过滤5min,再用10mL正己烷洗涤残渣数次,至洗出液无色,合并正己烷液,用旋转蒸发仪浓缩至5mL以下,慢慢加入氧化铝色谱柱中(氧化铝色谱柱的制备方法:在色谱柱管底部塞入一薄层脱脂棉,干法装入处理过的氧化铝3cm高,轻敲实后加一薄层脱脂棉,用10mL正己烷预淋洗,洗净柱中杂质后,备用),为保证层析效果,在柱中保持正己烷液面为2ram左右时上样,在层析过程中保持柱的湿润,用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶,一并注入色谱柱;控制氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于O.5cm,待样液完全流出后,视样品中含油类杂质的多少用10~30ml。正己烷洗柱,直至流出液无色,弃去全部正己烷淋洗液,用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脱,收集、浓缩后,用丙酮转移并定容至5mL,经0.45μm有机滤膜过滤后待测。(2)油状样品(如红辣椒油、火锅料、奶油等)称取0.500~2.000g样品于小烧杯中,加入适量正己烷溶解(1~10mL),难溶解的样品可于正己烷中加温溶解,其余同上操作。(3)含水量较多的样品(如辣椒酱、番茄沙司等) 称取10.00~20.00g样品于离心管中,加10~20mL水将其分散成糊状,含增稠剂的样品多加水,加入30mL正己烷:丙酮(3:1),匀浆5min,3000r/min离心10min,吸出正己烷层,下层再分别用20mL正己烷匀浆两次,离心后合并3次正己烷,加入5g无水硫酸钠脱水,过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5min,用5ml,正己烷溶解残渣后,其余同上操作。(4)肉制品(如香肠等) 称取粉碎样品10.00~20.00g于锥形瓶中,加入60mL正己烷充分匀浆5min,滤出清液,再分别用20mL正己烷匀浆两次,过滤后合并3次滤液,加入5g无水硫酸钠脱水,过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5ml。以下,其余同上操作。2.样品测定(1)色谱条件①色谱柱:ZorbaxSB—C18 3.5μm,4.6mm×150mm(或相当型号的色谱柱)。②流动相:溶剂A(0.1%甲酸的水溶液:乙腈===85:15);溶剂B(O.1%甲酸的乙腈溶液:丙酮一80:20)。③流速:1mL/min。④柱温:30℃。⑤检测波长:苏丹红I 478nm;苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ520nm,于苏丹红I出峰后切换。⑥进样量:10μL。(2)标准曲线的制作 吸取标准储备液O、0.1ml、O.2ml、O.4mL、O.8mL、1.6mL,用正己烷定容至25mL,此标准系列使用液浓度为O、0.16μg/mL、O.32μg/mL、0.64μg/ml、1.28μg/mL、2.56μg/mL,取10μL按色谱条件进样测定,并绘制标准曲线。(3)样品测定 依色谱要求条件,进样操作,测得结果,代入公式计算。3.结果计算R=C×V/m式中 R——样品中苏丹红的含量,mg/kg;C——由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度,μg/mL;V——样液定容体积,mL;m——样品质量,g。4.试剂①乙腈:色谱纯。②丙酮:色谱纯、分析纯。③甲酸:分析纯。④乙醚:分析纯。⑤正己烷:分析纯。⑥无水硫酸钠:分析纯。⑦色谱柱管:lcm(内径)×5cm(高)的注射器(管)。⑧色谱用氧化铝(中性100~200目):105℃干燥2h,于干燥器中冷至室温,每100g中加入2mL水降活,混匀后密封,放置12h后使用。⑨5%丙酮的正己烷溶液:吸取50mL丙酮用正己烷定容至1L。⑩标准储备液:分别称取纯度≥95%的苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.Omg(按实际含量折算),用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。5.仪器①高效液相色谱仪(配有紫外可见光检测器)。②分析天平:感量0.1mg。③旋转蒸发仪。④均质机。⑤离心机。⑥O.45μm有机滤膜。