异常毕赤酵母

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  • 【分享】毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒说明书

    毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒说明书,是个很不错的资料,对于做蛋白表达的版友来说很有用的。包括多酵母及表达,背景知识等的综述,实验技术路线,方案,详细的培养基及培养条件,注意事项。以及表达分析。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=158198]毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒说明书[/url]

  • 毕赤酵母蛋白不表达的原因

    很多朋友问这样一个问题:为什么毕赤酵母表达困难?他们自己也很纳闷,重组酵母pcr检测也证明目的基因重组了,但是诱导之后就是在表达上清中检测不到目的蛋白,仔细研究操作手册后仍然不知道原因。本人,根据自己的经验,采用倒推的方法,按实验过程从后向前分析,供大家参考:1、诱导之后表达上清中检测不到目的蛋白:分析1:检测的方法是否有问题,要考虑是不是蛋白表达量低而没有检测到? 如果是蛋白表达低,可以选择浓缩蛋白,具体的方法很多,有TCA、丙酮、浓缩柱等等方法,之前在本版已经发过帖,在此不赘述。 2、如果蛋白浓缩N倍之后仍然检测不到,那基本可以确证蛋白并不在上清中。那么蛋白到哪里去了,考虑是否没有分泌出来,而是在胞内,那就需要通过裂解酵母来检 测胞内蛋白,具体的方法很多,在此也不赘述,曾整理过相关破碎的帖子。 3、如果胞内也没有目的蛋白表达,那么基本可以确定蛋白并没有表达。 4、为什么没有表达呢?倒推回来就是诱导的过程了,诱导体系是什么?甲醇浓度是多少?培养问题是多少,转速是多少?这些都要注意。甲醇一般是0.5%-1.0%,本人用的 是0.5%,也有很多人也用1.0%,曾见过一个帖子,说超过1.5%反而会抑制表达,没有验证过,供大家参考。培养问题28-30度比较合适,转速250rpm比较合适,诱导 体系没有固定的体系,说明书上推荐的是BMGY到OD600 2~6,换到BMMY中OD600 为1左右。 5、如果诱导的过程也没有问题,那问题就复杂了,特别是重组酵母PCR检测证明目的基因确实已经发生了重组。这个时候是最郁闷的了,但是郁闷怎么办,还是要找原 因,在此我给的建议是先做RT-PCR证明mRNA水平的情况,也就是说有没有转录。如果转录了,后续的操作也没有问题(本帖的1、2、3、4项),那么只有重新设计实 验,比如换酵母株,有文章上说:用GS115表达不出蛋白,换KM71H后,大部分克隆能表达。 6、有个帖子说的很好,在此和大家分享一下。 1、 菌株:用GS115表达不出蛋白,换KM71H后,大部分克隆能表达。 2、温度: 在28度和室温下诱导表达,表达水平可能都不低。 3、pH:手册上用6.0,pH提高到6.8,不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA,最适pH大概5-6左右。pH3的时 候yeast和peptone好像会沉淀的,可以用磷酸和磷酸二氢钾调,具体比例自己去试试。 4、偏爱密码子: codon bias一般不是主要的问题,你要表达的蛋白特性才是主要问题,酵母对分子量大(30KD以上),结构复杂(如一些蛋白酶),二硫键含量多的 蛋白往往不能有效表达,尤其是分泌表达。密码子改造对一些较小的而且结构简单的蛋白表达量的提高可能有一些作用。比如一位战友用Pichia酵母表达一个单链 抗体,29KD,含有2对二硫键,表达量约几毫克每升,选用酵母偏好密码子全基因合成后,表达量没有什么提高。 5、表达时间与空质粒转化对照:诱导时间长了以后,是会有很多蛋白分泌出来的,时间越长杂蛋白就越多,且分子量都比较大。最好做一个空质粒转化的对照, 这样就会比较肯定到底是不是自身的蛋白分泌的结果。 6、污染:每个样品从G418板上挑10个左右单克隆于2ml BMGY摇菌(30ml玻璃管,比LB管大一点),纱布一般用8层,一天左右看着比较浑离心,留样1ml,余 1ml换2ml BMMY诱导表达,3,4层纱布足够了。 污染一般都是跟瓶口覆盖有关的原因造成的,只盖纱布肯定会污染。加盖报纸后,就再没遇到过污染。如果只用6层纱布,污染的可能当然很大,100ml三角瓶, 装量10ml培养液,用橡筋把8层纱布和2层报纸拴紧封口,空气浴摇床。 