鸦胆子素对照品

鸦胆子薄层20药典，先254观测，点样还不错。然后喷10%硫酸乙醇，105℃，然后紫外365观测，对照品鸦胆苦醇没有显示。

[font=宋体][size=15px]糖尿病肾病是糖尿病最严重的微血管并发症之一，也是导致肾脏功能衰竭的首要病因，其中炎症信号对于促进糖尿病肾病的发生发展发挥了重要作用，因此抗炎干预是治疗糖尿病肾病的一种有效策略。鸦胆子苦素[/size][/font][font=&][size=15px]A[/size][/font][font=宋体][size=15px]（[/size][/font][font=&][size=15px]Bruceine A[/size][/font][font=宋体][size=15px]）是一种从中药鸦胆子[/size][/font][font=&][size=15px]Brucea javanica[/size][/font][font=宋体][size=15px]（[/size][/font][font=&][size=15px]L.[/size][/font][font=宋体][size=15px]）[/size][/font][font=&][size=15px]Merr[/size][/font][font=宋体][size=15px]的果实中提取的天然三萜内酯化合物，其是否能够发挥抗炎作用治疗糖尿病肾病，以及相关机制和靶点尚不清楚。[/size][/font] [size=15px][font=&]2022[/font][font=宋体]年[/font][font=&]9[/font][font=宋体]月，中国医学科学院王真课题组在[/font][font=&]Kidney International[/font][font=宋体]（[/font][font=&]IF=19.6[/font][font=宋体]）发表题为[/font][font=&]“Bruceine A protects against diabetic kidney disease via inhibiting galectin-1”[/font][font=宋体]的文章，[/font][b][font=宋体]发现鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]（[/font][font=&]BA[/font][font=宋体]）[/font][font=宋体]具有良好抗糖尿病肾病作用，机制研究揭示其能够靶向结合[/font][font=&]Galectin-1[/font][font=宋体]蛋白进而抑制[/font][font=&]Galectin-1[/font][font=宋体]介导的炎症通路活化。[/font][/b][font=&][/font][/size] [size=15px][b][font=&]1[/font][font=宋体]、鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]是高糖应激[/font][font=&]HBZY-1[/font][font=宋体]细胞中的抗炎化合物[/font][font=&][/font][/b][/size][size=15px][font=宋体][back=url(&]研究首先[/back][/font][b][font=宋体][back=url(&]利用大鼠肾小球系膜细胞建立了高糖诱导的炎性信号（[/back][/font][font=&][font=宋体]NF-kB[/font][/font][/b][/size][b][font=宋体][back=url(&]转录活性）筛选模型，采用荧光素酶报告基因分析进行[/back][/font][font=&][font=宋体][back=url(&]113[/back][/font][/font][font=宋体][back=url(&]种天然产物化合物库进行筛选[/back][/font][/b][font=宋体][back=url(&]，发现鸦胆子苦素[/back][/font][font=&][font=宋体][back=url(&]A[/back][/font][/font][font=宋体][back=url(&]具有显著体外抗炎作用，可抑制高糖诱导的炎症信号分子的表达和炎症因子分泌。[/back][/font][font=&][/font][img=图片,1,]data:image/svg+xml,%3C%3Fxml version='1.0' encoding='UTF-8'%3F%3E%3Csvg width='1px' height='1px' viewBox='00 1 1' version='1.1' xmlns='http://www.w3.org/2000/svg' xmlns:xlink='http://www.w3.org/1999/xlink'%3E%3Ctitle%3E%3C/title%3E%3Cg stroke='none' stroke-width='1' fill='none' fill-rule='evenodd' fill-opacity='0'%3E%3Cg transform='translate(-249.000000, -126.000000)' fill='%23FFFFFF'%3E%3Crect x='249' y='126' width='1' height='1'%3E%3C/rect%3E%3C/g%3E%3C/g%3E%3C/svg%3E[/img][size=15px][font=宋体]图[/font][font=&]1 [/font][font=宋体]鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]是高糖应激[/font][font=&]HBZY-1[/font][font=宋体]细胞中的抗炎化合物 [/font][font=&][/font][/size][size=15px][b][font=&]2[/font][font=宋体]、鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]可减轻[/font][font=&]db/db[/font][font=宋体]小鼠的肾脏损伤[/font][font=&][/font][/b][/size][size=15px][font=宋体]作者使进一步[/font][b][font=宋体]体内实验[/font][/b][font=宋体]发现鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]治疗[/font][font=&]8[/font][font=宋体]周后可以显著改善糖尿病[/font][font=&]db/db[/font][font=宋体]小鼠肾脏滤过功能下降和肾小球基底膜增厚、足细胞丢失等肾脏功能和相关病理改变。