7、不表达:蛋白有没有表达就要看你的运气了,一般重复2-3次实验都没有表达菌株,这个蛋白就放弃表达了。 8、表达量: 30KD,10mg/L表达量已经很高,最直接的方法是发酵,一般提高5-10倍。大肠杆菌一样出现大团的超表达蛋白。 9、糖基化:酵母分泌表达的N糖基化是可以预测的,有如下序列:N X S/T就是潜在的糖基化位点,X为任意氨基酸,1个糖基化位点会加上1-3KD左右的糖基。另外可 能还有O糖基化话,但是无法预测其位点,不过很少听说表达蛋白有O糖基化的。如果胞内表达,不存在糖基化的问题。 10、表型与表达:重组SalI和BglII酶切产生单交换和双交换,结果就是产生Mut+和Muts表型的菌株;前者在甲醇诱导表达时生长快,消耗的甲醇多,后者生长慢,消耗 的甲醇少,所以诱导表达时Muts表型要求更高的菌体浓度。一般用Mut+表型的较多,但是对某些蛋白Muts菌株可能表达的更好,只有试试才知道你的蛋白用那种菌 株表达较好。 11、培养基 YPD:最基本的培养用;BMGY:诱导表达前培养用;BMMY:诱导表达用;MD:电转化后筛选his+用。 YEPD是不能代替BMGY的,因为有葡萄糖,这样残留的葡萄糖会影响下一步的诱导表达。不过有一种方法是可行的,就是用YPG培养基代替,只是把YEPD中的葡萄糖 用3%的甘油代替,也可以降低成本。摇瓶毕竟不能和发酵罐比,甘油残余会抑制甲醇利用。 BMGY、BMMY灭菌后才能加甲醇、磷酸钾、生物素。配制BMMY时也没必要用5%过滤除菌的甲醇,在灭菌后使用前加100%甲醇至你要的浓度。 YNB可以高压灭菌,没问题的,也可以0.22um过滤处理,天冬氨酸和苏氨酸要待培养基高压灭菌后加入;配YPD时可以加入YPD一起灭菌,但时间不能太长,温度不能 太高,一般121-125度12-15分钟足够了。若时间过长,温度过高,可能导致YPD焦化。glucose和含氮化合物在一起容易产生美拉德反应,这是配制培养基中的禁忌。 颜色很深的话,基本不能使用了。或者含有葡萄糖和/或YNB的培养基108度35min高压灭菌。 小量发酵其实可以把培养基成分中的YNB和生物素去除,培养基价格便宜,操作又方便,可以直接灭菌,效果也很好(效果不比含YNB的差)。 如果是用自己配置的培养基,如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等,可以不用换液,采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。 用无机盐进行大规模发酵,更省钱。更多有关蛋白表达纯化的相关资料,请点击:资料专区

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  • 毕赤酵母对酸粥滋味品质形成的评价
    将毕赤酵母与乳酸菌进行复配发酵制备酸粥样品,同时使用乳酸菌单一发酵作为对照,并采用电子舌技术结合多元统计学方法对其滋味品质进行评价。
  • 电子鼻技术建立酵母菌发酵乳风味 指纹图谱的研究
    摘要:利用电子鼻对酸乳和酵母菌发酵乳的风味轮廓进行分析检测,并通过主成分分析法(PCA)和线性判别分析法(LDA)分别分析了酸乳与酵母菌发酵乳在不同发酵时间的风味特性,结合其质构特征,建立酵母菌发酵乳风味指纹图谱。结果表明:利用PCA和LDA分析了不同发酵时间的发酵乳的气味特性,快速区分酸乳与酵母菌发酵乳的不同风味特征,区分效果良好。酵母菌发酵乳质构特性参数有显著变化,硬度和稠度在发酵4 h和后熟24、36、48 h以及14 d时差异显著,而黏结性和黏度指数除个别时间外,两者之间差异均显著,并结合电子鼻的检测八卦图谱建立了酵母菌发酵乳风味随时间变化的风味指纹图谱
  • 酵母菌高效破壁方法的革新
    液氮研磨法是酵母破壁提取总RNA最合适的方法。但是对于酵母来说,科研工作者往往对其内容蛋白也十分感兴趣。众所周知,反复冻融法对蛋白活性造成不可逆的破坏,甚至可能导致蛋白变性。那么对于酵母研究的专业实验室来说,液氮研磨法即是不二之选。然而传统的液氮研钵研磨的方法毕竟是手工的方法,对于不同种类的酵母,以及不同种类的目标蛋白,研磨时间会有不同。由于人为手工的实验无法达到平行的实验效果,所以实验摸索困难。而且,在研磨过程中也可能产生粉尘污染样品。 所以酵母研究工作者亟需一个合适的工具来协助科研。SPEX公司生产的Freezer Mill 6775/6875/6875D系列产品则完美的解决了这些问题。

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  • 酵母粉、酵母提取物、酵母浸粉和酵母浸膏的区别您知道吗?
    在给许多客户介绍酵母浸粉时,很多人都会将其与酵母粉混为一谈,经常会问:“酵母浸粉不就是酵母粉吗?”“酵母浸膏和酵母浸粉哪个好呢?” 首先我们了解一下什么是酵母粉、酵母浸粉和酵母浸膏吧! 酵母粉含义:一般是指灭活的酵母,产品成分主要是失去活性的酵母菌体,营养成分包括仍然包裹在菌体内部的粗蛋白、胞壁多糖以及丰富的维生素、生长素、微量元素等。 酵母粉分类:分糖蜜酵母粉与啤酒渣酵母粉两大类,前者专门发酵生产并干燥制成,以糖蜜为主要原料,品质好且质量稳定;后者采用啤酒生产的废料-废啤酒酵母泥为原料,一般采取滚筒干燥制成,成本较低,但杂质较多,酵母细胞较老化,微生物不易吸收利用,品质不稳定。酵母粉主要在传统的抗生素等发酵行业应用较广泛。 酵母粉特点:微生物对酵母粉的营养物质利用率与利用速率较低,发酵完毕后不能利用的残留物(粗蛋白与菌体细胞壁)较多,难以处理。 酵母浸粉含义:又称酵母提取物,是采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、 浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色 干燥粉末。有酵母自然 香味,易溶于水,水溶 液呈淡黄色。酵母浸粉吸湿性,请放阴凉干燥处保存。酵母浸粉当中含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、酵母核酸组成的一种混合物,酵母浸粉当中含有丰富的B族维生素和各种氨基酸。核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。在当中它起的主要作用是补充氮源和提供细菌生长的各种维生素及氨基酸。 酵母浸粉分类:同样可以采取糖蜜发酵的糖蜜酵母和啤酒生产的废啤酒酵母泥为原料生产。 糖蜜酵母生产的酵母浸粉一般品质较高,这一方面是糖蜜酵母发酵经过专业的生产控制,原料品质就比较高,另外啤酒酵母粉为原料也有利于酵母积累更丰富的天然营养成分。另外一方面是以糖蜜酵母为原料的酵母浸粉生产规模可以做的很大,生产厂家可以充分采用先进的生产工艺设备与技术,从生产技术的角度保证酵母浸粉产品的高品质。 酵母浸粉特点:酵母浸粉的生物利用度高,微生物的利用速率快,特别有利于对发酵培养基比较挑剔的营养缺陷型、基因重组工程菌的吸收利用,有助于缩短发酵周期,提高微生物发酵效价;同时发酵残留非常少,有利于发酵废液的环保处理。 酵母浸粉主要用于微生物培养基制备的基础原材料以及生物制药发酵。 酵母浸膏以酵母为原料,采用自溶法或加酶水解法工艺,经分离、脱色精制浓缩而成的,含氨基酸、肽、多肽及酵母细胞水溶性成分的膏状产品。 废啤酒酵母泥生产的酵母浸粉品质一般要大大差于糖蜜酵母浸粉,这主要是因为废啤酒酵母泥本身是啤酒生产的副产物,不存在什么质量控制;另外一方面是废啤酒酵母泥不能长途运输,生产厂家一般只能依赖周边啤酒厂的有限供应,生产规模难以扩大,因此限制了厂家的投资规模,一般只能土法上马,难以把生产技术装备以及所能采取的技术手段提升到理想的状态,导致产品色泽较深、不溶性杂质较多,维生素、生长素等微量营养物质的含量也比较欠缺。 酵母粉和酵母浸粉是完全不一样的产品,更不能混为一谈。 酵母浸粉和酵母浸膏的区别在于酵母浸粉经过高温瞬时干燥所损失的营养成分比酵母浸膏长时间浓缩所损失的营养要少得多,所以酵母浸粉在实际使用中用量更经济,且使用方便,也更易于运输和保存。 酵母浸粉和酵母浸膏应用领域食:品饲料领域、动物营养领域、生物发酵领域、营养保健领域、发酵工业领域:可用于抗生素新药、多肽、核苷酸、B族维生素、生长因子、氨基酸、有机酸、酶制剂、生物防腐剂、原料药、VC及肌苷、生物材料、维生素、微量元素、基因工程等生物工程产业。为微生物发酵培养提供全面均衡的营养 、微生物培养基:假单胞杆菌、醋酸杆菌、葡萄糖酸杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、乳酸链球菌、葡萄球菌、酵母及支原体。
  • 使用QPCR 检测酵母,避免巨大经济损失 -- 将英国Bibby 的荧光定量用于红酒行业
    英国Bibby Scientific 集团,子品牌PCRmax 下的荧光定量PCR仪ECO, 或者子品牌TECHNE下的PRIME PRO 48, 可以有效而可靠地检测名叫“德克.布鲁赛尔”的酵母。 对于全球红酒行业而言,该酵母的存在是破坏红酒的一个主要原因。从这方面说,Bibby 的基于PCR的荧光定量检测方法也有助于红酒行业防止巨额经济损失。酵母中释放的可破坏味道的酚成份, 产生了不可预计的芳香成份,通常会与谷仓的味道或动物的汗味等结合,从而破坏红酒的味道。如果采用传统的微生物学技术去检测酵母,太费时费力,成本高, 结果也不太可靠。相反, 实时定量PCR方法,能高效快速并精确地检测酵母。检测“德克.布鲁赛尔”酵母的存在,可用Bibby 的荧光定量PCR仪 ECO 或Prime Pro 48,及“德克.布鲁赛尔26S核醣体RNA” 检测试剂。该试剂专门用于德克.布鲁赛尔酵母基因组的定量检测, 由引物与探针序列组成,检测范围广。广州语特仪器科技有限公司全权代理Bibby产品在中国大南方区的销售。