此外，鸦胆子素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]对糖尿病动物模型具有降糖、降脂等多种保护作用。[/font][font=&][/font][/size][img=图片,1,]data:image/svg+xml,%3C%3Fxml version='1.0' encoding='UTF-8'%3F%3E%3Csvg width='1px' height='1px' viewBox='0 0 1 1' version='1.1' xmlns='http://www.w3.org/2000/svg' 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[/font][font=&][/font][/size][size=15px][b][font=&]3[/font][font=宋体]、鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]可减轻[/font][font=&]db/db[/font][font=宋体]小鼠糖尿病引起的肾脏炎症和纤维化[/font][font=&][/font][/b][/size][size=15px][font=宋体]作者接着[/font][b][font=宋体]研究了[/font][font=&]BA[/font][font=宋体]的肾脏保护作用是否可归因于其体内抗炎能力[/font][/b][font=宋体]，结果显示[/font][font=&]BA[/font][font=宋体]治疗显著抑制了糖尿病组中上调的炎症因子，此外，[/font][font=&]db/db[/font][font=宋体]小鼠肾脏组织中[/font][font=&]p-IkBa[/font][font=宋体]、[/font][font=&]p-p65[/font][font=宋体]和[/font][font=&]p-p38[/font][font=宋体]的蛋白表达也因[/font][font=&]BA[/font][font=宋体]而大大降低，且[/font][font=&]BA[/font][font=宋体]可减轻[/font][font=&]db/db[/font][font=宋体]小鼠糖尿病引起的肾脏纤维化。[/font][font=&][/font][/size][img=图片,1,]data:image/svg+xml,%3C%3Fxml version='1.0' encoding='UTF-8'%3F%3E%3Csvg width='1px' height='1px' viewBox='0 0 1 1' version='1.1' xmlns='http://www.w3.org/2000/svg' xmlns:xlink='http://www.w3.org/1999/xlink'%3E%3Ctitle%3E%3C/title%3E%3Cg stroke='none' stroke-width='1' fill='none' fill-rule='evenodd' 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[/font][font=&][/font][/size][size=15px][b][font=&]4[/font][font=宋体]、鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]直接与[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]结合[/font][font=&][/font][/b][/size][size=15px][font=宋体]随后，作者[/font][b][font=宋体]利用[/font][font=&]Pulldown+MS[/font][font=宋体]技术鉴定[/font][font=&]Galectin-1[/font][font=宋体]为鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]的直接靶点[/font][/b][font=宋体]，[/font][font=&]Galectin-1[/font][font=宋体]是半乳糖凝集素家族中第一个被发现的成员，具有调节炎症和免疫等多种生物学功能，已知[/font][font=&]Galectin-1[/font][font=宋体]能够促进糖尿病肾病的进展，且糖尿病患者血清中[/font][font=&]Galectin-1[/font][font=宋体]水平也常常升高。进一步采用[/font][font=&]Pulldown+WB[/font][font=宋体]和[/font][font=&]SPR[/font][font=宋体]验证了两者的结合，并采用分子对接发现[/font][font=&]BA[/font][font=宋体]可以通过与[/font][font=&]Galectin-1[/font][font=宋体]的[/font][font=&]His44[/font][font=宋体]和[/font][font=&]Arg48[/font][font=宋体]氨基酸残基结合。[/font][font=&][/font][/size][img=图片,1,]data:image/svg+xml,%3C%3Fxml version='1.0' encoding='UTF-8'%3F%3E%3Csvg width='1px' height='1px' viewBox='0 0 1 1' version='1.1' 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HG[/font][font=宋体]应激下[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]介导的炎症反应[/font][font=&][/font][/b][/size][size=15px][b][font=宋体]已有报道表明[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]具有促进炎症作用，作者研究了[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]是否有助于[/font][font=&]HBZY-1[/font][font=宋体]细胞中[/font][font=&]HG[/font][font=宋体]诱导的炎症反应。