Bibby PCR Detection Methods Could Prevent Large Economic Losses in the Wine IndustryBibby Scientific has announced that it has launched a PCR-based method for reliable and highly specific detection of the yeast, Dekkera bruxellensis, which is a major cause of wine spoilage worldwide, causing large economic losses within the global wine industry.Flavour-spoiling phenolic compounds released from this yeast lead to undesirable aromas, known as ' Brett' taints, that are normally associated with aromas of barnyard, burnt plastic, wet animal and horse-sweat. Detection of the yeast through traditional microbiological techniques can be time-consuming, costly and unreliable. In contrast, real-time or quantitative PCR-based detection methods allow for exceptionally rapid and highly specific identification of the yeast. Testing for the presence of D. bruxellensis can be determined using the Techne Prime Pro 48 qPCR system in conjunction with the Techne qPCR test ' Dekkera bruxellensis 26S ribosomal RNA' . The Techne qPCR Kit for D. bruxellensis is designed for the in vitro quantification of D. bruxellensis genomes. The kit is designed to enable the broadest detection possible whilst remaining specific to the D. bruxellensis genome. The kit is comprised of primers and probe sequences that have 100% homology with a wide range of D. bruxellensis sequences based on comprehensive bioinformatics analyses关于语特 和 英国Bibby / 德国ART / 德国CAT / 瑞士Gerber Instruments 广州语特仪器科技有限公司专注于搅拌器/分散乳化机等实验室样品制备等通用仪器, 熔点仪/光度计/冰点仪等分析仪器,以及PCR等生命科学仪器。 作为英国比比(Bibby )在中国南方的首代,广东,广西,四川,重庆,云南,海南,贵州和西藏是我司的服务范围。语特公司也是德国ART, 德国CAT,瑞士Gerber Instruments 在中国的首代。 * 英国BIBBY 成立于上个世纪50年代,作为英国最大的实验室科学仪器生产商, 旗下有4个子品牌:Stuart,Techne,Jenway,Electrothermal. 专注于样品前处理等通用实验室仪器(如:熔点仪, 搅拌器, 混匀器,摇床, 培养箱,干浴器/氮吹仪,水浴,菌落计数器, 纯水蒸馏器),分子生物学研究设备(基因扩增仪PCR,荧光定量,杂交箱);分光光度计/超微量紫外等分析仪器,及平行反应工作站相关产品。 * 德国ART 成立于上个世纪,是德国乃至全球最专业的分散乳化专家。顶级分散乳化产品从实验室仪器,中试产品到工业设备, 分散头种类组合高达上百种;应用领域覆盖了化工,化妆品,制药,食品,环保等各大领域。 * 德国CAT 成立于上个世纪50年代,是德国样品制备仪器方面的专家之一, 以”品质稳定”而闻名。其顶置式搅拌器种类多样,从手持式,教学用,到科研通用型,高粘度型,是CAT的代表产品线。 * 瑞士Gerber Instruments 有超过120的历史,是专注于乳食品行业的典型代表。其产品冰点仪, 乳脂离心机, 食品专用PH计, 流出式粘度计等, 风靡欧洲及其它大陆国家。
  • 【瑞士步琦】冷冻干燥含酵母菌的微球应用
    瑞士步琦冷冻干燥含酵母菌的微球应用冷冻干燥应用”益生菌是一种有益于人体健康的微生物,常被用于改善肠道菌群。微胶囊包埋技术可以帮助保护菌株,延长其在体内的存活时间,不易受外界环境的影响而失活。因此,在生产益生菌产品时,需要考虑选择合适的微胶囊技术,以确保益生菌的稳定性和活性。下面这篇应用非常好的结合了微胶囊包埋和冷冻干燥技术,证明菌种经过包埋干燥后仍具有生物活性,为发酵工艺和食品转化等领域开辟新的可能性。1介绍冷冻干燥,也称为冻干是一种非常通用的脱水方法,常用于保存微生物、食物或药物,如蛋白质类药物。它将冷冻和干燥结合在一个独特的操作中,可以创造出高质量的干燥终产品。冷冻干燥通常用于保存微生物培养物,因为它具有不可忽视的优点:储存的方便性和增加邮寄微生物的可能性。此外,制得的产品只需要少量维护,培养基在储存过程中不会受到污染,微生物可以长时间保持活力。然而,众所周知,冷冻干燥技术对微生物至关重要,因为它对微生物的生存能力和生理状态都有负面影响。根据方法和生物体的不同,微生物存活率也各有不同;然而,活力水平明显低于液氮储存 2。观察到的活力下降主要是由于一些不良副作用引起的,例如细胞内冰晶的形成1、敏感蛋白的变性或在此过程中膜脂质的物理状态发生一些不可逆的变化 3,5。为了防止这种影响,通常在冷冻或冷冻干燥前使用脱脂牛奶、蔗糖、甘油、 DMSO 或海藻糖等作为冻干保护物质1,3。据报道,海藻糖在干燥、冷冻、渗透胁迫和热休克等极端环境下对酵母和细菌具有保护作用。这些保护效果与膜的稳定和酶活性的保存有关。关于海藻糖的保护作用,已经报道了几种假设。一些报道认为它的作用是通过多个外部氢键取代参与维持蛋白质三级结构的水分子,另一些报道认为它形成玻璃态结构以确保物理稳定性。除了发酵过程或食品转化,酿酒酵母或乳酸菌等微生物在益生菌膳食食品和饲料补充剂领域具有重要的经济意义。然而,这些应用需要在储存过程中保持细胞活力。通过造粒和冷冻干燥技术相结合,可以得到大小和组成均匀的无尘颗粒。由于具有更高的颗粒表面积,这使得产品将具有良好的颗粒流动性,更容易掌握的剂量和更快的产品复原性。尽管存在上述挑战,冷冻干燥仍然是一种酵母、孢子真菌和细菌的方便保存方法,因为它们的长期生存能力通常保持得相当好,而且菌株的储存和分发要求也很简单。因此,本应用旨在生产酿酒酵母颗粒作为模型微生物,使用微胶囊造粒仪 Encapsulator B-390 作为造粒机,将酵母悬浮液挤压进入液氮中形成单分散球体,然后使用冷冻干燥机 Lyovapor&trade L – 200 进行冷冻干燥处理。2仪器,试剂和器材仪器:ESCO NordicSafe, Biosafety Cabinet Class IIBUCHI 微胶囊造粒仪 Encapsulator B-390BUCHI 冷冻干燥机 LyovaporTM L-200 Pro,干燥腔体搭配可加热搁板BUCHI LyovaporTM Software试剂:YPD 培养基, Sigma Aldrich海藻糖, Sigma Aldrich脱脂奶粉琼脂去离子水液氮器材:玻璃培养皿液氮杜瓦瓶3实验本应用中描述的工作是在无菌条件下进行的。将 84g 市售面包酵母悬浮溶解在 50mL 无菌 YPD 培养基(Sigma Aldrich)中。在酵母悬浮液中加入 50mL 无菌冻干保护剂培养基(5g 海藻糖(Sigma Aldrich)和 5g 脱脂牛奶溶于去离子水中),然后用微胶囊造粒仪 B-390 进行制粒(表1)。将挤压后的液滴收集在液氮浴中冷冻,然后转移到不锈钢托盘中,保存在 -25°C 的冰箱中进行冷冻干燥。表1:微胶囊包埋参数_300μm 喷嘴1mm 喷嘴频率[Hz]68060电压[V]7502500压力[mbar]500500冷冻干燥步骤(初级干燥和次级干燥)使用 LyovaporTM 编程软件,如表 2 所示。使用 LyovaporTM L-200 Pro 干燥腔体、可加热的搁板和环境空气。表2:初级干燥和次级干燥冻干参数无酵母菌微球采用与含酵母菌微球相同成分培养基和参数进行制备。冷冻干燥后,将 1mL 无菌水加入 1mL 微球中,用以复原样品。对于含有酵母菌的菌珠,对每个重组溶液进行10倍、100 倍和 1000 倍的连续稀释。将复原后的溶液和稀释液分别涂于 YPD 琼脂平板上,如图 1 所示。琼脂板在 28℃ 培养 24h,评价细胞活力。▲ 图1:琼脂平板上的酵母活力测试4结果与讨论含有酵母的微球可以通过使用微胶囊造粒仪 B-390 进行包埋制备,结果表明:用微胶囊造粒仪 B-390 将酵母滴入液氮中,可使酵母迅速颗粒化;用 300μm 的喷嘴和 1mm 的喷嘴分别制备了 700μm 和 1500μm 左右的微球。仅使用含冻干保护剂介质的溶液也得到了类似的结果。如图 2 所示,冻干后的微球在形状和大小上与湿冻微球保持相似。▲ 图2:用微胶囊造粒仪 B-390 制得的 300μm 酵母微球,在冻干前(左)后(右)的对比通过扫描电镜对其结构进行分析。在图 3 中,可以观察到含有酵母的球珠(下两图)和仅由冻干保护剂培养基制成的球珠(上两图)在形态上的差异。含有酵母菌的微球具有由 5μm 颗粒组成的粗糙结构,可以认为是微生物,而只含有冻干保护剂的微球具有更光滑的结构。▲ 图3:含酵母菌的冻干微球(下)和不含酵母菌冻干微球(上)的结构对比当冷冻干燥时,考虑到膜中脂质物理状态的变化或由于某些蛋白质结构的变化,生物系统可能受到破坏3,9。为了验证酵母菌的活力,将酵母菌重新水合,稀释,并在 28°C 的 YPD 琼脂板上培养 24 小时。图 4 证实了文献报道的内容,即便失去了部分活力,酵母在冻干后仍然可以生长2,4,6,10。▲ 图4:在 28℃ 琼脂板中培养 24 小时后的酵母菌活力5结论含有酵母菌的微粒可以很容易地用微胶囊造粒仪 B-390 进行制备,并使用冻干机 LyovaporTM L-200 进行冷冻干燥处理。B-390 的喷嘴直径分别为300 μm和1000 μm,制得的微粒直径分别为 700μm 和 1500μm。冷冻干燥后,珠粒的大小和形状没有变化。该颗粒流动性好,容易掌握使用剂量,且与水混合后溶解速度快。冻干后的微生物在贮藏过程中仍能保持良好的活力,并能在复水化后成功生长。在本应用中,造粒包埋和冷冻干燥的结合显示出了非常好的实验结果。它可以在发酵工艺和食品转化等领域开辟新的可能性,有利于生产制备剂量易控制和重组的培养发酵剂;另外,在益生菌和食品补充剂领域中获得无尘且可自由流动的粉末,同时保证产品颗粒大小和组成的均匀度。6参考文献N’Guessan, F. K. Coulibaly, H. W. Alloue-Boraud, M. W. A. Cot, M. Djè, K. M. Production of Freeze-Dried Yeast Culture for the Brewing of Traditional Sorghum Beer, Tchapalo. Food Sci. Nutr. 2016, 4 (1), 34–41.Bond, C. Freeze-Drying of Yeast Cultures. In Cryopreservation and Freeze-Drying Protocols Day, J., Stacey, G., Eds. Methods in Molecular BiologyTM Humana Press, 2007 pp 99–107.Leslie, S. B. Israeli, E. Lighthart, B. Crowe, J. H. Crowe, L. M. Trehalose and Sucrose Protect Both Membranes and Proteins in Intact Bacteria during Drying. Appl. Environ.Microbiol. 