[/font][/b][font=宋体]结果显示重组大鼠[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]蛋白（[/font][font=&]rrGal-1[/font][font=宋体]）能够在[/font][font=&]HG[/font][font=宋体]条件下显著增加[/font][font=&]NF-kB[/font][font=宋体]活性，而[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]下调显著消除了[/font][font=&]HG[/font][font=宋体]诱导的炎症反应，[/font][font=&]HG[/font][font=宋体]处理也显著诱导了[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]蛋白和[/font][font=&]mRNA[/font][font=宋体]表达。值得注意的是，[/font][font=&]BA[/font][font=宋体]抑制了[/font][font=&]HG[/font][font=宋体]条件下[/font][font=&]rrGal-1[/font][font=宋体]诱导的[/font][font=&]NF-kB[/font][font=宋体]活性，表明该化合物直接降低[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]引发的炎症信号激活，而[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]下调显著消除了鸦胆子素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]的抗炎作用，支持[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]在介导鸦胆子素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]作用中的关键作用。然而，[/font][b][font=宋体]鸦胆子素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]未能影响[/font][font=&]HG[/font][font=宋体]条件下[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]的蛋白质或[/font][font=&] mRNA [/font][font=宋体]表达，表明鸦胆子素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]可能与[/font][font=&] Gal-1[/font][font=宋体]结合，从而抑制[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]引发的炎症信号激活而不影响其体外表达。[/font][/b][font=宋体]总之，这些发现表明鸦胆子素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]通过抑制[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]引发的[/font][font=&]HG[/font][font=宋体]应激炎症反应发挥保护作用。[/font][font=&][/font][/size][img=图片,1,]data:image/svg+xml,%3C%3Fxml version='1.0' encoding='UTF-8'%3F%3E%3Csvg width='1px' height='1px' viewBox='0 0 1 1' version='1.1' xmlns='http://www.w3.org/2000/svg' xmlns:xlink='http://www.w3.org/1999/xlink'%3E%3Ctitle%3E%3C/title%3E%3Cg stroke='none' stroke-width='1' fill='none' fill-rule='evenodd' fill-opacity='0'%3E%3Cg transform='translate(-249.000000, -126.000000)' fill='%23FFFFFF'%3E%3Crect x='249' y='126' width='1' height='1'%3E%3C/rect%3E%3C/g%3E%3C/g%3E%3C/svg%3E[/img][size=15px][font=宋体] [/font][font=&][/font][/size][size=15px][b][font=&]6[/font][font=宋体]、鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]干扰[/font][font=&]Galectin-1[/font][font=宋体]与[/font][font=&]RACK1[/font][font=宋体]结合抑制[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]介导的炎症[/font][font=&][/font][/b][/size][size=15px][b][font=宋体]为了进一步阐明[/font][font=&]BA[/font][font=宋体]如何影响[/font][font=&] Gal-1[/font][font=宋体]传递炎症信号，作者通过[/font][font=&]Pulldown[/font][font=宋体]发现，[/font][font=&]Bio-BA [/font][font=宋体]与[/font][font=&] Gal-1[/font][font=宋体]均能够将[/font][font=&]RACK1[/font][font=宋体]拉下，表明[/font][font=&]RACK1[/font][font=宋体]可能是[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]的结合蛋白。[/font][/b][font=&]RACK1[/font][font=宋体]是一种被报道能够增强癌症中[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]相关信号传导以及促进炎症和肾纤维化的蛋白质。免疫沉淀和免疫荧光分析证实了[/font][font=&]HBZY-1[/font][font=宋体]细胞中[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]和[/font][font=&]RACK1[/font][font=宋体]之间的内源性结合。需要注意的是，[/font][b][font=&]HG[/font][font=宋体]增强了这两种蛋白质之间的互作，而鸦胆子苦素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]抑制[/font][font=&]HG[/font][font=宋体]应激下[/font][font=&]Gal-1[/font][font=宋体]和[/font][font=&]RACK1[/font][font=宋体