1995, 61 (10), 3592–3597.Miyamoto-Shinohara, Y. Imaizumi, T. Sukenobe, J. Murakami, Y. Kawamura, S. Komatsu, Y. Survival Rate of Microbes after Freeze-Drying and Long-Term Storage.Cryobiology 2000, 41 (3), 251–255.Wolkers, W. F. Tablin, F. Crowe, J. H. From Anhydrobiosis to Freeze-Drying of Eukaryotic Cells. Comp. Biochem. Physiol. A. Mol. Integr. Physiol. 2002, 131 (3), 535–543.Lodato, P. Huergo, M. S. de Buera, M. P. Viability and Thermal Stability of a Strain of Saccharomyces Cerevisiae Freeze-Dried in Different Sugar and Polymer Matrices. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1999, 52 (2), 215–220.Strasser, S. Neureiter, M. Geppl, M. Braun, R. Danner, H. Influence of Lyophilization,Fluidized Bed Drying, Addition of Protectants, and Storage on the Viability of Lactic Acid Bacteria. J. Appl. Microbiol. 2009, 107 (1), 167–177.Miyamoto, T. (Kyushu U. Kawabata, K. Honjoh, K. Hatano, S. Effects of Trehalose on Freeze Tolerance of Baker’s Yeast. J. Fac. Agric. - Kyushu Univ. Jpn. 1996.Giulio, B. D. Orlando, P. Barba, G. Coppola, R. Rosa, M. D. Sada, A. Prisco, P. P. D. Nazzaro, F. Use of Alginate and Cryo-Protective Sugars to Improve the Viability of Lactic Acid Bacteria after Freezing and Freeze-Drying. World J. Microbiol. Biotechnol. 2005, 21 (5), 739–746.Cerrutti, P. Huergo, M. S. de Galvagno, M. Schebor, C. Buera, M. del P. Commercial Baker’s Yeast Stability as Affected by Intracellular Content of Trehalose, Dehydration Procedure and the Physical Properties of External Matrices. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2000, 54 (4), 575–580.

异常毕赤酵母相关的仪器

  • Fermentation Monitor 5100罐内发酵度监测在生产啤酒、葡萄酒或烈酒时,Fermentation Monitor 5100 可以直接在罐内通过折光率测量持续监测酒精发酵情况。酵母代谢引起的糖浓度降低与酒精浓度增加对折光率有相反但可预测的影响,可以用来确定发酵度参数。主要特点优化和控制您的发酵过程Fermentation Monitor 5100 可以直接在罐内持续跟踪这一过程并测定最终发酵度。无需进行耗时的手动取样和麦汁预处理。可以检测出任何异常情况(错误的温度控制、增长偏差等),从而确保发酵的一致性,并提高最终产品的均匀性。一台监测仪即可监控所有发酵度参数Fermentation Monitor 5100 可以测定用来表征发酵状态的所有相关参数:原浓 [°Plato]表观浸出物密度 [°Plato]酒精含量 [%w/w]酒精浓度 20 °C [%v/v]真浓 [°Plato]真实发酵度 [%]发酵速度 [酒精浓度以 %v/v/h 增加 20 °C]罐内监测的理想选择从其“安装即忘记”的简单性以及经年累月的持续运行中受益匪浅。直接在罐内执行所有清洗程序。
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  • 全新宝宝摇床上市啦专业,稳定,精准,自动化The LogPhase&trade 600 全自动微生物监测仪,是 BioTek 公司独特设计, 专业化为微生物生长监测打造的产品。它是一款拥有四个板位的微生物监测产品,保证你的四胞胎宝宝(4块96孔板)享受到同样的培养待遇。这款宝宝摇床采用坚固持久的震荡设计,震荡模式严格按照微生物宝宝的培养特性所设计,保证均匀不产生凝结。另外,专业的温控设计,保证温度均衡稳定,并有防凝结热盖的独特设计,从而保证绘制出的生长曲线平滑而稳定。为相关应用所配套的操控软件,简单易学,分分钟就可以完全掌握并熟练操作。4个宝宝的培养情况,同时并实时展现,实验数据一键导出,不要太轻松惬意。你还等什么?赶紧为你的细菌/酵母宝宝,配个称心如意的自动化摇床吧!专业的震荡模式LogPhase 600 是为细菌和酵母宝宝生长所量身打造,因此在震荡的设计方面,下足了功夫,首先能够满足长时间不间断的震荡动力学检测,其次要在长期的震荡中,不会产生凝结。因此在坚固与专业震荡的加持下,才能够使LogPhase600成为微生物生长方面的专业设备。精密稳定的温度控制精密稳定的温度控制是微生物生长监测获得优质生长曲线的关键。LogPhase 600在每块监测板的周围都设计了数个温度感应器和加热模块,从而保证整个仓体内的温度非常均一,没有所谓的边缘效应产生,进而能够获得稳定平滑的增长曲线。抗凝集技术为了减少液体挥发产生的冷凝水对检测造成影响,LogPhase 600 增加了凝集控制功能,在检测板的上下方可以进行梯度温控形成热盖,从而有效的避免了凝集现象引起的检测误差。简便智能的操控软件LogPhase 600 配合了专用的APP, 来完成微生物生长监测的信号采集和数据分析,专用APP操作,简便且功能强大,仅需简单培训,实验人员即可熟练操作。软件可同时展现4块孔板内微生物的生长情况,并自动计算延迟时间,最大速率和平台期时间。