[size=20px][color=#93c6bc][b]鉴别[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]｜[/color][/size] [b][font=宋体][/font][/b] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体]（1）本品果皮粉末棕褐色。表皮细胞多角形，含棕色物。薄壁细胞多角形，含[color=var(--weui-LINK)]草酸钙簇晶[i][/i][/color]和方晶，簇晶直径约至30[/font]μ[font=宋体]m[/font][font=宋体]。石细胞类圆形或多角形，直径14[/font][font=&]～[/font][font=宋体]38[/font]μ[font=宋体]m[/font][font=宋体]。[/font] [font=宋体]种子粉末黄白色。种皮细胞略呈多角形，稍延长。胚乳和子叶细胞含糊粉粒。[/font] [font=宋体]（2）取本品粗粉1g，加50%甲醇50ml，超声处理30分钟，离心，取上清液回收溶剂至干，残渣加水50ml使溶解，用二氯甲烷50ml振摇提取，分取二氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取鸦胆子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取鸦胆苦醇对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以[color=var(--weui-LINK)]石油醚[i][/i][/color](60[/font][font=&]～[/font][font=宋体]90[/font][font=宋体]℃)乙酸乙酯-冰醋酸(5:8.5:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。[/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [size=20px][color=#93c6bc][b]检查[/b][/color][/size][size=16px][color=#e2a4a4]｜[/color][/size][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [b][font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体][/font] [font=宋体]杂质[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不得过2.5%（通则2301）。[/font] [b][font=宋体]水分[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不得过10.0%（通则0832第二法）。[/font] [b][font=宋体]总灰分 [/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]不得过6.5%（通则2302）。[/font] [b][font=宋体]【含量测定】[/font][/b][font=宋体] 照[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法（通则0521）测定。[/font] [b][font=宋体]色谱条件与系统适用性试验[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]聚乙二醇20000（PEG-20M）[color=var(--weui-LINK)]毛细管柱[i][/i][/color]（柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度0.25[/font]μ[font=宋体]m[/font][font=宋体]）；检测器温度为250℃（FID）；进样口温度为250℃；柱温为205℃；分流比为20:1。理论板数按油酸峰计算应不低于5000。[/font] [b][font=宋体]校正因子测定[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]取油酸对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1ml含3mg的溶液。精密量取5ml，置10ml具塞试管中，用氮气吹干，加入0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液2ml，置60℃水浴中皂化25分钟，至油珠全部消失，放冷，加15%三氟化硼乙醚溶液2ml，置60℃水浴中甲酯化2分钟，放冷；精密加入正己烷2ml，振摇，加饱和氯化钠溶液1ml，振摇，静置，取上层溶液作为对照品溶液。精密称取苯甲酸苯酯适量，加正己烷制成每1ml含8mg的溶液，作为内标溶液。精密量取对照品溶液和内标溶液各1ml，摇匀，吸取1[/font]μ[font=宋体]l[/font][font=宋体]，注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]，测定，计算校正因子。[/font] [b][font=宋体]测定法[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]取本品粗粉约3g，精密称定，加入石油醚（60[/font][font=&]～[/font][font=宋体]90[/font][font=宋体]℃）30ml，超声处理（功率280W，频率42kHz）30分钟，滤过，滤液置50ml量瓶中，用石油醚（60[/font][font=&]～[/font][font=宋体]90[/font][font=宋体]℃）15ml，分次洗涤滤器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加石油醚（60[/font][font=&]～[/font][font=宋体]90[/font][font=宋体]℃）至刻度，摇匀。精密量取3ml，自“置10ml具塞试管中，用氮气吹干”起，同对照品溶液制备方法制备供试品溶液。精密量取供试品溶液和内标溶液各1ml，摇匀，吸取1[/font]μ[font=宋体]l[/font][font=宋体]，注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]，测定，即得。[/font] [font=宋体]本品按干燥品计算，含油酸（[/font]C[sub]18[/sub]H[sub]34[/sub]O[sub]2[/sub][font=宋体]）不得少于8.0%。[/font]