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  • 酿酒酵母,作为酵母中应用较为广泛的一类,在啤酒生产中不可或缺, Countstar BioFern已被国内多家知名啤酒厂所使用并认可,同时也远销海外国际 知名啤酒厂… … 产品应用啤酒酵母细胞计数
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异常毕赤酵母相关的耗材

  • 霉菌、酵母菌测试片
    霉菌和酵母的测试片检测方法方法编号:50311适用范围:本品可用于各类食品及饮用水中霉菌和酵母菌的计数。2方法原理:将霉菌营养培养基、吸水凝胶和酶显色剂加载在纸片上,通过培养,在酶显色剂的放大作用下,使霉菌和酵母菌在纸片上显现出出来,通过计数报告结果。3方法特点:与传统方法相比,省去了配制培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作,即开即用,操作简便。培养时间由一周缩短为48h~72h。4操作方法4.1样品处理:无菌称取样品25g(或25mL)放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内,经充分振摇做成1:10的稀释液,用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌水的试管内,用1mL灭菌吸管反复吸吹50次做成1:100的稀释液,以此类推,每个稀释度更换一支灭菌吸管。4.2接种:4.2.1一般食品选2~3个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如食用纯水和矿泉水等)可直接用原液检测。将检验纸片水平放台面上,揭开上面的透明薄膜,用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL,均匀加到中央的滤纸片上,然后轻轻将上盖膜放下,静置5min,每个稀释度接种两片。4.2.2用手指先沿方格区边缘刮一下,防止水外流,然后再在中间轻轻推刮,使水分在纸片方格区内均匀分布,并将气泡赶走。4.3培养:将加了样的检验纸片每12片叠放在一起,放入自封袋中,平放在28℃培养箱内培养48h开始观察计数。4.4结果判断与计数:霉菌和酵母菌在纸片上生长后会显示蓝色斑点,霉菌菌落显示的斑点略大或有点扩散,酵母菌落则较小而圆滑,许多霉菌在培养后期全呈现其本身特有的颜色。选择菌落数适中(10~50个)的纸片进行计数,乘以稀释倍数后即为每克(或毫升)样品中霉菌和酵母菌的数目。5计数原则及报告方式:5.1通常选择菌落在10~50个之间的纸片进行计数,乘以稀释倍数报告之。5.2具体计数原则可参照细菌(菌落)总数的测定方法进行。6附加说明:由于霉菌常以孢子的形式于空气中到处传播,而多种样品是要求霉菌酵母菌不得捡出,因此检测霉菌时需特别小心操作,取样用品、稀释用水和吸管吸头等都需仔细消毒,接种时尽量避免空气流动,动作要干净利落,每次最好用灭菌生理盐水接一片空白对照,以免出现假阳性结果。
  • ATCC 9449 胶红酵母 百欧博伟生物
    ATCC 9449 胶红酵母 百欧博伟生物 一、菌种简介平台编号:bio-104356规格:freeze-dried拉丁属名:Rhodotorula mucilaginosa中文名:胶红酵母详情介绍Rhodotorula mucilaginosa (Jorgensen) Harrison 拉丁名(ATCC? 9449?) 统一编号Deposited As Rhodotorula rubra (Demme) LodderStrain Designations 别名 NRRL Y-1592 [CBS 17, CCRC 21667, IGC 4791, MUCL 30397, VKM Y-341]Biosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedStorage Conditions 保藏条件Frozen: -80°C or colderFreeze-Dried: 2°C to 8°CLive Culture: See Propagation SectionType Strain 模式菌种 yes (type strain of Rhodotorula rubra (Demme) Lodder)Preceptrol? noMorphology After 3 days at 25°C the cells are ovoidal to spherical and may occur singly, in pairs, in short chains or small clusters. There may be a light strawberry-pink ring and light to moderate sediment.Medium 培养基 ATCC? Medium 28: Emmons' modification of Sabouraud' s agarATCC? Medium 200: YM agar or YM brothATCC? Medium 336: Potato dextrose agar (PDA)Growth Conditions 生长条件 Temperature 培养温度: 24°C to 26°CAtmosphere需氧情况 : Typical aerobicSequenced Data 18S ribosomal RNA gene, partial sequence internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internal transcribed spacer 2, complete sequence and 26S ribosomal RNA gene, partial sequenceD1D2 region of the 26S ribosomal RNA geneMorphology After 3 days at 25°C the cells are ovoidal to spherical and may occur singly, in pairs, in short chains or small clusters. There may be a light strawberry-pink ring and light to moderate sediment. Name of Depositor 寄存者 NRRLChain of Custody 来源国家 ATCC -- RRL -- CBS 17 -- G. PollacciCross References Nucleotide (GenBank) : AF189960 26S ribosomal RNA gene, partial sequenceNucleotide (GenBank) : KU729065 ITS including 5.8S rRNA geneNucleotide (GenBank) : KU729148 D1/D2 region of 28S rRNA gene 二、胶红酵母功效:1、分解出长石、云母等矿物中的钾、硅,也能分解出磷灰石中的磷,,具有溶磷、释钾和固氮功能,同时能在生长繁殖过程中产生有机酸、氨基酸、多糖、激素等有利于植物吸收和利用的物质。2、本品在土壤中繁殖后,分泌植物生长刺激素及多种酶,以增强作物对一些病害的抵抗力;也抑制其他病原菌的生长。3、菌体内的钾在菌体死亡后,游离出来,又可被植物吸收利用。作为微生物肥料中的一种重要功能菌,可提高土壤速效钾、磷含量,提高作物产量和品质等多种效. 三、胶红酵母特征特性:营养体:粗长杆状,两端钝圆,革兰氏染色反应不定,产生聚β-*盐(PHB)颗粒。菌体大小为(1.0~1.2)×?(2.5~7.0)μm?,菌体周围有厚荚膜。芽孢:壁厚,椭圆形,中生或近端生,芽孢囊不膨大或微膨大。菌落圆形,无色,隆起,胶质粘稠,透明或半透明,边缘整齐。好氧或兼性厌氧生长,水解淀粉,接触酶反应阳性,氧化酶和卵磷脂酶反应阴性,在无氮培养基上生长良好,生长温度10?℃?~?45?℃。 四、胶红酵母特点:1、该菌具有解磷、解钾的功能。2、具有活化土壤中硅、钙、镁中量元素作用。 3、具有提高铁锰铜锌钼硼供应的功效。 4、提高或延长肥效,减少化肥用量。 5、提高作物抗逆性,预防或减轻病害。 五、胶红酵母使用方法:生产符合行业标准的生物有机肥、复合微生物肥料(有效菌数≥0.2亿/克)。以100亿cfu/克为例,每吨有机肥添加2000克。本品可配合其他复混肥冲施,用量按250-500克/亩地。微生物菌肥用量:粉劑每噸添加膠質芽孢桿菌20公斤、顆粒加10公斤。 中国微生物菌种查询网优势订购各国微生物菌种保藏中心(ATCC菌种,NTCC菌种,NRRL菌种,DSM菌种,JCM菌种,CBS标准菌种,CECT菌种)菌种类,病毒类,细胞类等产品,货期短价位低,产品COA齐全,手续齐全,欢迎选购!
  • 霉菌和酵母菌测试片(美国3M)
    3.Petrifilm&trade 霉菌和酵母菌测试片-美国3M&bull 测试片中添加抗生素,可抑制细菌生长&bull 含酵母菌指示剂,使酵母菌更易计数&bull 3-5天确认霉菌酵母数AOAC OMA标准:997.02编号:6417规格:50片/包,20包/箱(贮藏)1、未开封时,冷藏于&le 8℃(&le 46℉),并在保存期内用完,高温度时,凝固水可以排除,包装物最好于室温启开。2、已开封的,将封口以胶带封紧。3、保存再封的袋于&le 25℃(&le 77℉)和温度(样品制备)4、制备1:10和更大稀释的食物样品稀释液,称取或吸取食物样品,置入适宜的无菌容器内,如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内。5、加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的旦白胶水(ISO方法6887) 、缓冲旦白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水。 不可使用含有枸橼酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液,因为它们能抑止菌生长。6、搅拌或均质样品. 样品不需要调PH,但已调解PH的样品也能够使用。(接种)7、将测试片置于平坦表面处,揭开上层膜。8、使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。9、允许使上层膜直接落下,切勿向下滚动上层膜。10、手拿压板横膜,将压板放置在上层膜中央处。11、平稳的压下,使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上,切勿扭转压板。12、拿起压板,静置至少1分钟以使培养基凝固。(培养)(解释)

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